一例副豬嗜血桿菌病的診斷與分析

堯國民，舒 鳴，王 湘，李中波，侯強紅

懷化職業技術學院，湖南懷化 418000

近年來，懷化市生豬養殖發展迅速，規模化養殖模式占比逐漸提高，同時養豬業給當地政府和養殖戶帶來巨大經濟收入。在生豬養殖過程中，特別是飼養管理水平較低的情況下，豬群易感染諸多病原，從而引發疾病，甚至導致死亡。其中副豬嗜血桿菌病在豬場中較為常見，不同階段豬群對該病均易感，但由于保育豬或仔豬免疫性能低下，更易受到該病的感染，同時引發嚴重的臨床表現，如腦膜炎、關節炎和全身性漿膜炎等，且發病率和死亡率均較高，給豬場造成巨大經濟損失[1，2]。

龍劍[3]等對湖南部分地區規模化豬場發病仔豬進行細菌感染情況調查，結果發現副豬嗜血桿菌（HPS）檢出率高達30%（24/80），且分離的菌株對部分常用抗生素耐藥；河南及周邊地區發病豬群HPS 分離率為21.7%（531/2445），且血清型眾多，但主要以4 型為主，提示HPS 在我國豬場流行情況嚴重，給養殖業造成經濟損失巨大。本文以一例保育豬副豬嗜血桿菌病為例，對其臨床和實驗室診斷過程進行闡述，同時根據藥敏試驗結果對豬群用藥，最終使疫情得到有效控制。

1 豬場發病情況

懷化市某規模化豬場飼養保育豬約900 余頭，該豬場為自繁自養模式。2019 年11 月初，由于天氣突然降溫，其中一棟欄舍部分保育豬發病，病豬主要臨床癥狀包括體溫升高（約40 ℃）、精神沉郁、采食量下降、少部分發病嚴重的病豬咳嗽、呼吸困難、且四肢關節腫脹，臥躺在地，不愿合群。

2 病理變化與樣品采集

對死亡不久的病豬進行解剖，其腹股溝淋巴結和頜下淋巴結腫大，且切面多汁；胸腔內蓄積大量渾濁液體，且肺部實變，肺部表面組織與腹腔黏連，大量纖維狀物質滲出；剖開腫脹關節，有大量清亮積液流出。

無菌采集病變明顯組織器官，如淋巴結和肺臟等，并分別收集腹腔和關節處積液，分別標記后，進行實驗室診斷。

3 實驗室診斷

3.1 細菌性病原檢測

3.1.1 細菌分離培養與鑒定

取適量病變組織和積液入滅菌研缽，用滅菌眼科剪將組織充分剪碎，其后以1:10 比例加入無菌生理鹽水，充分混勻后用無菌紗布過濾；用滅菌接種環蘸取少量過濾液分別在普通瓊脂培養基和10%乳牛血清的TSA 培養基表面平板劃線，放置于37 ℃恒溫箱內培養，分別于24 h 和48 h 觀察平板培養基表面菌落生長情況。結果：普通瓊脂培養基表明無任何菌落生長，而TSA 培養基表面出現露珠狀、透明而光滑的菌落。將單一菌落均勻涂抹在玻璃片上，以革蘭氏染色法對樣品進行處理，其后油鏡下觀察菌落形態：菌株為革蘭氏陰性菌，形態為單個或成對絲狀桿菌。

3.1.2 小鼠致病性試驗與藥敏試驗

用滅菌牙簽隨機挑取3 個菌落接種于TSB 培養基，37 ℃培養24 h，其后將菌液（100 μL）腹腔注射至5 只健康小鼠體內（試驗組I、II 和III），并設置對照組（注射等體積生理鹽水），觀察不同組小鼠存活情況。結果發現3 組試驗組小鼠死亡率高達100.0%、100.0%和80.0%，而對照組小鼠一直存活，且將試驗組小鼠病變組織處理后染色鏡檢，菌株形態和大小與之前檢測結果一致，說明小鼠是因感染副豬嗜血桿菌而死亡，同時本次試驗分離的副豬嗜血桿菌分離株均為強毒株。

將其中一株副豬嗜血桿菌強毒株進行擴增培養，同時用L 型玻棒將適當濃度菌液均勻涂抹在固體培養基表面，于37 ℃干燥2 ～3 min，其后將14 種不同藥敏紙片貼在培養基表面（4 種紙片/培養基），并固定。將培養基放在37 ℃恒溫箱內培養，24 h 后判定菌株對不同抗生素的敏感性。藥敏試驗結果顯示：菌株對頭孢噻呋、氟苯尼考、氧氟沙星、阿莫西林和卡那霉素高度敏感，對阿米卡星、頭孢氨芐、新霉素、鏈霉素和四環素中敏，對環丙沙星、諾氟沙星、慶大霉素和青霉素高度耐藥。

3.2 病毒性病原檢測

取發病明顯組織，適當處理用商用試劑盒提取組織DNA 和RNA 核酸，并用核轉錄試劑盒將RNA反轉錄為cDNA，以DNA 或cDNA 樣品為模板，使用PCR 或RT-PCR 法檢測樣品中是否存在豬圓環病毒、豬偽狂犬病毒、豬藍耳病毒和豬瘟病毒病原。結果發現，被檢樣品中均未檢測出以上病原，提示發病豬群未感染以上4 種病毒。

4 防控措施

4.1 緊急治療措施

將病豬與假定健康豬隔離飼養，對發病豬群肌肉注射氟苯尼考，其用藥量為15 mg/kg，每日1 次，連續用藥4 d；在飼料中添加阿莫西林，對全豬進行飼喂，每噸飼料中添加阿莫西林1 kg，連續用藥7 d。

4.2 其它處理措施

飼料中添加適量黃芪多糖和多維等，旨在提高豬群抗病能力；將病死豬群進行深埋，并無害化處理；全場進行衛生打掃，并用2%濃度氫氧化鈉溶液對全場進行噴灑消毒，2 ～3 h 后用大量清水對消毒劑進行稀釋，每日1 次，連續消毒4 d；在豬場走廊撒生石灰，進行消毒。

連續實施以上治療與防控措施1 周后，疫情得到明顯控制。

5 討論

副豬嗜血桿菌嚴重危害我國養豬業發展，是導致保育豬死亡的主要細菌性疾病之一，由于其臨床及病理變化明顯，根據其臨床癥狀可對本病做出初步判斷，但進一步確診還需要實驗室診斷技術。由于該菌株含有多種血清型，不同血清型菌株對抗生素耐藥情況不同，所以需要根據藥敏試驗結果選擇對菌株敏感的藥物對疫病進行治療。

本次案例中將副豬嗜血桿菌菌株進行分離與鑒定，并隨機篩取3 株菌株進行小白鼠接種，確定分離菌株的高致病性，其后對高致病的菌株進行藥敏試驗，根據藥敏試驗結果選擇菌株高度敏感的氟苯尼考和阿莫西林作為抗病藥物，同時提高豬群飼養管理水平，最終使疫情得到有效控制。