大蔥水提物對(duì)辣椒疫病的控制作用及其活性成分分析

陳煜文 何超 陳夕軍 賀 振 魏利輝 劉郵洲 黃奔立

摘要 為明確大蔥水提物對(duì)辣椒疫病的控制效果及其主要活性成分，通過室內(nèi)毒力、田間防效以及GC-MS聯(lián)用測(cè)定發(fā)現(xiàn)，大蔥莖葉與根水提物均對(duì)辣椒疫病菌有一定抑制作用，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)。在含300 mg/mL根水提物的平板上培養(yǎng)2 d，辣椒疫病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率高達(dá)81.50%;但隨著時(shí)間的推移，抑制作用減弱，5 d 后，200 mg/mL根和莖葉水提物對(duì)病菌的抑制率僅為34.18%和25.62%。用300 mg/mL大蔥水提物灌根，對(duì)辣椒疫病的防效可達(dá)50%左右。將大蔥與辣椒輪作或混栽可有效降低田間辣椒疫病的病情，防病效果分別為 40.67%和 41.21%。GC-MS 測(cè)定結(jié)果表明，大蔥根和莖葉水提物中分別含有 14種和28 種揮發(fā)性物質(zhì)，且均以有機(jī)硫化物為主，分別占總揮發(fā)性物質(zhì)的 82.17%和99.40%，這些硫化物對(duì)辣椒疫病菌的生長(zhǎng)均有較強(qiáng)的抑制作用。這些結(jié)果表明，大蔥產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)在辣椒疫病的綠色防控上有很好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞 控制作用; 活性成分; 水提物; 辣椒疫病; 大蔥

中圖分類號(hào)： S 482.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019149

Control effect of the aqueous extract from Allium fistulosum on

pepper phytophthora blight and its active components

CHEN Yuwen1， HE Chao1， CHEN Xijun1， HE Zhen1， WEI Lihui2， LIU Youzhou2， HUANG Benli1

（1. College of Horticulture and Plant Protection， Yangzhou University， Yangzhou 225009， China;

2. Institute of Plant Protection， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014， China）

Abstract

To determine the effect of the aqueous extracts welsh onion from Allium fistulosum on the growth of Phytophthora capsici and pepper phytophthora blight， the extracts from different parts of the welsh onion plant were added into the medium or poured into the rhizosphere soil of pepper. The results showed that the aqueous extracts from different parts of welsh onion had significantly inhibitory effects on the growth of P.capsici. After 2 days， the fungus cultured in the medium containing 300 mg/mL aqueous extracts from welsh onion root was significantly inhibited and the inhibition rate reached 81.50%. As time went on， the effects of the extracts from welsh onion root and stem on the pathogen growth gradually decreased and the inhibition rates were only 34.18% and 25.62%， respectively， at the 5th day. The solution containing 300 mg/mL aqueous extracts from welsh onion was poured into the rhizosphere of pepper， which reduced the severity of pepper phytophthora blight by about 50%. Rotation or mixed planting with welsh onion could effectively reduce the disease of pepper blight， and the control effects were up to 40.67% and 41.21%， respectively. The results of GC-MS showed that there were 14 or 28 kinds of volatile substances in the aqueous extract of onion root and stem/leaf， mainly organic sulfide， accounting for 82.17% or 99.40%， respectively. Some organic sulfides had strong inhibitory effect on the growth of P.capsici. These results indicated that volatile substances from welsh onion had a good application prospect for the green prevention and control of pepper blight.

Key words

control effect; activity component; aqueous extract; pepper phytophthora blight; welsh onion

辣椒是人們喜愛的一種蔬菜，在世界各地均有種植，在過去30年間，辣椒的種植面積增加了40多倍[1]。我國(guó)是世界辣椒生產(chǎn)和消費(fèi)的第一大國(guó)，且近年來種植面積仍在逐年增加[2]。辣椒適應(yīng)性強(qiáng)、品種多、經(jīng)濟(jì)效益高，已成為許多地區(qū)農(nóng)民增收、農(nóng)村發(fā)展的重要支柱產(chǎn)品[3]。但辣椒在生產(chǎn)過程中可遭受多種病害的侵襲，特別是辣椒疫病，已成為全世界辣椒生產(chǎn)過程中最具破壞性的病害[ 45]。

辣椒疫病是由Phytophthora capsici Leon.引起的一種毀滅性病害，可經(jīng)雨水、土壤、氣流等多種途徑傳播，除引起大面積死秧外，還可造成葉片枯萎、果實(shí)腐爛、莖稈出現(xiàn)壞死斑，以及整株萎蔫死亡，這些癥狀受寄主抗性、生育期、病菌侵染點(diǎn)和環(huán)境條件的影響[1， 67]。由于該病傳播途徑多，生產(chǎn)上經(jīng)常呈暴發(fā)性危害，因此單一的防治方法往往達(dá)不到理想的防控效果。而化學(xué)農(nóng)藥的過量使用，使得水體和土壤等受到污染，辣椒產(chǎn)品存在食用安全性問題。因此，采用肥水管理、輪作、日光能處理等物理與栽培措施，結(jié)合篩選安全、有效的生物源農(nóng)藥，從而達(dá)到辣椒疫病的有效控制顯得非常重要。

生物源物質(zhì)主要來源于動(dòng)物、植物和微生物及其次生代謝產(chǎn)物，這些物質(zhì)對(duì)環(huán)境相對(duì)友好，已有多種被開發(fā)成農(nóng)藥、肥料、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和生物誘抗劑等[89]。大蔥Allium fistulosum作為一種重要的蔬菜和調(diào)味品，具有治療感冒、預(yù)防癌癥、降低血壓和抵抗病毒的作用，其粗提物中的某些組分已被證明有藥用和殺菌功能，如蔥辣素和大蔥油等[1011]。大蔥總提取物對(duì)黃瓜和番茄疫病菌的菌絲生長(zhǎng)有明顯抑制作用，且在一定濃度下對(duì)棉花枯萎病菌、棉花黃萎病菌和黃瓜枯萎病菌的孢子萌發(fā)抑制率達(dá)100%[1213]。有研究表明，大蔥抑菌成分中包含大量含有二硫鍵的化合物，這些化合物以真菌含有的-SH位點(diǎn)作為作用靶點(diǎn)，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制病原菌幾丁質(zhì)酶和蛋白酶活性，抑制病菌菌絲代謝相關(guān)蛋白質(zhì)的合成[14]。但到目前為止，大蔥提取物中到底是哪些物質(zhì)在起作用，這些物質(zhì)在田間控病，特別是對(duì)辣椒疫病的控制效果如何還不得而知。本文通過室內(nèi)毒力測(cè)定與田間混栽輪作試驗(yàn)，結(jié)合大蔥水提物抗菌成分分析，以期找到適合于辣椒疫病防控的大蔥次生代謝產(chǎn)物，從而為新型農(nóng)藥的研制以及防治辣椒疫病提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試植物

辣椒品種：‘茄門甜椒，易感辣椒疫病。用 55℃溫水浸泡辣椒種子 3～4 h，清水淋洗后將種子放入墊有潮濕紗布的培養(yǎng)皿中，26℃恒溫培養(yǎng)箱中催芽。待種子露白后穴播于裝有伯爵泥炭BM-2育苗基質(zhì)的塑料穴盤中，每穴 3～4 粒種子，22～24℃溫室中培養(yǎng)至6片真葉，備用。

大蔥品種：‘胡蔥，購(gòu)自揚(yáng)州市區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。氣溫為13～20℃時(shí)將種子播于試驗(yàn)田中，待大蔥莖葉長(zhǎng)至15～17 cm，選取長(zhǎng)勢(shì)相近的植株備用。

1.1.2 供試菌株

辣椒疫病菌Phytophthora capsici YM-103，分離自江蘇的辣椒疫病病株，經(jīng)形態(tài)與分子生物學(xué)鑒定，并通過柯赫氏法則驗(yàn)證。

1.2 大蔥水提物的制備

將新鮮的大蔥洗凈晾干至表面無水珠后，分別稱取50 g莖葉和根，用10%次氯酸鈉表面消毒30 min，無菌水沖洗3～5次后，剪碎并加入少量石英砂研磨。勻漿后雙層濾紙抽濾，濾液用無菌水定容至20 mL，配成2 500 mg/mL（大蔥鮮重/體積）母液，經(jīng)細(xì)菌濾器過濾后備用。

1.3 大蔥水提物對(duì)辣椒疫病菌生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定

向溫?zé)岬鸟R鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中加入大蔥水提物母液，配制成含水提物濃度為200、250? mg/mL和300 mg/mL的培養(yǎng)基，倒平板。用打孔器從活化的辣椒疫病菌菌落邊緣取直徑5 mm 的菌絲塊，置于含不同濃度大蔥水提物的平板中央，28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，2 d后開始測(cè)量菌落直徑，每天1次，共測(cè)量4次，計(jì)算抑制率。每處理重復(fù)4次，以清水作對(duì)照。

抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%;

菌落直徑=測(cè)量值-接種菌絲塊直徑。

1.4 大蔥水提物對(duì)辣椒疫病的防效測(cè)定

1.4.1 孢子懸浮液的制備

參照Chen等[15]的方法制備辣椒疫病菌孢子液：將辣椒疫病菌經(jīng)活化后接種于胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基，25℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)4 d，再置于光照培養(yǎng)箱中同溫度培養(yǎng)2 d。向培養(yǎng)皿中加入10 mL無菌水，于室溫下10 min，4℃下10 min，室溫下20 min，即有大量游動(dòng)孢子釋放。將孢子洗脫，經(jīng)兩層紗布過濾后加無菌水稀釋，配制成106個(gè)/mL的孢子懸浮液用于接種。

1.4.2 防效測(cè)定

將長(zhǎng)勢(shì)一致的 6 葉期辣椒苗移栽至裝有滅菌土的塑料盆中，7 d 后接種辣椒疫病菌，每株澆灌孢子懸浮液 10 mL。1 h 后，將配制好的200、250、300 mg/mL 的大蔥根和莖葉水提液倒入辣椒苗近基部土壤中，每盆 15 mL，每處理 10 盆，重復(fù) 3 次，以倒入清水作對(duì)照。保濕 24 h，7 d 后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)與防治效果。辣椒疫病嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[16]：0 級(jí)，無病癥;1 級(jí)，幼苗根部輕微變黑，葉片不萎蔫或可恢復(fù)性萎蔫; 2 級(jí)，幼苗根莖部變黑達(dá) 1～2 cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，下部葉片偶有脫落;3 級(jí)，幼苗根莖部變黑超過 2 cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯;4 級(jí)，幼苗根部變黑縊縮，除生長(zhǎng)點(diǎn)外全部落葉或植株萎蔫;5 級(jí)，整株枯死。

病情指數(shù)=∑（病級(jí)×該病級(jí)病株數(shù)）/5×調(diào)查總株數(shù)×100;

防效=（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100%。

1.5 與大蔥輪作或混栽對(duì)辣椒疫病的控制效果測(cè)定

于3月上旬移栽‘茄門甜椒苗，移栽后15 d用106個(gè)/mL孢子懸浮液灌根接種，保持田間濕度，等田間植株普遍發(fā)病后（病株率大于80%）進(jìn)入正常管理，作為病田土備用。同年9 月中旬，在清除田間病殘?bào)w后，分別種植大蔥和‘茄門甜椒。次年 3 月上旬，分別取大蔥田和辣椒田表層土（<20 cm）裝盆（盆口直徑14 cm，高10 cm，裝土1 000 g）備用。將長(zhǎng)勢(shì)一致的‘茄門甜椒苗（6葉期）移至裝有病土的盆中，每盆1株，每種病土栽種10盆，3次重復(fù)。保濕24 h，7 d后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)與防治效果。

將辣椒疫病病莖剪成0.5 cm小段，每盆加入10 g與滅菌土混勻，模擬田間病殘?bào)w，將長(zhǎng)勢(shì)一致的大蔥與‘茄門甜椒苗（6葉期）混栽于盆中，兩植株相距 5 cm，以單獨(dú)移栽甜椒苗為對(duì)照。每處理10盆，重復(fù)3次，保濕24 h，25℃溫室中培養(yǎng)30 d后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)與防治效果。

1.6 大蔥水提物中揮發(fā)性物質(zhì)的成分測(cè)定

稱取大蔥根、莖葉各20 g，分別加入200 mL去離子水于組織粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎的樣品倒入 250 mL錐形瓶中，加入轉(zhuǎn)子，用封口膜密封，放在40℃恒溫磁力攪拌器上快速攪拌。將固相微萃取裝置（美國(guó)Supelco公司）的萃取頭（PDMS，100 μm）針頭插入封口膜，并小心將萃取頭推出，同時(shí)用鐵架臺(tái)固定固相微萃取手柄。自萃取頭推出后開始計(jì)時(shí)，對(duì)揮發(fā)物提取2 h。在萃取頭捕集樣品前，先將其在氣相色譜進(jìn)樣口內(nèi)（250℃）熱解吸20 min，以保證萃取頭中無雜質(zhì)和其他污染物。

氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)：使用美國(guó)惠普公司HP6890GC-HP5973MS毛細(xì)管柱（HP-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm）。色譜條件為： GC進(jìn)樣口溫度 280℃，爐溫程序升溫至50℃并保持3 min，然后以8℃/min的速度升溫至300℃，保持3 min;EI離子源，離子源溫度280℃，載氣為氦氣（流速1 mL/min），電子轟擊能量70 eV，質(zhì)量掃描范圍 50～550 amu，不分流。 對(duì)大蔥水提物總離子流圖中的峰面各進(jìn)行歸一化法測(cè)量，明確各組分的百分含量，各組分圖譜在 NIST譜庫(kù)中自動(dòng)檢索后選用高相關(guān)結(jié)果。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析均使用DPS V 6.55軟件中Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行。

2 結(jié)果分析

2.1 大蔥水提物對(duì)辣椒疫病菌生長(zhǎng)的抑制作用

不同濃度的大蔥根和莖葉水提物對(duì)辣椒疫病菌均有抑制作用，且濃度越高，抑制作用越強(qiáng)。辣椒疫病菌在含300 mg/mL大蔥莖葉或根水提物的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)2 d，病菌生長(zhǎng)抑制率分別為78.20%和81.50%;但是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各濃度處理對(duì)病菌的抑制作用均有所下降，5 d后300 mg/mL大蔥莖葉或根水提物對(duì)病菌生長(zhǎng)的抑制率降至66.14%和67.91%（表1）。這一結(jié)果表明，大蔥水提物中起抑菌作用的可能是一些揮發(fā)性物質(zhì)，隨著時(shí)間的推移因物質(zhì)揮發(fā)導(dǎo)致抑制作用下降。

2.2 大蔥水提物、大蔥與辣椒輪作或混栽對(duì)辣椒疫病的控制效果

不同濃度大蔥莖葉和根水提物都對(duì)辣椒疫病有一定的控制作用，且濃度越高，控病效果越好。以300 g/mL 莖葉和根水提物灌根，對(duì)辣椒疫病的防效分別為可達(dá)52.67%和49.88%;相同濃度的莖葉水提物和根水提物對(duì)辣椒疫病的防治效果差異不顯著 （圖1）。將大蔥與辣椒輪作或混栽對(duì)辣椒疫病亦有一定的控制效果，防效可分別達(dá) 40.67% 和 41.21%，說明采用與大蔥輪作或混栽的方式是田間防控辣椒疫病的一種有效手段（表2）。

2.3 大蔥水提物主要化學(xué)成分分析結(jié)果

對(duì)大蔥根和莖葉水提物樣品揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行 GC-MS 分析，得各水提物總離子流圖。結(jié)果表明，大蔥根和莖葉水提物中揮發(fā)性物質(zhì)均以硫化物為主，分別占總揮發(fā)性物質(zhì)的 99.40%、82.17%，但其組成成分和含量有明顯差別。根水提物中揮發(fā)性物質(zhì)有 14 種，主要成分為二丙基二硫醚（61.33%）、1，2二硫雜環(huán)戊烷（21.16%）、2，4-二甲基噻吩（12.36%）和二丙基三硫醚（3.8%）;莖葉水提物中揮發(fā)性物質(zhì)有 28 種，主要成分為2，4-二甲基噻吩（52.92%）、二丙基二硫醚（17.16%）、2-乙基反式2-丁烯醛（9.09%）、2-硫代羧基-氧-甲基肼酯（4.2%）、甲基異丙基二硫醚（3.74%）、2，6-二叔丁基對(duì)苯二酚（2.86%）和甲基丙烯基二硫醚（2.49%）（表3、圖2）。由表3 可知，大蔥根和莖葉水提物中的硫化物主要以二硫化物和一硫化物為主，一硫化物以2，4-二甲基噻吩為主，二硫化物以二丙基二硫醚和1，2-二硫雜環(huán)戊烷為主。

2.4 外源添加大蔥提取物純品對(duì)辣椒疫病菌生長(zhǎng)的影響

分別向培養(yǎng)基中加入大蔥揮發(fā)物主成分二丙基二硫醚和2，4-二甲基噻吩，在10～100 mg/L濃度下，這兩種物質(zhì)對(duì)辣椒疫病菌的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)。且2，4-二甲基噻吩對(duì)辣椒疫病菌的抑制作用明顯好于二丙基二硫醚，在100 mg/L濃度下其抑制率可高達(dá)87.89%（圖3）。

3 討論

大蔥不僅是人們喜愛的調(diào)味料之一，也是一味中藥材，其含有多種微量元素、蛋白質(zhì)、氨基酸和揮發(fā)油等，這些物質(zhì)不僅可以解毒、舒張血管，還具有減肥、抗氧化和殺菌消炎的作用[1721]。

從20世紀(jì)70年代開始，就有人從事大蔥揮發(fā)物成分研究，但不同提取方法、不同大蔥種類與不同分析方法獲得的成分及其含量不同[2224]。Kuo等[25]利用GC和GC-MS方法從大蔥有機(jī)溶劑萃取物中鑒定出67種揮發(fā)性物質(zhì)，其中多種是此前未有報(bào)道的。目前，分離和鑒定大蔥揮發(fā)性物質(zhì)的方法主要有減壓蒸汽蒸餾、液液連續(xù)萃取、氣相色譜和氣相色譜質(zhì)譜等方法，獲得的主要成分亦大多為二丙基二硫化合物、3-苯基-1，4-十二碳二烯、十六烷、5-羥甲基糠醛、己醛和2-丙烯基丙基二硫化合物等[14， 21]。黃雪松[26] 和郭海忱等[27]分別采用GC-MSD和GC-MS測(cè)定了大蔥中揮發(fā)油成分，發(fā)現(xiàn)這些成分多不相同，即使有些成分相同（如硫醚類和噻吩）其差異也較大。后者在大蔥揮發(fā)油中得到的最大含量組分2-甲基-2-戊烯醛在前者的測(cè)定結(jié)果中并未出現(xiàn)。比較發(fā)現(xiàn)，這些提取方法多首先通過蒸餾，然后再進(jìn)行萃取并進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用，在這一過程中可能有大量的揮發(fā)性成分被損失。本研究將大蔥組織搗碎后直接連接固相微萃取裝置，并連接氣相色譜儀測(cè)定其揮發(fā)物質(zhì)，效率高，損耗小，應(yīng)更能準(zhǔn)確測(cè)定大蔥水提物中揮發(fā)物的種類及各物質(zhì)含量。

大蔥是傳統(tǒng)的藥用植物，對(duì)于治療人類疾病如感冒、腹痛、頭痛和心臟病等均有良好效果。近年來，蔥蒜類植物也被用于與其他蔬菜輪作、間作來控制蔬菜病蟲害。生物測(cè)定結(jié)果表明，大蔥提取物對(duì)多種動(dòng)植物病原菌，如葡萄球菌、腸炎沙門氏菌、黑曲霉、青霉、尖孢鐮刀菌和大麗輪枝菌等的生長(zhǎng)有較好的抑制作用[28]。盆栽試驗(yàn)表明，大蔥提取物對(duì)黃瓜枯萎病、辣椒疫病和辣椒根腐病有很好的預(yù)防和控制效果[14]。本文通過灌根施用大蔥提取物，以及將大蔥與辣椒進(jìn)行輪作和混栽，發(fā)現(xiàn)幾種方法均可減輕田間辣椒疫病的發(fā)生，防效均在40%以上。這些結(jié)果說明，對(duì)于植物病害的生物防控來說，大蔥及其提取物具有較好的潛力與應(yīng)用前景。

盡管目前對(duì)于大蔥提取物和揮發(fā)性物質(zhì)的鑒定研究有很多，但有關(guān)其中到底是哪些物質(zhì)在起殺菌控病作用，目前還未有相關(guān)報(bào)道。楊粟艷等[13]分別研究了大蔥總提取物、蛋白成分、多糖成分和揮發(fā)成分的抑菌作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅總提取物和揮發(fā)性成分對(duì)黃瓜枯萎病菌的孢子萌發(fā)與菌絲生長(zhǎng)有抑制作用，而大蔥蛋白及多糖成分對(duì)供試菌均無抑制效果，說明大蔥的抑菌物質(zhì)可能主要在其揮發(fā)物中。作者前期研究發(fā)現(xiàn)，在蔥蒜中普遍存在的硫醚、二硫醚和三硫醚等硫化物對(duì)辣椒疫病菌有很好的抑制作用[29]。將大蔥根與莖葉揮發(fā)物中的主成分二丙基二硫醚和2，4-二甲基噻吩分別加入培養(yǎng)基中，同樣可有效抑制辣椒疫病菌的生長(zhǎng)。目前，在生產(chǎn)上硫醚類和噻吩類殺菌劑已得到廣泛應(yīng)用，噻吩類殺菌劑主要有噻吩酰胺類、Stroburins類、聯(lián)芳香環(huán)類、磺酰胺類、噻吩脲類及其他類7類，防治對(duì)象包括稻瘟病、霜霉病、疫病、炭疽病和白粉病等，日本日產(chǎn)報(bào)道的化合物49除具有很強(qiáng)的殺菌作用外，在1 000 mg/L濃度下對(duì)黑尾葉蟬的殺滅效果達(dá)100%[30]。本研究在大蔥莖葉中發(fā)現(xiàn)的2，4-二甲基噻吩在100 mg/L濃度下對(duì)辣椒疫病菌的抑制效果達(dá)87.89%，具有很好的開發(fā)成高效殺菌劑的潛力。

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（責(zé)任編輯：田 喆）

收稿日期： 20190325?? 修訂日期： 20190604

基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-24-C-01）;江蘇省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（現(xiàn)代農(nóng)業(yè)）項(xiàng)目（BE 2018359）;江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[CX（18）2005]

致? 謝： 參加本試驗(yàn)部分工作的還有江代禮、譚翰杰、張能和紀(jì)燁斌等同學(xué)，特此一并致謝。

通信作者 E-mail：陳夕軍xjchen@yzu.edu.cn;黃奔立yzhbl2003@163.com

#為并列第一作者