福建佛手粗多糖的最佳提取工藝優化研究

陳 嬋，黃曉梅，劉彩珍，黃 靖，熊世英

（福建農業職業技術學院，福建福州 350119）

0 引言

佛手 （Citrus medica L，Var.Sarcodactylis），又名“佛手柑”“佛手香櫞”“福壽橘”等，為蕓香科柑橘屬植物佛手的果實，佛手果實成熟后呈黃色，其性溫味辛，苦、酸，入肝、脾、肺、經，具有較高的藥用價值[1-2]。在我國，佛手根據產地的不同，主要有廣東和廣西的“廣佛手”、四川的“川佛手”、浙江的“金佛手”、福建的“建佛手”[3]。有關金佛手與廣佛手研究資料較多，而建佛手的研究相對較少。

近年來，佛手中揮發油[4]、總黃酮[5-6]、多糖[7-9]等有效成分的提取分離和功效都取得較大進展，佛手的藥用價值依然為研究熱點，傳統中藥一般采用水熬煮的方法，其中水溶性化合物為主要成分。佛手多糖按提取部位不同可分為佛手果實多糖和佛手葉多糖。目前，常用于多糖提取的方法主要有熱水浸提法[10]、復合酶提取法[11]、超聲波輔助提取法[12]、微波輔助提取法[13]等，熱水水提法雖然耗時長、提取率相對低，但其操作簡便且成本低廉，是國內外多糖提取最常用的方法。以福建佛手為原料，研究熱水浸提法提取佛手多糖的最優工藝，以期獲得較高的粗多糖得率，為福建佛手資源的進一步開發利用提供理論依據。

1 材料儀器與方法

1.1 材料與試劑

佛手，產自向陽賢芳佛手；葡萄糖、苯酚、無水乙醇、硫酸，均為分析純。

1.2 主要儀器

BS210S型電子天平，塞多利斯北京天平有限公司產品；BL1025A型多功能料理機，廣東美的生活電器制造有限公司產品；722S型可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司產品；KQ-300VDV型三頻數控超聲波清洗機，昆山超聲儀器有限公司產品；TDL-5型低速臺式大容量離心機，上海安亭科學儀器廠產品。

1.3 方法

1.3.1 多糖含量的測定方法[14]

采用苯酚硫酸法：精確稱取干燥恒質量后的葡萄糖10 mg，用蒸餾水定容至250 mL，分別吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8 mL，各以蒸餾水補至2.0 mL，加入6%苯酚水溶液1.0 mL后迅速加入濃硫酸5.0 mL，搖勻冷卻，于室溫下放置20 min后在波長490 nm處測定吸光度，以0管作空白對照，得出線性方程。

將樣品溶液多糖濃度調整至測定范圍，精確吸取1.0 mL按上述步驟操作，每個樣品液重復測定3次，測定吸光度，并計算建佛手中多糖含量。

1.3.2 建佛手粗多糖的提取工藝

將佛手果實清洗、烘干至恒質量，粉碎，過20目篩。粉碎過篩后的建佛手按照料液比為1∶20～1∶100加入蒸餾水浸泡20 min，按提取溫度為60～100℃，提取時間為30～240 min提取粗多糖，提取液以轉速4 000 r/min離心15 min，取上清液定容至100 mL，測定佛手多糖的含量，并計算佛手多糖得率。計算公式如下：

式中：C——經過稀釋后測定的多糖含量，μg；

V1——提取后得到的上清體積，mL；

N——稀釋倍數；

V2——用于測定的上清體積，mL；

m——用于提取的銀耳質量，mg。

1.3.3 正交試驗設計

根據單因素試驗最終結果確定正交試驗表，以正交試驗確定佛手果中粗多糖的最佳提取工藝參數。

準確稱取1 g烘干后的佛手干粉5份，以正交試驗得出的最佳提取工藝進行5次平行試驗，分別按照1.3.1中的方法進行多糖含量的測定，以驗證正交試驗結果。

1.3.4 數據分析

應用DPS數據處理系統進行數據分析。

2 結果與分析

2.1 標準曲線繪制

根據標準曲線測定方法，計算后得出線性方程：Y=0.073 3X-0.001 7，R2=0.999 6。

多糖標準曲線見圖1。

圖1 多糖標準曲線

2.2 料液比對建佛手粗多糖提取率的影響

準確稱取1 g的佛手粉，分別選用佛手物料與蒸餾水比例（料液比） 為1∶20，1∶40，1∶60，1∶80，1∶100時，提取溫度為80℃條件下提取1 h，考查料液比對建佛手粗多糖提取率的影響。

料液比對佛手多糖提取率的影響見圖2。

圖2 料液比對佛手多糖提取率的影響

由圖2可知，料液比對建佛手粗多糖提取率有較大的影響，料液比為1∶20～1∶60時，料液比增加佛手多糖的提取率提高。當料液比繼續提高到1∶80時，多糖的提取率開始略有下降。

2.3 提取溫度對建佛手粗多糖提取率的影響

精確稱量建佛手干粉，在料液比為1∶80，分析提取溫度在60，70，80，90，100℃條件下提取1 h，得出建佛手粗多糖最佳提取時間。

提取溫度對佛手多糖提取率的影響見圖3。

圖3 提取溫度對佛手多糖提取率的影響

由圖3可知，在1 h提取時間內，溫度越高越有利于佛手粗多糖的提取。在100℃條件下多糖提取率為3.99%，而60℃條件下提取時提取率為3.14%，提取率提高21%左右。

2.4 提取時間對建佛手粗多糖提取率的影響

稱取定量建佛手樣品，在料液比1∶80，提取溫度 80 ℃時，提取 30，60，90，120，150，180，210，240 min，得出佛手粗多糖提取的最優提取時間。

提取時間對佛手多糖提取率的影響見圖4。

由圖4可知，在80℃條件下，提取時間越長，佛手多糖的提取率越高。當提取時間為150 min時，提取率增加幅度開始減緩，提取時間240 min時，提取率開始下降。

圖4 提取時間對佛手多糖提取率的影響

2.5 正交試驗分析

根據單因素試驗的結果，選用表1中正交因素及水平進行正交試驗，得出建佛手粗多糖的最佳工藝提取條件。

正交試驗因素與水平設計見表1，正交試驗結果見表2。

表1 正交試驗因素與水平設計

表2 正交試驗結果

通過方差分析判斷正交試驗數據中3種受控制因素對試驗結果的影響。

正交設計方差分析見表3。

結果表明，建佛手多糖的提取工藝中，料液比及提取溫度對佛手多糖的提取率影響顯著，提取時間影響無明顯顯著性。從提取溫度影響的單因素試驗結果分析，提取時間越長，提取率越高，而正交試驗中提取時間并未明顯顯著，可能原因在于在正交試驗中選用提取時間的水平均為2 h后，而2 h前提取率增長速度快，2 h后提取率增幅不大。熱水浸提法提取佛手粗多糖最佳提取工藝條件為A3B1C3D2，即料液比1∶80，提取溫度80℃，提取時間180 min，此時提取率為4.45%。驗證試驗結果與正交試驗的結果一致。表明水提法提取建佛手多糖，工藝簡單、穩定，相對標準偏差小、數據準確。

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表3 正交設計方差分析

3 結論

福建佛手中富含多糖物質，采用熱水浸提的方法，在料液比1∶80，提取溫度80℃，提取時間180 min的條件下，佛手多糖的提取率可達4.45%。熱水浸提法對多糖結構影響較小，且工藝簡單、可操作性強。