Th1/Th2型細胞因子在HARRT免疫重建炎性綜合征中的分析*

薛 冰,閆 慧,景博瓊

新疆醫科大學第五附屬醫院檢驗科,新疆烏魯木齊 830011

高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)是目前治療人類免疫缺陷病毒(HIV)慢性感染和獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)最主要的手段，該療法在一定程度上能夠實現HIV和AIDS的免疫重建，延緩 HIV感染的疾病進程，提高AIDS患者的生活質量，延長其生命。但是有部分患者在HAART治療過程中，多數在抗病毒治療后3個月至6個月期間，對感染性致病源或非感染性致病源出現過度的炎性反應,導致臨床癥狀加重,表現為原本已有效治療的機會性感染惡化、出現新發感染等,稱為免疫重建炎性綜合征(IRIS)[1],本研究通過對HIV新發現且尚未治療者和既往感染并已規范啟動HARRT者(按有無發生IRIS進行分組)進行血清Th1型細胞因子白細胞介素(IL)-2、γ-干擾素(IFN-γ)和Th2型細胞因子IL-4、IL-10以及外周血中CD4+T細胞數量的測定，分析了Th1和Th2細胞因子在HARRT治療中和治療后發生IRIS時的變化特點。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年6月至2018年12月在新疆醫科大學第五附屬醫院艾滋病自愿咨詢檢測(VCT)門診就診的HIV攜帶者或AIDS患者共69例。將其中23例新確診患者納入HIV新確診組，該組中男17例、女6例，年齡30～60歲，平均(45.24±15.31)歲。既往已確診并啟用HARRT治療46例，選擇治療方案為齊多夫定(AZT)+拉米夫定(3TC)+奈韋拉平(NVP)和AZT+3TC+依非韋倫(EFV)。將其中22例治療后出現IRIS患者納入IRIS組，該組中男16例、女6例；年齡27～53歲，平均(39.12±13.35)歲；將24例治療后未出現IRIS患者納入非IRIS組，其中男18例、女6例；年齡25～60歲，平均(42.66±17.81)歲。將研究期間來本院進行健康體檢的24例健康體檢者納入健康對照組，其中男14例、女10例，年齡23～48歲，平均(35.32±12.81)歲。各組間性別比例及年齡比較，差異無統計學意義，具有可比性。

1.2納入標準 AIDS 診斷標準均符合中華人民共和國國家標準HIV/AIDS診斷標準及處理原則(2002)。HARRT后IRIS的診斷符合抗逆轉錄病毒治療后出現免疫反應，CD4+T細胞計數基線上升，患者出現的癥狀不能用藥物毒性作用、不良反應或耐藥性等原因解釋。本研究中IRIS組的臨床感染類型包括結核桿菌感染12例，單純皰疹2例，帶狀皰疹3例，乙型肝炎2例，梅毒3例。

1.3樣本采集 每位受試者分別抽取肘靜脈采血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管采集2 mL，用于外周血CD4+T細胞計數，標本采集后4 h內完成檢測；另一管無添加劑，用于細胞因子檢測，標本采集后2 h內分離血清，并儲存在-70 ℃的低溫冰箱中，全部樣本收集完成后統一檢測。

1.4檢測方法

1.4.1細胞因子 使用武漢博士德生物工程有限公司生產的人IL-2、人IL-4、人IL-10、人IFN-γ雙抗體夾心酶聯免疫試劑盒測定細胞因子，奧地利賽默飛MK-Ⅱ酶標儀比色分析結果。

1.4.2CD4+T細胞計數 采用BD FACS Count流式細胞儀及配套試劑盒檢測。

2 結 果

2.1HIV新確診組和健康對照組血清細胞因子水平和外周血CD4+T細胞數量比較 HIV新確診組外周血的IL-2、IFN-γ、CD4+T細胞數量明顯低于健康對照組，IL-4、IL-10明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2IRIS組和非IRIS組血清細胞因子水平和外周血CD4+T細胞數的比較 IRIS組外周血CD4+T細胞數明顯低于非IRIS組，差異有統計學意義(P<0.05)。IRIS組IL-2、IFN-γ明顯低于非IRIS組，IL-4、IL-10明顯高于非IRIS組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 HIV新確診組和健康對照組血清細胞因子水平和CD4+T細胞數的比較

表2 IRIS組和非IRIS組血清細胞因子水平和CD4+T細胞數比較

3 討 論

CD4是HIV糖蛋白的特異性受體，因此HIV主要感染CD4+T細胞，此外還能感染巨噬細胞，樹突細胞、B細胞、腦小膠質細胞及EB病毒轉化的B淋巴母細胞等。巨噬細胞及DC細胞可以產生IL-1，IL-12，它們可以促使CD4+T細胞成熟，CD4+T細胞計數能夠反映人體的免疫功能，HIV感染人體后，除了會引起外周血CD4+T細胞數量的減少，還會導致細胞功能紊亂和細胞因子分泌異常而進一步影響免疫功能[3]。成熟的CD4+T細胞根據其生成細胞因子的不同，可分為Th1型細胞和Th2型細胞。Th1型細胞分泌的細胞因子IL-2及IFN-γ能夠阻止細胞凋亡，而Th2型細胞分泌的細胞因子IL-4及IL-10可促進細胞凋亡[4]。

HARRT通常依據患者CD4+T淋巴細胞計數和病毒載量啟動治療，通常為CD4+T淋巴細胞計數<200/μL ，但越來越多的研究顯示，越早開始HARRT，啟動治療時基線的CD4+T淋巴細胞計數越高，越有可能將CD4+T淋巴細胞計數維持在正常水平[5]。根據本文結果分析，即使CD4+T細胞沒有降低至需要治療的數量，Th1型和Th2型細胞因子水平與健康人相比也已開始發生變化，提示一旦機體受到HIV感染，除CD4+T細胞會受到病毒的持續攻擊之外，細胞免疫功能也會受到影響，表現為Th1/Th2型細胞因子穩態的變化。2016年美國衛生與人類服務部(DHHS)正式提出只要HIV檢測呈陽性，即不論 CD4+T 淋巴細胞計數為多少，都應盡早進行HARRT[6]。經過HARRT治療，大多數人的免疫功能都會恢復，但是約20%的人可出現IRIS[7]，這可能是因為隨著抗病毒治療后免疫功能的恢復，免疫系統功能增強，對先前潛伏感染的反應增加，使原來已被控制的感染加重或惡化。IRIS多出現在抗病毒治療后3個月至6個月之間,常見的IRIS臨床類型有結核及非結核分枝桿菌感染、皰疹病毒及深部真菌如隱球菌感染等[8-9]。

細胞因子通過影響細胞免疫和體液免疫反應的程度，影響HIV的復制，誘導感染者出現癥狀，其關系復雜，本文也顯示在HIV感染早期即可出現細胞因子失衡的情況[10]，如促進細胞免疫功能的IL-2、IFN-γ的水平明顯低于健康對照組，證明在發生IRIS時機體的細胞免疫功能極度低下，大量參與細胞免疫的細胞因子被耗竭，弱化了其抗感染的能力，正常情況下IFN-γ可誘導Th0型細胞向Th1亞群分化，而低水平的IFN-γ表達也會減少Th1生成，導致CD4+T細胞免疫功能進一步減弱；IL-4則促進Th2活化，活化的Th2細胞分泌IL-4、IL-10等，同時HIV也可刺激外周血單個核細胞產生 IL-10，而IL-10抑制Th1細胞的活化和增殖，而Th1細胞產生的IL-2，可增強活化誘導的細胞死亡(AICD)效應[11-12]。

根據本研究，筆者認為HIV一經確診，就應該對感染者進行抗病毒治療，有利于維持CD4+T細胞數量，使其保持在較高水平，保持細胞因子穩態，更好地發揮抗病毒、抗感染的免疫作用，此外，雖然HARRT治療過程中會發生IRIS或者有耐藥現象產生，但是HARRT仍是治療HIV/AIDS最好的臨床方法，本文通過分析新確診HIV感染者和HARRT治療后有無發生IRIS患者血清中Th1/Th2型細胞因子水平變化，為今后使用細胞因子治療HIV提供了理論支持[13]。