羊群布魯氏菌病疫苗免疫后3 種血清學抗體檢測方法的比較

李民超

北京市門頭溝區動物疫病預防控制中心，北京 100000

布魯氏菌病（也稱布氏桿菌病，簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N人畜共患病。按照北京市動物疫病強制免疫實施方案的要求，門頭溝區對轄區內羊只進行布魯氏菌病集中免疫。本文利用動物布魯氏菌病診斷技術GB/T 18646-2018 中的虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗常量法和競爭酶聯免疫吸附試驗，檢測轄區內羊群布魯氏菌病口服免疫后抗體水平。并根據陽性判定的準確率的差異問題，分析比較，從而選擇更準確更適合的檢測方法。

1 布病集中免疫情況

門頭溝區使用的免疫疫苗是北京市動物疫病預防控制中心采購的中牧實業股份有限公司的布氏菌病活疫苗（S2 株），規格為80 頭份/瓶。依據北京市動物疫病預防控制中心指導要求，采取口服免疫的方式，山羊和綿羊不論年齡大小，一律口服100 億CFU/頭只。

2 材料與方法

2.1 材料

結合門頭溝區實際情況，羊養殖存欄較小、全部是散養模式，區疫控中心選擇存欄較多的養殖戶開展抗體監測。按時間順序，未免疫血清26 份；免疫后1 個月血清43 份，免疫后2 個月血清15 份，免疫后3 個月血清16 份，免疫后4 個月血清11 份。

診斷試劑：中監所的虎紅平板凝集試驗抗原、試管凝集試驗抗原，蘭獸研cELISA 試劑盒。

2.2 檢測方法

虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗均按照《動物布魯氏菌病診斷技術》（GB/T18646-2018）進行檢測和結果判定。競爭酶聯免疫吸附試驗按照《動物布魯氏菌病診斷技術》（GB/T18646-2018）和試劑盒說明書開展檢測和結果判定[1]。

3 檢測結果及分析

3.1 檢測結果

未免疫散養戶26 份血清，三種檢測方法陽性數量均為0。免疫后各月份檢測結果見圖1。

圖1 免疫后各月份檢測結果統計

3.2 結果分析

通過上述數據來看，非免疫的羊血清三種檢測方法的陽性率均為0%；而免疫后的羊群布魯氏菌病抗體陽性的情況為：競爭酶聯免疫吸附試驗的檢測陽性率大于虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗。

通過競爭酶聯免疫吸附試驗的結果來看，隨時間的推移，抗體陽性率越來越低。雖然免疫后第一個月是抗體產生的高峰，但通過虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗來看，免疫后第1 個月陽性率僅為20.93%和16.28%；從免疫后2 個月開始至免疫后4 個月，虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的陽性檢出率幾乎為0。

4 討論

數據表明，常規血清學診斷中虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗抗體檢測效果不佳，而競爭酶聯免疫吸附試驗卻是效果良好。

抗原刺激機體產生大量抗體，這些抗原存在于機體時產生能夠與凝集試驗抗原所結合的抗體，因此試管凝集和虎紅平板凝集試驗能夠出現部分陽性現象。隨著大量抗體的產生，抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物后被消滅，抗原數量大量下降，沒有了抗原的刺激，虎紅平板凝集和試管凝集試驗就檢測不出對應的抗體了，因而無法檢測出陽性。而競爭酶聯免疫吸附試驗檢測出的抗體是抗原特定位置或結構產生的，這一類特定抗體在動物機體內存在時間也就是4 個月左右[2]。

經上述討論與分析，得出的結論是經過布魯氏菌疫苗免疫后的羊群，在檢測抗體時可以優先選擇競爭酶聯免疫吸附試驗方法，在未發生免疫的養殖場戶中可以使用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗進行陽性判定，如果實驗室條件允許的情況下使用PCR 確診。