靶向宿主的抗流感病毒藥物研究進展

王萌，顏海燕，李玉環(huán)，于蓮

·綜述·

靶向宿主的抗流感病毒藥物研究進展

王萌，顏海燕，李玉環(huán)，于蓮

154007 黑龍江，佳木斯大學藥學院藥劑室（王萌、于蓮）；100050 北京，中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)藥生物技術研究所抗感染藥物研究北京市重點實驗室（顏海燕、李玉環(huán)）

流行性感冒，又稱流感，是由流感病毒（influenza A virus，IAV）引起的急性呼吸道疾病，在全球范圍內具有較高的發(fā)病率和死亡率。流感病毒導致季節(jié)性大流行和人畜共患疾病的暴發(fā)，給全球經濟帶來嚴重的損失并對世界范圍內的公共衛(wèi)生產生威脅。疫苗和抗病毒藥物是預防和治療流感病毒的主要手段，但因流感病毒易發(fā)生抗原漂移和抗原轉換，疫苗防治效率低。目前臨床上的抗病毒藥物主要有：M2 離子通道抑制劑金剛烷胺和金剛乙胺；神經氨酸酶抑制劑扎那米韋、拉尼米韋及其成酯后的辛酸拉尼米韋、磷酸奧司他韋和帕拉米韋；RNA 聚合酶抑制劑法匹拉韋和處于臨床試驗階段的匹莫地韋；CAP 依賴性核酸內切酶抑制劑巴洛沙韋[1]。這些直接抗病毒藥物的反復使用加劇流感耐藥株的產生。因此為克服抗病毒藥物耐藥問題，開發(fā)靶向宿主的抗病毒藥物成為防治流感病毒的新策略。靶向宿主的抗病毒藥物主要分為兩類：一是抑制參與流感病毒復制的宿主蛋白；二是增強流感病毒復制相關的宿主限制因子。本文對靶向流感病毒進入、復制和釋放過程所需宿主蛋白、細胞因子和信號通路的抗流感病毒藥物進行綜述（圖 1）。

1 靶向流感病毒進入階段的宿主靶點及抗流感病毒抑制劑

流感通過病毒膜蛋白血凝素（heamagglutinin，HA）識別細胞表面的唾液酸受體附著在宿主細胞上，由宿主蛋白酶水解 HA，啟動內吞作用進入宿主細胞。唾液酸是一個九碳單糖，家族中最常出現的成員是 N-乙酰神經氨酸，到目前為止已報道約 80 種唾液酸衍生物[2]，主要位于細胞膜表面，在調節(jié)流感病毒的附著和進入中起著重要作用。DAS181（fludase）是一種宿主靶向的重組唾液酸酶融合蛋白，對多種 IAV 毒株具有良好的抑制作用[3]。其作用是除去呼吸道上皮細胞表面唾液酸，防止流感病毒附著，目前正處于流感治療II期臨床試驗階段[4]。

圖 1 參與流感病毒復制的宿主靶點及抗病毒藥物

II 型跨膜絲氨酸蛋白酶（type II transmembrane serine proteases，TTSPs）是一種主要水解 HA 的宿主蛋白酶[5]。TTSPs 家族包含跨膜蛋白酶絲氨酸 2（TMPRSS2）、跨膜蛋白酶絲氨酸 4（TMPRSS4）、人呼吸道胰蛋白酶樣蛋白酶（HAT）等，實驗數據表明這些宿主蛋白酶在流感病毒、冠狀病毒和副黏病毒激活中起作用[6]。卡莫司他、甲磺酸卡莫司他、鹽酸溴己新和擬肽抑制劑等以宿主蛋白酶為靶點抑制流感病毒感染[5-7]。因此以宿主蛋白酶為靶點，可開發(fā)廣譜抗病毒藥物。

內吞主要包括網格蛋白和胞膜窖依賴或非依賴性內吞途徑及巨胞飲作用途徑[8]。其中網格蛋白介導的內吞作用（clathrin-mediated endocytosis，CME）是主要途徑。2011 年，von Kleist 等[9]鑒定并驗證了網格蛋白末端結構域的小分子抑制劑 pitstops1 和 2，可抑制網格蛋白介導的內吞作用，進而阻斷病毒入侵，并對細胞活力無明顯影響。氯丙嗪作為網格蛋白依賴性內吞作用的抑制劑，最早被用于精神分裂癥的治療。Daniel 等[10]通過超分辨率顯微鏡檢查發(fā)現，氯丙嗪既不阻斷由銜接蛋白（AP-2）募集的網格蛋白，也不阻斷 AP-2 的募集，而是作用在網格蛋白包被囊泡形成的下游，且有數據表明發(fā)動蛋白是它們在胞吞作用中可能的細胞內靶標。文獻[11]報道，氯丙嗪與抑制細胞內吞抑制劑 EIPA 協(xié)同作用可以降低流感病毒感染 MDCK 細胞的能力。因此，可以通過開發(fā)抗流感病毒藥物聯合用藥來抑制病毒進入宿主細胞。

位于細胞器和細胞質膜上的液泡型 ATP 酶（V-ATPase），通過泵送質子酸化晚期內體。當病毒處于酸性環(huán)境中，HA 發(fā)生構象改變，促進膜融合，形成融合孔釋放 vRNPs 到細胞質中，完成病毒脫衣殼，因此可通過抑制 V-ATPase 活性干擾流感病毒感染。巴弗洛霉素屬于大環(huán)內酯類抗生素家族。有文獻報道，巴弗洛霉素可抑制 V-ATPase，降低內體酸化和溶酶體數量，從而抑制A 型和 B 型流感病毒復制[12-13]。山荷葉素是從分離得到的一種天然化合物，已被鑒定為一種新型 V-ATPase 抑制劑，用于治療胃癌和抑制人破骨細胞內溶酶體酸化[14-15]。目前，Chen 等[16]發(fā)現山荷葉素在 MDCK 和 A549 細胞系中，對包括耐藥病毒株在內的多種 IAV 毒株均有抑制作用。此外，聯合使用山荷葉素和奧司他韋或山荷葉素和金剛烷胺治療顯示出增強的抗病毒效果和細胞保護作用。Saliphenylhalamide（Saliphe）作為一種抗癌藥物，可以抑制 V-ATPase 活性，通過抑制內體的酸化，降低子代病毒的產生[17]。

蛋白激酶 C（protein kinase C，PKC）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（Ser/Thr protein kinase，STK），調節(jié)細胞增殖、分化、凋亡和血管生成等多個過程，在包膜病毒進入宿主細胞過程中發(fā)揮重要作用。雙吲哚馬來酰亞胺（GF109203X）是高度特異性 PKC 抑制劑，用其處理細胞，對大多數 PKC 亞型具有活性，在阻斷流感病毒內體運輸和可逆地抑制病毒顆粒脫殼進入細胞質這一過程發(fā)揮重要作用[18]。防御素是小型陽離子抗菌肽，分為兩個主要亞家族：α-防御素（HNP-1）和 β-防御素。據報道，HNP-1 對多種病毒具有抑制活性，在感染后不久加入 HNP-1，可以有效抑制流感病毒復制和病毒蛋白合成，其抗病毒機制不是直接作用在病毒上，而是通過調節(jié)對病毒生命周期重要的 PKC 通路介導[19-20]。

2 靶向流感病毒復制階段的宿主靶點及抗流感病毒抑制劑

當釋放在胞質中的病毒核糖核蛋白（vRNPs）進入細胞核后，在細胞周期依賴性蛋白激酶（CDKs）和 RNA 聚合酶II（Pol II）等宿主因子的作用下完成病毒 RNA（vRNA）的轉錄。這些宿主蛋白成為治療藥物開發(fā)的靶點，以阻止病毒的轉錄，其中 CDKs 的化學抑制劑獲得廣泛關注。CDKs 屬于 STK 家族，在調節(jié)細胞周期，病毒的基因復制和轉錄[21]等過程中發(fā)揮重要作用。Perwitasari 等[22]在通過高通量方法篩選出的 273 個對流感病毒 H7N9 毒株有抑制作用的化合物中，發(fā)現 CDK1/2/5/9 抑制劑 dinaciclib 和 CDK1/2/4/6 抑制劑夫拉平度對 A/California/04/09（H1N1）和 A/Philippines/2/82-X79（H3N2）流感病毒毒株有抑制作用。這兩種藥物是通過抑制宿主 Pol II活性導致 vRNA 轉錄水平降低來發(fā)揮作用，其中 dinaciclib 對流感病毒的抑制作用比夫拉平度高 12 倍。SNS-032（CDK2/7/9 抑制劑）具有抑制病毒基因表達的作用，與未經治療的小鼠高達 80% 的死亡率相比，SNS-032 可以保護小鼠免受 H1N1 型流感病毒的感染[23]。然而，廣譜 CDKs 抑制劑通常會對細胞周期進程產生負面影響，并引起不良反應，導致抗病毒藥物的開發(fā)困難。Yamamoto 等[21]研發(fā)了CDK9 抑制劑 FIT-039，可以抑制單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）、人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）、人腺病毒（human adenovirus，HAdV）等 DNA 病毒的復制，臨床前研究未見明顯的副作用，提示 FIT-039 是一種有潛力的化合物。綜合以上結果表明，進一步開發(fā) CDK 抑制劑在控制流感病毒感染方面具有廣闊的前景。

流感病毒蛋白質合成完全依賴于宿主細胞的翻譯機制，病毒 mRNA 通過核孔復合體轉運出核，在核糖體上進行翻譯，內質網上合成，并通過高爾基體轉運至質膜。熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）和真核起始因子（eIF）等密切參與此過程，因此是重要的抑制流感病毒的宿主靶點。

熱休克蛋白是一大類參與蛋白質折疊和合成的應激蛋白質，主要根據其分子量進行分類，包括 HSP27、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90 和大型熱休克蛋白。格爾德霉素于 1970 年從吸水鏈霉菌中分離出來，是第一個報道的 Hsp90 抑制劑，其與 Hsp90 的 N 末端三磷酸腺苷結合口袋結合，抑制蛋白伴侶的功能。Wang 等[24]在小鼠體內進行格爾德霉素抗 H5N1 流感病毒實驗，發(fā)現格爾德霉素可以延長小鼠的存活時間，顯著減少肺損傷、肺部炎癥及降低病毒載量。因格爾德霉素水溶性差，不良反應明顯，后續(xù)針對格爾德霉素進行結構改造修飾，合成了高水溶性、低毒性的 17-AAG、17-DMAG。Chase 等[25]對格爾德霉素及其衍生物 17-AAG 進行體外抗流感病毒實驗，顯示病毒滴度在感染早期降低1 ~ 2 log。因此，Hsp90 抑制劑可能是一類新型的抗流感病毒的化合物。

真核翻譯起始因子 4A（eIF4A）是一種解旋酶，通過解開 mRNA 5' 非翻譯區(qū)來促進翻譯起始前復合體的組裝。天然產物 pateamine A（PatA）和 silvestrol 的作用機制是抑制 eIF4A 功能并阻止蛋白質翻譯和病毒基因組復制，從而使翻譯抑制的 mRNA 在細胞質聚集形成一種高密度結構體，稱為應激顆粒（stress granule，SGs）。據報道，silvestrol具有廣譜抗病毒作用，可抑制 A549 和 MDCK 細胞中流感病毒的復制[26-27]。但 silvestrol 的抗病毒作用是完全可逆的，停止給藥后可引起 SGs 快速溶解，并恢復病毒蛋白質合成[27]；而 PatA 不可逆地結合 eIF4A，在停藥后可長期維持流感病毒復制阻斷和蛋白合成停滯[28]。這些研究表明，抑制 eIF4A 可以阻止病毒的翻譯和復制，是一個有前景的抗病毒靶點。

雙鏈 RNA 依賴性蛋白激酶 R（doublestranded RNA-dependent protein kinase R，PKR）是宿主抗病毒感染先天免疫的重要組成部分，由 dsRNA 激活，進一步激活下游底物 eIF2α，具有誘導病毒和細胞基因翻譯關閉的廣泛抗病毒活性，但流感病毒 NS1 蛋白 N 末端的 35 和 46 位氨基酸可抑制 PKR 激活[29-30]。eIF2α 是真核起始復合物的 315 個氨基酸亞單位，當 eIF2α 未磷酸化時，蛋白質翻譯以正常速率發(fā)生，當 eIF2α 被 PKR 等激酶磷酸化時，導致 mRNA 翻譯受阻，蛋白質合成下調，從而形成 SGs。據報道，抗?jié)兯幬锵闳~酮通過增強 PKR 基因的表達，促進 PKR 及 eIF2α 磷酸化，以對抗流感病毒感染[31-32]。硝唑尼特為一種廣譜抗病毒活性的噻唑烷，在體外研究顯示，硝唑尼特可抑制多種流感病毒毒株的復制，與奧司他韋或扎那米韋聯用，具有協(xié)同抗病毒作用[33]。硝唑尼特抗病毒機制包括誘導細胞內 PKR 和 eIF2α 磷酸化；消耗細胞內 Ga+儲備[34-35]。因此，可以誘導 eIF2α 磷酸化來開發(fā)廣譜抗病毒藥物。

流感病毒感染宿主細胞，至少被 Toll 樣病毒受體（Toll-like receptors，TLR）和視黃酸誘導基因（RIG）-1樣受體（retinoic acid-inducible gene 1-like receptor，RLR）這兩種病原體識別受體（pathogen recognition receptors，PRRs）識別，誘導 I 型干擾素（IFN）分泌，進而激活數百種干擾素刺激基因產物（IFN stimulated genes，ISG），激活適應性免疫系統(tǒng)。研究表明，ISG 具有廣泛的抗病毒能力，可降解病毒核酸，抑制病毒基因表達，并作為 PRRs 擴增 IFN 信號[36-37]。例如，抗黏病毒蛋白（Mx）是 IFN 誘導的具有廣泛抗病毒活性的關鍵細胞內限制因子，存在于幾乎所有脊椎動物中。人體內 MxA 通過靶向 vRNPs 顯示出有效抗流感病毒活性：一是將釋放的 vRNPs 保留在細胞質中；二是阻斷來自 cRNA 拷貝的 vRNA 二次轉錄[38]。微生物代謝物去氨基酪氨酸（desaminotyrosine，DAT）通過增強I型 IFN 信號和減少肺免疫病理損傷來阻斷 IAV 感染[39]。

核因子-кB（nuclear factor-kappa B，NF-кB）通路是流感病毒感染后被 PRRs 激活的另一重要途徑，在參與炎癥反應，干擾流感病毒復制，抵抗病毒感染中發(fā)揮重要作用[40-42]。因此，NF-кB 通路是治療流感的重要靶標。硼替佐米（PS-341），是一種臨床批準的抗癌藥物，其抗流感病毒活性不取決于可能的細胞毒性或促凋亡作用，而是誘導了 IкB 的降解和 NF-кB 以及 JNK/AP-1 途徑的激活，誘導I 型 IFN 應答，使抗病毒基因（如IL-6、MxA）的表達增強，對I 型 IFN 缺乏的 Vero 細胞中的病毒滴度無影響[43]。薊黃素是從植物茵陳蒿中提取的黃酮類化合物之一，能有效抑制甲型流感病毒株，包括 A/tianjinjinnan/15/2009（H1N1）和 A/JiangXi/312/2006（H3N2）。其作用機制主要是通過下調絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）（p38 和 JNK）信號通路的磷酸化，影響 NF-кB 信號通路的磷酸化，抑制炎癥因子如 IL-1β、IL-8、IL-10 和 TNF-α 的水平而發(fā)揮抗流感病毒作用[44]。此外，SC75741 抑制 NF-кB 活化，介導 RNPs 出核，并在治療小鼠免受流感病毒感染所需濃度方面沒有顯示出副作用，且阻礙耐藥毒株的發(fā)展，是一種有前途的靶向宿主的候選藥物[45-46]。

3 靶向流感病毒釋放階段的宿主靶點及抗流感病毒抑制劑

在流感病毒復制后期，利用宿主細胞蛋白運輸系統(tǒng)將新合成的 vRNPs 和病毒結構蛋白轉運至質膜區(qū)域裝配成子代病毒，隨后萌芽釋放成熟病毒顆粒。

染色體維持蛋白 1（chromosome region maintenance 1，CRM1）是抗病毒藥物開發(fā)新的潛在靶點，其介導流感病毒核輸出功能[47]。二氯苯并咪唑呋喃型核糖苷（5,6-dichloro- 1-β-D-ribofuanosyl-H-benzimidazole，DRB）和來普霉素B（LMB）抑制 CRM1 和 TAP-P15 途徑的核轉運，完全阻斷了流感病毒輸出[48]，但 LMB 在體內有毒性，不適宜治療流感。Verdinexor（KPT-335）是一種新型口服小分子核輸出選擇性抑制劑（SINE），研究證明 verdinexor 在體內外均有效抑制流感病毒，其作用是阻斷 CRM1 介導的 vRNPs 核輸出和抑制 NF-кB 激活，從而減少細胞因子的產生并消除病毒相關的免疫病理學，同時具有最小毒性[49-50]。

ERK 通路主要介導 Ras/Raf/MEK/ERK 級聯途徑，被認為是流感病毒激活的標志信號通路，對新合成的 vRNPs 的核輸出及細胞生長、分化和存活都具有重要作用。特異性MEK 抑制劑 U0126 可以顯著降低流感病毒復制，經鼻給予 U0126 可以保護小鼠免受流感病毒的感染，且不會產生任何副作用[51]。CI-1040 是一種三磷酸腺苷非競爭性 MEK1/2 抑制劑，通過阻止流感病毒 RNP 復合物的形成，顯著降低 A549 細胞中流感病毒滴度，而且對高致病性禽流感毒株、達菲耐藥株等多種流感病毒毒株均有效。此外，CI-1040 可以減少流感病毒感染小鼠肺組織中病毒量達 80% 以上[52]。MEK1/2 抑制劑曲美替尼是第一個獲得FDA 批準的用于治療惡性黑色素瘤的藥物[53-54]，可干擾子代病毒 vRNPs 的輸出，具有廣泛的抗病毒活性，在體外和體內均可有效阻斷不同流感病毒亞型的復制[55]。B-Raf（V600E）是人類癌癥中常見的突變基因，B-Raf（V600E）抑制劑維羅非尼可以有效阻止 Raf/MEK/ERK 信號級聯的激活，對多種不同 IAV 毒株具有廣泛的抗病毒活性。維羅非尼通過抑制凋亡誘導細胞因子的表達，抑制病毒誘導的 A549 細胞凋亡，導致病毒蛋白表達受阻。此外，維羅非尼可以抑制 IAV 誘導的其他信號級聯的激活，尤其是 MAPKs（p38 和 JNK）通路等。多靶點抗病毒模式不易產生耐藥性，因此使用維羅非尼對抗流感病毒感染是一種非常有希望和創(chuàng)新的抗病毒干預方法[56]。

Watanabe 等[57]驗證發(fā)現與流感病毒相互作用的宿主因子 GBF1 和 JAK1 是抗病毒藥物的潛在靶點。Golgicide A 抑制 GBF1，該宿主因子與 M2 發(fā)生免疫共沉淀，并參與 HA 和 NA 在細胞內的轉運；魯索利替尼（INCB18424）抑制 JAK1，該宿主因子與幾種病毒蛋白發(fā)生免疫共沉淀，抑制子代病毒顆粒形成。

4 展望

流感大流行和人畜共患的流感是嚴重的公共衛(wèi)生問題，世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計全球每年導致 25 萬~ 50 萬人死亡。流感病毒變異快、易耐藥，直接針對病毒靶點的藥物難以成功對抗流感病毒的流行，迫切需要研發(fā)新的作用機制的藥物。流感病毒在生命復制周期的每個階段都依賴于宿主細胞，病毒與其宿主細胞之間的相互作用決定了感染的結果，包括子代病毒生產的效率、趨向性和致病性。因此靶向宿主成為抗病毒藥物研發(fā)的熱點，特別適用于像流感病毒這類病程短的急性病毒性疾病。鑒于此，本文總結了近年來針對流感病毒復制所需宿主蛋白和細胞信號通路的抗病毒藥物。相信隨著分子病毒學、各種組學研究等技術的進步加深對病毒-宿主相互作用的深入理解，有望擴大潛在抗流感病毒宿主靶點的數量及靶向宿主抗流感病毒藥物的研發(fā)。

[1] Cai Y, Ding XL, Zhang JB, et al. Survey on anti-influenza drug synthesis. Chin J Chem Educ, 2019, 40(12):5-18. (in Chinese)

蔡巖, 丁曉麗, 章聚寶, 等. 抗流感病毒藥物合成研究縱覽. 化學教育, 2019, 40(12):5-18.

[2] Schauer R, Kamerling JP. Exploration of the sialic acid world. Adv Carbohydr Chem Biochem, 2018, 75:1-213.

[3] Malakhov MP, Aschenbrenner LM, Smee DF, et al. Sialidase fusion protein as a novel broad-spectrum inhibitor of influenza virus infection. Antimicrob Agents Chemother, 2006, 50(4):1470-1479.

[4] Nicholls JM, Moss RB, Haslam SM. The use of sialidase therapy for respiratory viral infections. Antiviral Res, 2013, 98(3):401-409.

[5] Wu C, Wen ZY, Chen WY, et al. The cleavage of 2009 pandemic influenza HA protein by TMPRSS4 and induced cell fusion activity in vitro. Chin J Prev Vet Med, 2013, 35(7):517-520. (in Chinese)

吳超, 溫志遠, 陳偉業(yè), 等. 跨膜絲氨酸蛋白酶-4對2009甲型H1N1流感病毒HA的切割及其融合活性研究. 中國預防獸醫(yī)學報, 2013, 35(7):517-520.

[6] Laporte M, Naesens L. Airway proteases: an emerging drug target for influenza and other respiratory virus infections. Curr Opin Virol, 2017, 24:16-24.

[7] Li CC, Wang XJ, Wang HR. Repurposing host-based therapeutics to control coronavirus and influenza virus. Drug Discov Today, 2019, 24(3):726-736.

[8] Mercer J, Schelhaas M, Helenius A. Virus entry by endocytosis. Annu Rev Biochem, 2010, 79:803-833.

[9] von Kleist L, Stahlschmidt W, Bulut H, et al. Role of the clathrin terminal domain in regulating coated pit dynamics revealed by small molecule inhibition. Cell, 2011, 146(3):417-484.

[10] Daniel JA, Chau N, Abdel-Hamid MK, et al. Phenothiazine-derived antipsychotic drugs inhibit dynamin and clathrin-mediated endocytosis. Traffic, 2015, 16(6):635-654.

[11] Rossman JS, Leser GP, Lamb RA. Filamentous influenza virus enters cells via macropinocytosis. J Virol, 2012, 86(20):10950-10960.

[12] Yeganeh B, Ghavami S, Kroeker AL, et al. Suppression of influenza A virus replication in human lung epithelial cells by noncytotoxic concentrations bafilomycin A1. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2015, 308(3):L270-L286.

[13] Ochiai H, Sakai S, Hirabayashi T, et al. Inhibitory effect of bafilomycin A1, a specific inhibitor of vacuolar-type proton pump, on the growth of influenza A and B viruses in MDCK cells. Antiviral Res, 1995, 27(4):425-430.

[14] S?rensen MG, Henriksen K, Neutzsky-Wulff AV, et al. Diphyllin, a novel and naturally potent V-ATPase inhibitor, abrogates acidification of the osteoclastic resorption lacunae and bone resorption. J Bone Miner Res, 2007, 22(10):1640-1648.

[15] Shen W, Zou X, Chen M, et al. Effects of diphyllin as a novel V-ATPase inhibitor on gastric adenocarcinoma. Eur J Pharmacol, 2011, 667(1-3):330-338.

[16] Chen HW, Cheng JX, Liu MT, et al. Inhibitory and combinatorial effect of diphyllin, a v-ATPase blocker, on influenza viruses. Antiviral Res, 2013, 99(3):371-382.

[17] Denisova OV, Kakkola L, Feng L, et al. Obatoclax, saliphenylhalamide, and gemcitabine inhibit influenza A virus infection. J Biological Chem, 2012, 287(42):35324-35332.

[18] Meineke R, Rimmelzwaan GF, Elbahesh H. Influenza virus infections and cellular kinases. Viruses, 2019, 11(2):171.

[19] Daher KA, Selsted ME, Lehrer RI. Direct inactivation of viruses by human granulocyte defensins. J Virology, 1986, 60(3):1068-1074.

[20] Salvatore M, García-Sastre A, Ruchala P, et al. α-Defensin inhibits influenza virus replication by cell-mediated mechanism(s). J Infect Dis, 2007, 196(6):835-843.

[21] Yamamoto M, Onogi H, Kii I, et al. CDK9 inhibitor FIT-039 prevents replication of multiple DNA viruses. J Clin Invest, 2014, 124(8):3479- 3488.

[22] Perwitasari O, Yan X, O'Donnell J, et al. Repurposing kinase inhibitors as antiviral agents to control influenza A virus replication. Assay Drug Dev Technol, 2015, 13(10):638-649.

[23] S?derholm S, Anastasina M, Islam MM, et al. Immuno-modulating properties of saliphenylhalamide, SNS-032, obatoclax, and gemcitabine. Antiviral Res, 2016, 126:69-80.

[24] Wang C, Liu P, Luo J, et al. Geldanamycin reduces acute respiratory distress syndrome and promotes the survival of mice infected with the highly virulent H5N1 influenza virus. Front Cell Infect Microbiol, 2017, 7:267.

[25] Chase G, Deng T, Fodor E, et al. Hsp90 inhibitors reduce influenza virus replication in cell culture. Virology, 2008, 377(2):431-439.

[26] Müller C, Schulte FW, Lange-Grünweller K, et al. Broad-spectrum antiviral activity of the eIF4A inhibitor silvestrol against corona- and picornaviruses. Antiviral Res, 2018, 150:123-129.

[27] Slaine PD, Kleer M, Smith NK, et al. Stress granule-inducing eukaryotic translation initiation factor 4A inhibitors block influenza A virus replication. Viruses, 2017, 9(12):388.

[28] Low WK, Dang Y, Schneider-Poetsch T, et al. Inhibition of eukaryotic translation initiation by the marine natural product pateamine A. Mol Cell, 2006, 20(5):709-722.

[29] Balachandran S, Roberts PC, Brown LE. et al. Essential role for the dsRNA-dependent protein kinase PKR in innate immunity to viral infection. Immunity, 2000, 13(1):129-141.

[30] Schierhorn KL, Jolmes F, Bespalowa J, et al. Influenza A virus virulence depends on two amino acids in the N-terminal domain of its NS1 protein to facilitate inhibition of the RNA-dependent protein kinase PKR. J Virol, 2017, 91(10):e00198-17.

[31] Unoshima M, Iwasaka H, Eto J, et al. Antiviral effects of geranylgeranylacetone: enhancement of MxA expression and phosphorylation of PKR during influenza virus infection. Antimicrob Agents Chemother, 2003, 47(9):2914-2921.

[32] Ding L, Zhu T, Song Q, et al. HPLC-APCI-MS for the determination of teprenone in human plasma: method and clinical application.J Pharm Biomed Anal, 2007, 44(3):779-785.

[33] Rossignol JF. Nitazoxanide: a first-in-class broad-spectrum antiviral agent. Antiviral Res, 2014, 110:94-103.

[34] Elazar M, Liu M, Mckenna SA, et al. The anti-hepatitis C agent nitazoxanide induces phosphorylation of eukaryotic initiation factor 2alpha via protein kinase activated by double-stranded RNA activation. Gastroenterology, 2009, 137(5):1827-1835.

[35] Ashiru O, Howe JD, Butters TD. Nitazoxanide, an antiviral thiazolide, depletes ATP-sensitive intracellular Ca(2+) stores. Virology, 2014, 462-463:135-148.

[36] Li CC, Wang XJ, Wang HR. Repurposing host-based therapeutics to control coronavirus and influenza virus. Drug Discov Today, 2019, 24(3):726-736.

[37] Bai SY, Yang Q, Qiu HJ. Antiviral mechanisms of interferon-stimulated genes. Acta Microbiol Sinica, 2018, 58(3):361-371. (in Chinese)

白思宇, 楊倩, 仇華吉. 干擾素刺激基因的抗病毒機制. 微生物學報, 2018, 58(3):361-371.

[38] Villalón-Letelier F, Brooks AG, Saunders PM, et al. Host cell restriction factors that limit influenza A infection. Viruses, 2017, 9(12):E376.

[39] Steed AL, Christophi GP, Kaiko GE, et al. The microbial metabolite desaminotyrosine protects from influenza through type I interferon. Science, 2017, 357(6350):498-502.

[40] Ludwig S, Planz O. Influenza viruses and the NF-kappaB signaling pathway - towards a novel concept of antiviral therapy. Biol Chem, 2008, 389(10):1307-1312.

[41] Pasparakis M. Role of NF-κB in epithelial biology. Immunol Rev, 2012, 246(1):346-358.

[42] Lee SM, Yen HL. Targeting the host or the virus: current and novel concepts for antiviral approaches against influenza virus infection. Antiviral Res, 2012, 96(3):391-404.

[43] Dudek SE, Luig C, Pauli EK, et al. The clinically approved proteasome inhibitor PS-341 efficiently blocks influenza A virus and vesicular stomatitis virus propagation by establishing an antiviral state. J Virol, 2010, 84(18):9439-9451.

[44] Yan H, Wang H, Ma L, et al. Cirsimaritin inhibits influenza A virus replication by downregulating the NF-κB signal transduction pathway. Virol J, 2018, 15(1):88.

[45] Haasbach E, Reiling SJ, Ehrhardt C, et al. The NF-kappaB inhibitor SC75741 protects mice against highly pathogenic avian influenza A virus. Antiviral Res, 2013, 99(3):336-344.

[46] Ehrhardt C, Rückle A, Hrincius ER, et al. The NF-κB inhibitor SC75741 efficiently blocks influenza virus propagation and confers a high barrier for development of viral resistance. Cell Microbiol, 2013, 15(7):1198-1211.

[47] Chutiwitoonchai N, Mano T, Kakisaka M, et al. Inhibition of CRM1-mediated nuclear export of influenza A nucleoprotein and nuclear export protein as a novel target for antiviral drug development. Virology, 2017, 507:32-39.

[48] Yadav V, Panganiban AT, Honer Zu Bentrup K, et al. Influenza infection modulates vesicular trafficking and induces Golgi complex disruption. VirusDisease, 2016, 27(4):357-368.

[49] Pickens JA, Tripp RA. Verdinexor targeting of CRM1 is a promising therapeutic approach against RSV and influenza viruses. Viruses, 2018, 10(1):E48.

[50] Perwitasari O, Johnson S, Yan X, et al. Verdinexor, a novel selective inhibitor of nuclear export, reduces influenza A virus replication in vitro and in vivo. J Virol, 2014, 88(17):10228-10243.

[51] Droebner K, Pleschka S, Ludwig S, et al. Antiviral activity of the MEK-inhibitor U0126 against pandemic H1N1v and highly pathogenic avian influenza virus in vitro and in vivo. Antiviral Res, 2011, 92(2): 195-203.

[52] Haasbach E, Müller C, Ehrhardt C, et al. The MEK-inhibitor CI-1040 displays a broad anti-influenza virus activity in vitro and provides a prolonged treatment window compared to standard of care in vivo. Antiviral Res, 2017, 142:178-184.

[53] Gilmartin AG, Bleam MR, Groy A, et al. GSK1120212 (JTP-74057) is an inhibitor of MEK activity and activation with favorable pharmacokinetic properties for sustained in vivo pathway inhibition. Clin Canc Res, 2011, 17(5):989-1000.

[54] Wright CJ, Mccormack PL. Trametinib: first global approval. Drugs, 2013, 73(11):1245-1254.

[55] Schr?der T, Dudek SE, Schreiber A. et al. The clinically approved MEK inhibitor Trametinib efficiently blocks influenza A virus propagation and cytokine expression. Antiviral Res, 2018, 157:80-92.

[56] Holzberg M, Boergeling Y, Schr?der T, et al. Vemurafenib limits influenza A virus propagation by targeting multiple signaling pathways. Front Microbiol, 2017, 8:2426.

[57] Watanabe T, Kawakami E, Shoemaker JE, et al. Influenza virus-host interactome screen as a platform for antiviral drug development. Cell Host Microbe, 2014, 16(6):795-805.

“重大新藥創(chuàng)制”國家科技重大專項（2018ZX09711003）；中國醫(yī)學科學院醫(yī)學與健康科技創(chuàng)新工程（2017-I2M-3-010）；佳木斯大學優(yōu)秀學科團隊項目（JDXKDT-2019005）

于蓮，Email：jdyulian@163.com

2019-11-28

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.03.015