大腸側向發育型腫瘤兩種亞型的分子機制的研究

劉一品，劉輝

（濱州醫學院煙臺附屬醫院 消化內科，山東 濱州）

0 引言

大腸側向發育型腫瘤(LST) 的組織病理學特點及分子機制研究國內外研究較少，但其為大腸癌的癌前病變，其有獨特的形態及發病特點,深入研究其組織病理學特點及分子發生機制，可以發現其自身的特點，對其做到早期預防，早期治療，阻止其癌變。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016 年6 月至2019 年6 月內鏡檢查及治療的直徑＞1.0cm 的LST 標本40 例，根據內鏡下形態分為顆粒型（LST-G）25 例和非顆粒型（LST-NG）15 例。

1.2 研究方法

1.2.1 內鏡黏膜切除技術

采用奧林匹斯H290、Q260J 內鏡。染色劑選用0.4%靛胭脂。病變經NBI 內鏡及染色內鏡仔細觀察后，根據內鏡下直徑及形態，選擇內鏡EMR、EPMR 或ESD切除病變。下列情況不采用內鏡治療：①Pit 分型VN 型；②黏膜下注射抬舉征陰性；③凝血機制差。術后病理癌如侵犯粘膜下層超過1000um 需要追加手術治療。

1.2.2 主要試劑和儀器

DNA 提取試劑盒和全自動核酸提取儀HR968 來自河南惠爾納米科技有限公司，DNA 測序儀3730xl DNA Analyzer 來自 Thermo Fisher。

1.2.3 實驗方法：PCR-測序法（PCR-Sanger）

1.2.3.1 1DNA 提取方法

磁珠法提取，并保存在-20℃冰箱中。

1.2.3.2 引物設計

設計引物，組織DNA 標本擴增KRAS、APC 基因片段，PCR 技術檢測KRAS、APC 基因的具體突變位點，由山東修越生物技術有限公司檢測。

1.3 統計學方法

應用SPSS 19.0 統計學軟件處理數據，兩組均數間的比較采用t檢驗，兩組間率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 LST 的臨床病理特征

本研究共納入38 位患者鏡下發現LST40 例，年齡 45-77 歲，男 20 例，女 18 例，其中顆粒型（LST-G）25 個，非 顆 粒 型（LST-NG）15 個。 顆 粒 型 LST 直徑 32.0±10.4cm，非顆粒型 LST 直徑 20.4±11.2cm，LST-G 的平均直徑大于 LST-NG（P＜0.05）, 左半結腸 LST26 例，右半結腸14 例。40 例LST 由內鏡醫師根據內鏡下形態特點及直徑分別選擇EMR、EPMR 及ESD。其中 EMR8 例，EPMR5 例，ESD 術 27 例，術后追加外科手術4 例。術后病理30 例腺瘤，6 例粘膜內癌,4 例黏膜下癌浸潤深度＞1000um。

2.2 兩組亞型基因表達情況的比較

LST-G 的 KRAS 突變率為 44.0%(11/25)、LST-NG為 6.7%（1/15），LST APC 突變率為 16.0%(4/25),LSTNG 為 53.3%(8/15)。LST-NG 組 KRAS 突 變 率 低于 LST-G 組，差 異 有 統 計 學 意 義（P＜0.05），LSTNG 組APC 突變率高于LST-G 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

側向發育腫瘤(LST) 最早由日本Kudo 等提出，內鏡下表現為沿著腸壁呈側向生長的有別于一般腺瘤的一種特殊形態[1,2]。LST 作為大腸癌的癌前病變，目前被國內外日益重視。按內鏡形態不同分為LST-G 和LST-NG 兩個亞型, 兩者之間病理特點及分子發生途徑尚無系統的研究。

表1 兩組亞型臨床和組織病理學特征、KRAS、APC 基因突變率

本研究結果顯示，LST-G 和LST-NG 的病理組織學特征不同。LST-G 體積偏大，LST-G 的平均直徑大于 LST-NG（P＜0.05）。其中有 25%LST 發生癌變，主要是大結節型LST 及LST-NG 容易發生癌變，癌變深度主要是粘膜內癌和粘膜下層浸潤，說明LST 是大腸癌的癌前病變，且癌變率較高，LST-NG 在體積較小時就可能發生癌變。

大腸癌的發生發展是從正常細胞向癌變逐漸演變，經歷了腺瘤-癌序列，有多個遺傳突變參與，[3]有研究說明LST 可能具有和傳統腺瘤不同的獨特的遺傳分子機制。其中APC 基因和KRAS 基因與大腸癌發展密切相關。有學者研究發現[4]，ras 基因突變在早期腺瘤為7%，中期腺瘤為57%，認為ras 基因突變可能是大腸腺瘤惡變的初始事件。我們的數據顯示，KRAS 突變在LST-G 病例中比在LST-NG 病例中更為常見(P＜0.05)。考慮到RAS-MAPK 激活中的KRAS基因突變，我們的數據表明這一途徑的激活對LST-G的發展比對LST-NG 的發展更重要。APC 基因屬于抑癌基因，其基因突變參與了部分大腸癌的發展過程，而且是這一過程較早發生事件。Shi 等[13]報道Wnt/β-catenin/c-myc 途徑激活與 LST 的發生和惡變密切相關。本研究結果提示 APC 基因突變率在 LST-NG比 LST-G 高 (P＜0.05)，提示 APC 基因參與的 wnt/β-連環蛋白信號途徑可能與LST-NG 發生發展有更密切的聯系。

總之，本研究發現LST 兩個亞型具有不同的組織病理類型, 分子發生機制也不同。LST-G 似乎與KRAS 基因突變更相關，而LST-NG 可能與APC 基因突變更相關。這些發現表明可能LST 兩個不同亞型的發生、發展的分子機制不同。