大豆GmVE2基因克隆及其在大豆籽粒維生素E動態(tài)積累中的表達分析

王 偉,王 俊,鮑玉月,栗春霞,崔智慧,韓英鵬,李文濱

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 大豆研究所,大豆生物學(xué)教育部重點實驗室,農(nóng)業(yè)部東北大豆生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 150030)

維生素E又稱生育酚,是一種脂溶性維生素,主要存在于油料作物特別是大豆中,其可參與生物體內(nèi)抗性脅迫、基因表達調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種代謝途徑。在植物體內(nèi),維生素E具有能夠釋放活性氫、捕獲植物光合組織中自由基的能力[1],能夠保護植物免受光抑制和光氧化脅迫[2]。維生素E除了具有氧化功能和對非生物逆境抗性作用外,還影響一些重要的生理過程包括種子發(fā)芽、光合同化產(chǎn)物的轉(zhuǎn)運、植株生長、葉片衰老等[3]。另外,在動物飼料中添加也可以改善肉質(zhì),緩解動物應(yīng)激反應(yīng),提高繁殖性能[4-5]。

維生素E主要有3種組分,包括α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚等,大豆種子中γ-生育酚和δ-生育酚含量最多,占大豆總生育酚含量的95%左右,而活性最高的α-生育酚僅占4%[6-7]。劉煥成與羅健等[8-9]研究發(fā)現(xiàn),28～34 ℃大豆籽粒維生素E含量差異主要體現(xiàn)在R6-R7時期積累量,該時期積累量決定大豆品種最終的維生素E含量。維生素E合成代謝途徑中主要底物為莽草酸途徑產(chǎn)生的尿黑酸(Homogentisic acid,HGA)、非甲羥戊酸途徑產(chǎn)生的植基二磷酸(Phytyl diphosphate,PDP)和香葉酰香葉酰二磷酸(Geranylgeranyl diphosphate,GGDP),現(xiàn)有研究表明,通過調(diào)節(jié)底物可以調(diào)控維生素E的合成。其中,HGA的生成直接由對羥基丙酮酸雙加氧酶(Hydroxy phenyl pyruvate dehydrogenase,HPPD)作用而來,在煙草中過量表達的HPPD基因(來自大麥)使轉(zhuǎn)基因植物總生育酚含量提高了2倍[10],在藍藻中過表達該基因使生育酚含量提高了5～7倍[11-12]。目前,調(diào)控維生素E合成代謝途徑的研究主要集中在通過關(guān)鍵酶基因來控制維生素E合成,而對莽草酸途徑和非甲羥戊酸途徑調(diào)控維生素E卻鮮見報道。

PDP作為生育酚合成的主要前體,80%由葉綠素的分解產(chǎn)物植醇經(jīng)磷酸化反應(yīng)生成,而GmVE2基因可通過參與葉綠體PSⅠ系統(tǒng)電子鏈傳遞,間接影響PDP這一底物的合成,進而調(diào)控維生素E合成[13]。本研究對候選基因GmVE2進行生物信息學(xué)分析預(yù)測,以高維生素E材料東農(nóng)50為試材,克隆GmVE2基因CDS全長序列,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該基因表達量與生育期籽粒維生素E含量呈顯著負相關(guān)(-0.951*),且維生素E含量在綠色組織中含量高于其他組織。本研究主要是對大豆基因GmVE2與維生素E含量的調(diào)控關(guān)系進行初步研究,分析GmVE2基因表達量與籽粒維生素E含量之間的相關(guān)關(guān)系,為高維生素E大豆新品種的培育提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

本研究選用高維生素E材料大豆品種東農(nóng)50為試材,由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆生物學(xué)教育部重點實驗室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1GmVE2生物信息學(xué)分析GmVE2基因序列信息由Phytozome數(shù)據(jù)庫(https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)獲得,氨基酸理化性質(zhì)用ExPASy-ProtParam在線軟件(http://web.expasy.org/protparam/)進行預(yù)測；采用SignalP 4.1、TMHMM及NetPhos-3.1分別對信號肽、跨膜區(qū)和潛在磷酸化位點進行預(yù)測,利用SoPMA軟件進行蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測,采用SWISS-MODEL在線軟件(http://swissmodel.expasy.or1g/)預(yù)測蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu),同時利用Blast和MEGA 5.0軟件對氨基酸進行同源性分析和構(gòu)建進化樹。

1.2.2 大豆各組織總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄 將植物材料東農(nóng)50種植在蛭石中,培養(yǎng)條件為水分充足,28 ℃光照16 h黑暗8 h交替,1 d取芽,14 d后于當(dāng)天14:00取除大豆籽粒外的其他組織(R6期)：根、莖、葉、子葉、芽,利用東洋紡RNA提取試劑提取大豆總RNA。

1.2.3 大豆GmVE2基因克隆與表達載體構(gòu)建

1.2.3.1 引物設(shè)計及目的基因擴增 通過Phytozome v12.1數(shù)據(jù)庫查找GmVE2基因的全長序列。GmVE2基因全長1 333 bp,CDS區(qū)全長504 bp,編碼167個氨基酸。根據(jù)GmVE2基因的序列在Primer Premier 5.0數(shù)據(jù)庫設(shè)計一對基因擴增引物：正向引物(F):5′-AGAACACGGGGGACTATGCTCTTTCACTTGCTTCTC-3′，反向引物 (R)：5′-ATCCTCTGTTTCTAGTTATCTCTTCATAATGTCATCC-3′。產(chǎn)物長度534 bp。PCR擴增體系：Super-Fidelity高保真酶諾威贊公司提供，模板cDNA 1 μL，上下游引物各1 μL，Super-Fidelity 0.5 μL，5×Super-Fidelity Buffer 5 μL，dNTP 0.5 μL，ddH2O補至25 μL。PCR擴增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共35個循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。一對熒光定量檢測引物：定量引物(F)：5′-TCCCTCCCATCAAACTCA-3′，定量引物(R)：5′-AACCAGCATTCAGCAAGA-3′。產(chǎn)物長度178 bp。PCR擴增體系：定量試劑盒天根公司提供，2×Real Universal PreMix 10 μL，正反向定量引物各0.6 μL，cDNA模板1 μL，50×ROX Reference Dye 0.4 μL，RNase-free ddH2O定容至20 μL。PCR擴增程序：95 ℃ 預(yù)變性15 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40個循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。

1.2.3.2 目的基因片段回收 1%瓊脂糖電泳檢測PCR產(chǎn)物,利用全自動數(shù)碼凝膠圖像分析儀拍照記錄后,具體根據(jù)OMEGA Gel Extraction Kit(D2500-01)凝膠回收試劑盒說明書回收目的條帶,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.3 目的基因與植物表達載體連接、轉(zhuǎn)化和驗證 在pCAMBIA3300載體單酶切位點XbaⅠ將植物表達載體pCAMBIA3300酶切線性化。酶切反應(yīng)體系為：XbaⅠ(10 U/μL)1 μL,10×Buffer Tango 1 μL,載體質(zhì)粒 6 μL,ddH2O 2 μL,反應(yīng)條件為37 ℃金屬浴2～3 h,電泳驗證酶切結(jié)果。大腸感受態(tài)(E.coli)DH5α 購自寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司,電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化目的基因。In-Fusion方法將線性化pCAMBIA3300載體與目的基因片段連接反應(yīng)體系為目的片段 1 μL,XbaⅠ酶切pCambia3300載體 1 μL,5×In-Fusion HD Enzyme Premix 1 μL,ddH2O 2 μL,反應(yīng)總體積 5 μL,50 ℃連接15 min。

采用Master Mix方法菌液PCR方法檢驗陽性克隆,吸取1 mL陽性克隆菌液送往北京華大基因科技有限公司測序。

1.2.4GmVE2在大豆組織及生育時期轉(zhuǎn)錄水平分析 在東農(nóng)50大豆品種R5-R8生育時期每間隔7 d取各時期籽粒(共9次)以及東農(nóng)50大豆品種R6期各組織(根、莖、葉、子葉、芽)樣本,對籽粒和組織樣本用TRIzol法提取總RNA,進行反轉(zhuǎn)錄并以該cDNA為底物,結(jié)合Actin基因內(nèi)參引物及基因特異性熒光定量引物,進行實時熒光定量PCR檢驗(內(nèi)參基因及目的基因每種處理需設(shè)置3次重復(fù))。相對定量ΔΔCT方法中CT值為3次重復(fù)試驗取平均數(shù),相對拷貝數(shù)計算公式為 2-ΔΔCT(ΔΔCT=CT目的基因-CT內(nèi)參Actin基因)[14]。以內(nèi)參基因Actin的表達量的平均值作為參考,檢測GmVE2在大豆組織及生育時期基因表達情況。

1.2.5 大豆組織及籽粒中維生素E含量的測定 將東農(nóng)50大豆品種組織及籽粒在60 ℃條件下進行烘干,取烘干的樣品研磨成粉末,取0.4 g粉末加入0.05 g抗壞血酸和4 mL的80%色譜級乙醇,渦旋振蕩20 s后磁力振蕩20 min,9 000 r/min離心10 min,用注射器抽取2 mL上清液過濾滅菌進行待測,液相色譜流動相為色譜級甲醇,流速為1.2 mL/min,檢測器選用FLD檢測器,激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為292,330 nm[15]。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 2.0對基因表達量和維生素E含量作相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GmVE2基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析

2.1.1GmVE2一級結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)及分析 利用ExPASy-ProtParam 軟件分析GmVE2基因編碼的蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu),結(jié)果表明，GmVE2基因編碼區(qū)編碼167個氨基酸,其中Ile(占11.4%)的含量最多,不存在Pyl、Sec等氨基酸(圖1)；該蛋白分子式為C904H1326N208O246S10,分子質(zhì)量為19.364 3 ku,總原子數(shù)為2 694,理論等電點(pI)為4.78,脂肪指數(shù)為87.01；蛋白正負電荷殘基數(shù)分別為11和23。該蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)和GRAVY值分別為25.02,0.043,這表明該蛋白是穩(wěn)定的疏水性蛋白(表1)。

A.丙氨酸；R.精氨酸；N.天冬酰胺；D.天冬氨酸；C.半胱氨酸；Q.谷氨酰胺；E.谷氨酸；G.甘氨酸；H.組氨酸；I.異亮氨酸；L.亮氨酸；K.賴氨酸；M.蛋氨酸；F.苯丙氨酸；P.脯氨酸；S.絲氨酸；T.蘇氨酸；W.色氨酸；Y.酪氨酸；V.纈氨酸。

A.Alanine; R.Arginine; N.Asparagine; D.Aspartic acid; C.Cystine; Q.Glutarnine; E.Glutamic acid; G.Glycine; H.Histidine; I.Isoleucine; L.Leucine; K.Lysine; M.Methionine; F.Phenylalanine; P.Proline; S.Serine; T.Threonine; W.Tryptophan; Y.Tyrosine; V.Valine.

圖1 GmVE2蛋白氨基酸組成
Fig.1 Amino acid composition of GmVE2 protein

表1 GmVE2理化性質(zhì)分析Tab.1 Analysis of physical and chemical properties of GmVE2

2.1.2 GmVE2蛋白跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽及磷酸位點的預(yù)測 在SignalP 4.1軟件對GmVE2氨基酸進行預(yù)測,結(jié)果表明,GmVE2蛋白為分泌蛋白,其Smean值為0.741,存在信號肽(圖2)。

圖2 GmVE2蛋白信號肽預(yù)測Fig.2 Signal peptide prediction of GmVE2 protein

利用TMHMM軟件預(yù)測GmVE2蛋白有2個跨膜區(qū)域(圖3),分別位于氨基酸2-24位和85-107位。

圖3 GmVE2蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.3 Transmembrane structure prediction of GmVE2 protein

通過NetPhos-3.1軟件預(yù)測該蛋白有13個潛在磷酸化位點(圖4),包括5個絲氨酸(Serine)、4個酪氨酸(Tyrosine)和4個蘇氨酸(Threonine)位點。

2.1.3GmVE2基因蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu) 利用SOPMA軟件對GmVE2氨基酸序列進行蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測(圖5),結(jié)果表明,GmVE2蛋白中最重要的構(gòu)建元件是α螺旋占氨基酸殘基總數(shù)的32.34%(Alpha helix),次要元件為無規(guī)則卷曲(Random coil)占31.74%,延伸鏈(Extended strand)和β轉(zhuǎn)角(Beta turn)分別占25.15%和10.75%。利用SWISS-MODEL在線軟件建立GmVE2蛋白的三級空間結(jié)構(gòu)模型(圖6)。

圖4 GmVE2蛋白磷酸化位點預(yù)測Fig.4 Phosphorylation sites prediction of GmVE2 protein

圖5 GmVE2蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.5 The secondary structure prediction of GmVE2 protein

圖6 GmVE2蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.6 The tertiary structure prediction of GmVE2 protein

2.1.4 GmVE2蛋白的系統(tǒng)發(fā)生樹 在NCBI數(shù)據(jù)庫中使用Blast分析獲得GmVE2蛋白較高同源性的氨基酸,利用MEGA 5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(圖7),結(jié)果表明,在19種不同種類植物中,大豆GmVE2蛋白序列與野生大豆一致性最高,該基因在豆科植物進化過程中相對保守。

圖7 GmVE2的系統(tǒng)發(fā)生樹Fig.7 Phylogenetic tree of GmVE2 protein

2.2 GmVE2基因克隆及轉(zhuǎn)化

2.2.1 東農(nóng)50籽粒及組織總RNA提取 選取東農(nóng)50各生育期籽粒及R6期各組織提取總RNA,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測18S和28S RNA帶型清晰可辨(圖8),RNA完整性好、純度高。

1-9.籽粒生育期9次動態(tài)取樣籽粒總RNA(按取樣時間排列,間隔7 d)；10-14.各植物組織總RNA(10.根；11.莖；12.芽；13.子葉；14.葉片)。1-9.9 dynamic sampling of total grain RNA at grain growth stage (arranged by sampling time, 7 days interval)；10-14.Total RNA of plant tissues(10.Root; 11.Stem; 12.Bud; 13.Cotyledon; 14.Leaf).

M.DL2000 Marker ;1-6.梯度退火溫度PCR產(chǎn)物；退火溫度51～56 ℃梯度為1 ℃。M.DL2000 Marker ;1-6.Gradient annealing temperature PCR products；Annealing temperature 51-56 ℃ gradient is 1 ℃.

2.2.2GmVE2基因的克隆 以大豆品種東農(nóng)50葉片cDNA為模板,PCR擴增獲得長度為504 bp的cDNA序列(圖9),測序結(jié)果用DNAMAN與Phytozome數(shù)據(jù)庫中GmVE2基因的公布序列進行比對,結(jié)果表明，東農(nóng)50的GmVE2基因與目的序列的一致性為100%。

2.2.3 目的基因與克隆載體連接與轉(zhuǎn)化 提取載體pCAMBIA3300質(zhì)粒單酶切后(圖10)與目的基因片段利用In-Fusion連接,獲得的pCambia3300-GmVE2植物表達載體,轉(zhuǎn)入DH5α大腸桿菌感受態(tài)中篩選,進行菌液PCR檢測(圖11)。將攜帶目的片段的大腸桿菌提取質(zhì)粒DNA后,電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細胞進行篩選和驗證(圖12),結(jié)果表明,片段大小與目的基因大小相同。

M.DL2000 Marker;1-11.11個不同單克隆菌液。M.DL2000 Marker; 1-11.Eleven different monoclonal solutions.

2.3 GmVE2在大豆組織及籽粒基因表達模式與維生素E含量相關(guān)關(guān)系

2.3.1 籽粒動態(tài)基因表達模式及維生素E含量 將籽粒生育期動態(tài)取樣(間隔7 d)提取RNA,進行反轉(zhuǎn)錄,以Actin引物為內(nèi)參,進行熒光定量PCR分析,分析GmVE2基因在東農(nóng)50籽粒積累中表達量動態(tài)(圖13),其中,被測樣品維生素E含量利用液相色譜法獲得(圖14)。對籽粒中GmVE2基因動態(tài)表達量與維生素E含量分析發(fā)現(xiàn),GmVE2基因表達量在籽粒鼓粒期下調(diào),籽粒中維生素E含量提高；籽粒在鼓粒足期到初熟期轉(zhuǎn)變過程中,基因表達量上調(diào),籽粒中維生素E含量下降；籽粒脫水到達成熟期,基因表達量下調(diào),維生素E含量達到最高。相關(guān)分析顯示籽粒中該基因表達量與維生素E含量呈負相關(guān)(-0.951*)。

1-9依次表示時期內(nèi)取樣次數(shù)；a-h依次表示樣品間差異顯著性。圖14-16同。1-9. The number of samplings in a period; a-h. The significance of differences between samples.The same as Fig.14-16.

圖14 R5-R8生育期籽粒中動態(tài)維生素E含量Fig.14 Dynamic vitamin E content in grain at growth stage of R5-R8

2.3.2 籽粒生殖生長時期GmVE2基因表達模式和維生素E含量相關(guān)關(guān)系 通過對籽粒在R5-R8生殖生長時期的GmVE2基因表達量和維生素E含量進行分析(圖15)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),基因在R5-R6時期基因表達量下降,進入R7時期表達量顯著提高,在R8時期表達量下降到最低,而維生素E含量變化趨勢則與之相反。結(jié)果表明,大豆R8時期籽粒通過有機物積累后處于休眠狀態(tài),代謝緩慢,該時期籽粒中GmVE2基因表達量最低,維生素E含量最高。

圖15 籽粒各生殖生長時期GmVE2基因表達量和維生素E含量Fig.15 Expression of GmVE2 gene and vitamin E content in grain at different reproductive growth period

2.3.3 植物組織中GmVE2基因表達模式和維生素E含量 采用上述定量檢測對大豆組織進行處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn),GmVE2基因在大豆植物組織中的表達量在莖中最高,其次是大豆子葉和葉片,且綠色組織中GmVE2基因表達量和維生素E含量顯著高于非綠色組織(圖16),進一步推測該基因主要活躍位置為葉綠體。另外,維生素E含量在組織中普遍偏低,在子葉中較高,芽中含量最低。

圖16 大豆植物組織中GmVE2基因表達量和維生素E含量Fig.16 Expression of GmVE2 gene and vitamin E content in soybean plant tissue

3 討論與結(jié)論

高等植物中的葉綠體是維生素E生物合成的主要場所[16-17],有研究發(fā)現(xiàn)高等植物中NADH復(fù)合體介導(dǎo)的,圍繞葉綠體PS Ⅰ的循環(huán)電子傳遞系統(tǒng)是植物適應(yīng)各種自然環(huán)境脅迫的一個十分重要的保護機制[18]。其中,NADH脫氫酶和維生素E合成都與植物光合作用有關(guān)。在植物衰老過程中,從葉綠體到有色體的過渡以及在種子發(fā)育過程中維生素E的含量均增加[19-20]。Catalá等[21]學(xué)者研究觀察發(fā)現(xiàn),NDHA和NDHF在大麥黃化質(zhì)體向葉綠體發(fā)育過程中表達量逐漸減少,NAD(P)H脫氫酶活性逐漸降低,而在衰老的葉片組織中表達量又增高；進而發(fā)現(xiàn)在果實成熟初期(即葉綠體轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩w期間),NDH積累在外果皮中,其含量和活性隨著果實轉(zhuǎn)紅而降低[22]。干旱條件下,基因缺失煙草突變體對抗霉素比野生型敏感得多,且具有較高的維生素苯醌水平,表明其抗氧化能力減弱[23]。而GmVE2基因可通過調(diào)節(jié)葉綠體PS Ⅰ系統(tǒng)電子鏈傳遞間接影響ATP合成,從而調(diào)控葉綠體中磷酸化反應(yīng)來影響生育酚合成底物PDP主要前體的合成,進而調(diào)控維生素E合成。本研究通過對大豆GmVE2進行生物信息學(xué)分析,預(yù)測結(jié)果表明,GmVE2基因編碼區(qū)共編碼167個氨基酸,分子式為C904H1 326N208O246S10,分子質(zhì)量為19.364 3 ku,總原子數(shù)為2 694,理論等電點(pI)為4.78,脂肪指數(shù)為87.01；蛋白正負電荷殘基數(shù)分別為11和23；GmVE2蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)和GRAVY值分別為25.02和0.043,說明GmVE2編碼蛋白是穩(wěn)定的疏水性蛋白并存在跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽和磷酸化位點。并從東農(nóng)50中克隆GmVE2基因并構(gòu)建植物表達載體,為后續(xù)驗證提供載體資源。

葉片是主要生育酚合成器官,莖是生育酚主要運輸器官,大豆籽粒是生育酚主要貯藏器官。生育酚主要存在于葉綠體、細胞質(zhì)膜等膜性結(jié)構(gòu)上,由于其結(jié)構(gòu)的特殊性,頭部酚羥基能夠捕獲并清除ROS,抑制多不飽和脂肪酸(PUFA)氧化,從而保護植物體細胞避免過度氧化產(chǎn)生的有害物質(zhì)的毒害。保護DNA和染色體免受破壞,通過中斷自由基反應(yīng)從而保護細胞膜功能,還可以延緩光引起的氧化分解,保護葉綠體光合作用。植物體內(nèi)抗壞血酸和谷胱甘肽可以通過植物本身Halliwell-Asada循環(huán),將生育酚過氧化自由基重新還原成生育酚[24-25]。生育酚也參與植物信號傳導(dǎo)、基因表達和體內(nèi)糖類運輸[26]。前人研究發(fā)現(xiàn),植物生長R6期維生素E各組分積累量最少,R8期其含量基本穩(wěn)定,大豆籽粒中最終維生素E含量主要由R6-R7期決定[9]。本研究利用東農(nóng)50不同生育時期的籽粒以及各組織進行基因表達量與維生素E含量相關(guān)分析,結(jié)果表明GmVE2基因在R7生育時期的籽粒中動態(tài)表達量最高,維生素E含量在R8期的籽粒中最高,動態(tài)籽粒中GmVE2基因的動態(tài)表達量與維生素E含量呈顯著負相關(guān)(-0.951*),在各綠色組織中GmVE2基因表達量及維生素E含量均顯著高于其他組織。最終驗證了該基因可影響維生素E含量,為高維生素E大豆新品種的培育提供理論依據(jù)。

本研究通過對大豆GmVE2進行生物信息學(xué)分析,預(yù)測該基因編碼蛋白分子式為C904H1 326N208O246S10,分子量為19.336 4 ku,為穩(wěn)定的疏水性蛋白,存在跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽及多個潛在磷酸化位點。并從東農(nóng)50中克隆GmVE2基因并構(gòu)建植物表達載體,為后續(xù)驗證提供載體資源。另外,研究發(fā)現(xiàn)動態(tài)籽粒中GmVE2基因的動態(tài)表達量與維生素E含量呈顯著負相關(guān)(-0.951*),在綠色組織中GmVE2基因表達量及維生素E含量均顯著高于其他組織。