活血潛陽祛痰方對肥胖高血壓大鼠心肌肥厚相關指標的影響

王 靜，董振華，符德玉,2*

（1.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院心內科，上海 200437；2.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院心血管研究室，上海 200437）

肥胖是心血管疾病的獨立危險因素[1]，可加劇高血壓靶器官損害及其心血管并發癥的發生發展進程[2]。肥胖高血壓心肌肥厚顯著增加惡性心血管事件的發生，是亟待解決的治療難點。AngⅡ是腎素—血管緊張素系統中的重要效應分子，具有生長因子樣作用，可誘導心肌肥厚[3]。氧化應激可引起內皮功能障礙、血管損傷，也是導致高血壓心肌肥厚的重要病理因素之一[4-5]。研究[6]報道，AngⅡ可通過氧化應激途徑參與心肌肥厚的發生。本研究以高脂飲食喂養自發性高血壓大鼠（Spontaneous hypertensive rats，SHR）誘導建立的肥胖高血壓大鼠模型為研究對象，施以活血潛陽祛痰方干預治療，檢測心肌肥厚相關指標，探討活血潛陽祛痰方治療肥胖高血壓心肌肥厚的可能機制。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級雄性SHR 120只，體質量（150±20）g，性別相匹配的Wistar-Kyoto大鼠（WKY）12只，5周齡，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物許可證號：SCXK（北京）2016-0006。所有大鼠在上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院實驗動物中心飼養室適應性喂養1周后進行實驗。

1.2 藥物 活血潛陽祛痰方為在丹蛭降壓方基礎上加減[7]，由丹參、石決明、川芎、鉤藤、桑寄生、山楂等藥物組成。按照課題組前期研究[8]，大鼠用量為臨床用量的18 倍，委托南京軍區總醫院藥劑科按標準流程制備浸膏備用。纈沙坦，規格：80 mg/粒，7粒/盒，由諾華制藥公司（北京）生產，國藥準字：H20040217。

1.3 主要試劑與儀器 MDA生化試劑盒（貨號：A003-1-2），Mn-SOD生化試劑盒（貨號：A001-2-2），GSH-Px生化試劑盒（貨號：A005），以上均由南京建成生物工程研究所提供。Ang II酶聯免疫試劑盒，由上海源葉生物科技有限公司提供。多功能酶標儀（BioTek），臺式高速冷凍離心機（Eppendorf），以上由上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院中西醫結合研究所提供。高分辨率小動物超聲影響系統：Vevo2100，探頭：MS250，動物麻醉機：Vaporizer，超聲診斷儀：SuperSonic Aixplorer，以上由上海市東方醫院提供。

1.4 實驗分組及造模 大鼠適應性喂養1周后，根據SHR體質量隨機篩選出12只繼續喂養普通飼料（高血壓組，n=12），余108只喂養高脂飼料（配方參考文獻[9]改進：普通飼料60%、豬油12%、蔗糖5%、蛋黃粉10%、奶粉3%、生花生4.7%、麻油1%、食鹽2%、膽固醇2%、膽鹽0.3%，委托上海普路騰生物科技有限公司制作，4℃冷藏保存，每日投放）。造模干預10周后將108只高脂飼料喂養的SHR中體質量位于上游前1/3的大鼠（n=36）選為肥胖高血壓大鼠[10]，用于后期研究。

1.5 藥品干預方案 36只肥胖高血壓大鼠按體質量隨機分為3組，各12只。給藥分組：WKY（正常血壓組，n=12），普通飼料+正常飲用水灌胃；高血壓組（n=12），普通飼料+正常飲用水灌胃；模型組（n=12），高脂飼料+正常飲用水灌胃；纈沙坦組（n=12），高脂飼料+30 mg/（kg·d）灌胃；活血潛陽祛痰方組（n=12），高脂飼料+生藥38.7 g/（kg·d）灌胃。藥物干預10周。

1.6 觀察指標及檢測方法

1.6.1 各組大鼠心臟超聲參數檢測 末次藥物干預結束后，大鼠行脫毛處理，異氟烷吸入麻醉滿意后，采用高分辨率小動物超聲儀進行心臟超聲檢查，檢測項目包括LVM、LVIDd、IVSd、LVPWd，每只大鼠均取3個心動周期進行測量，取平均值。每組檢測3只。

1.6.2 標本取材 末次給藥結束后，大鼠禁食不禁水12 h后取材。大鼠稱重并記錄體質量（BW），2%的戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射，麻醉滿意后固定，胸腹部脫毛，75%酒精消毒皮膚，暴露腹腔，以一次性采血針行腹主動脈取血8～10 mL，離心，吸取上層血清，分裝置于-80 ℃冰箱中保存備用。

1.6.3 各組大鼠心臟質量指數檢測 腹主動脈取血結束后，迅速開胸取出心臟，用預冷的生理鹽水沖洗干凈殘余血液，濾紙吸干水分后，用微型電子天平稱取心臟質量（HW），并結合BW計算心臟質量指數（HMI）：HMI=HW/BW，評估心肌肥厚程度。

1.6.4 血清Ang II檢測 利用ELISA試劑盒檢測血清Ang II水平，按照上海源葉生物科技有限公司提供的試劑盒說明書進行操作。每組檢測6只。

1.6.5 氧化應激指標檢測 利用生化試劑盒檢測血清脂質過氧化物MDA及抗氧化酶（CAT、Mn-SOD、GSHPx）水平，分別按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說明書進行操作。每組檢測6只。

1.7 統計學方法 本研究采用Excel進行數據整理，采用SPSS 25.0軟件進行數據處理。計量資料符合正態分布及方差齊性時以均數±標準差（±s）表示，多樣本均數比較采用One-Way ANOVA及SNK多重比較。以P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠超聲心動圖指標比較 見表1。

表1 各組大鼠超聲心動圖指標比較（±s，n=3）

表1 各組大鼠超聲心動圖指標比較（±s，n=3）

注：與正常血壓組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與高血壓組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

2.2 各組大鼠心臟質量/體質量（HW/BW）數值比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠HW/BW數值分別為（3.27±0.72）mg/g、（3.70±0.23）mg/g、（4.04±0.17）mg/g、（3.45±0.09）mg/g、（3.48±0.13）mg/g。高血壓組與模型組大鼠的HW/BW值均明顯高于正常血壓組水平（P＜0.05或P＜0.01）；模型組HW/BW值高于高血壓組水平（P＜0.05）；藥物干預后，纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的HW/BW值均明顯低于模型組（P＜0.01）。

2.3 各組大鼠血清Ang Ⅱ水平比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠血清Ang Ⅱ含量分別為（112.23±14.17）pg/mL、（263.29±26.20）pg/mL、（378.58±33.84）pg/mL、（340.67±31.06）pg/mL、（335.65±34.05）pg/mL。高血壓組與模型組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均明顯高于正常血壓組（P＜0.01）；模型組血清Ang Ⅱ水平明顯高于高血壓組（P＜0.01）；藥物干預后，纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均低于模型組（P＜0.05）。

2.4 各組大鼠氧化應激指標MDA、CAT、Mn-SOD、GSH-Px水平比較 見表2。

表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標比較（±s，n=6）

表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標比較（±s，n=6）

注：與正常血壓組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與高血壓組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

3 討論

心臟重塑是指由心臟負荷或損傷引起的心臟大小、形狀、成分和功能的改變，心肌肥厚是其重要表現之一[11]。肥胖會引起心臟形態與功能的改變，肥胖與高血壓對心肌肥厚產生交互、疊加作用，肥胖增加高血壓發生心肌肥厚的風險[12-13]。研究[14]報道，SHR是研究人類高血壓心肌肥厚的經典模型。本研究中，SHR的HW/BW、LVM、IVSd、LVPWd較正常血壓大鼠WKY升高，LVIDd有下降趨勢，表現出向心性心肌肥厚，且高脂飲食喂養構建的肥胖高血壓大鼠心肌肥厚更加明顯。活血潛陽祛痰方干預10周后可明顯改善肥胖高血壓大鼠心肌肥厚。

肥胖高血壓多合并代謝綜合征，歐洲高血壓指南推薦其降壓治療應以阻斷腎素—血管緊張素—醛固酮系統為首選方案[15]。腎素—血管緊張素系統的過度激活在肥胖相關的心肌肥厚中發揮重要作用[16]，AngⅡ的產生是SHR早期心肌肥厚發生發展的重要機制[17-18]。本研究中，肥胖高血壓大鼠循環AngⅡ含量明顯升高，活血潛陽祛痰方治療后可有效降低血清AngⅡ含量，改善肥胖高血壓心肌肥厚。活性氧的合成與抗氧化防御系統對活性氧的清除之間的不平衡，會誘發氧化應激，其在心肌肥厚的發生發展過程中起到重要作用[19-20]。證據表明，AngⅡ參與了SHR模型中活性氧介導的氧化應激的發生[21]，病理條件下，活性氧增加可能是AngⅡ引起心肌肥大的潛在機制，其可通過傳遞AngⅡ等細胞外信號，進而激活下游肥大信號激酶和轉錄因子引起心肌肥厚[22]。本研究發現，肥胖高血壓大鼠表現出更高的氧化應激狀態，活血潛陽祛痰方可通過降低血清MDA含量以及提高CAT活力、Mn-SOD含量來改善其氧化應激水平。

符德玉教授認為“陽亢、痰濁、血瘀”是肥胖高血壓及其靶器官損害的主要病理因素，并在此基礎上總結出活血潛陽祛痰方共奏平肝潛陽、祛痰化濕、活血化瘀之功，臨床中已取得顯著療效。本研究中，活血潛陽祛痰方可抑制肥胖高血壓大鼠心肌肥厚，具有靶器官保護作用。其作用機制與降低血清Ang II含量，降低脂質過氧化物MDA、升高抗氧化酶CAT活力、提高Mn-SOD含量從而降低氧化應激水平有關，但分子作用機制尚需要深入研究。