冷凍胚胎解凍后過夜培養增殖與否對移植結局的影響

黃芬 楊冠群

（柳州市人民醫院 廣西 柳州 545006）

近年來，隨著人類輔助生殖技術的不斷發展，冷凍胚胎移植技術（frozen-thawed embryo transfer，FET）得以廣泛應用[1]。研究表明，提前解凍過夜培養有助于評價胚胎的發育潛能，改善凍融周期妊娠結局[2]。本研究回顧性分析在我院進行的195例凍融胚胎移植周期的臨床資料，旨在探討D3 卵裂期胚胎提前解凍行過夜培養，胚胎有無卵裂球增殖對移植結局的影響，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019 年1 月—10 月195 例在我科進行凍融胚胎移植周期的臨床資料，均為玻璃化冷凍，解凍后胚胎完全復蘇，患者年齡22 ～48 歲，平均（36.42±5.81）歲。按過夜培養后有無卵裂球增殖劃分為A 組（有增殖組）161 周期，和B 組（無增殖組）34 周期。

1.2 方法

1.2.1 冷凍胚胎的選擇 胚胎冷凍前進行形態學評分，選擇正常受精、D2 發育至2 ～4 細胞胚胎且D3 天持續發育到6 ～8細胞碎片較少的胚胎進行冷凍[3]。

1.2.2 胚胎解凍方法 采用日本玻璃化解凍液套裝（KITAZATO Corporation），嚴格按照說明書步驟進行解凍操作。將冷凍載桿從液氮中取出后迅速插入由二甲基亞砜、乙二醇和蔗糖組成的解凍液(TS 液、DS 液、WS1 液、WS2 液)中，先置于TS液中，38℃熱臺上保持1min，然后將胚胎移入DS 液室溫下保持3min，再移入WS1 液中室溫下保持5 min，最后移入WS2 液38℃熱臺上保持5min，解凍完成后充分洗滌，將胚胎放入已平衡好的蓋油G2 培養液中過夜培養。

1.2.3 胚胎分級標準及胚胎完全復蘇標準 胚胎分級標準[4]：Ⅰ級：卵裂球大小均勻，形狀規則，透明帶完整，胞質均勻清晰，沒有顆粒現象；碎片在0%～5%；Ⅱ級：卵裂球大小略不均勻，形狀略不規則，胞質有顆粒現象；碎片在6%～20%；Ⅲ級：卵裂球大小明顯不均勻，形狀不規則，胞質有粗大的顆粒；碎片在21%～50%；Ⅳ級：卵裂球大小嚴重不均勻，胞質可有嚴重顆粒現象；碎片在50%以上。以解凍后復蘇胚胎的卵裂球無形態學可觀察到的損傷作為胚胎完全復蘇的標準。

1.2.4 移植子宮內膜準備方案 對于月經規律和正常排卵患者，選擇自然周期。如果月經缺少規律性，且排卵障礙，則選擇人工周期。

1.2.5 移植及妊娠判定 B 超引導下施行胚胎移植術，術后予以黃體支持，在移植后11 ～14 天，行血清HCG 檢查，判斷是否妊娠；若血清HCG 為陽性，繼續黃體支持，在移植28 ～35 天超聲檢查見孕囊、胚芽或胎心搏動確定為臨床妊娠。

1.3 統計學方法

2.結果

195 例周期中，40 例采用自然周期，155 例人工周期；完全復蘇胚胎375 枚，移植胚胎370 枚，每例患者移植胚胎為（1.89±0.39）枚。

2.1 兩組患者基本資料比較

A 組161 個周期，B 組34 個周期，兩組間一般情況比較差異均無統計學意義（P ＞0.05）。見表1。

表1 兩組患者一般情況比較

2.2 增殖影響

有增殖的A 組的臨床妊娠率與種植率均高于沒有增殖的B組，差異具有統計學意義（P ＜0.05），見表2。

表2 增值影響[%（n/N）]

3.討論

影響FET 結局的因素復雜，除患者年齡、子宮內膜容受性等原因外，移植胚胎的發育潛能是其中一個重要影響因素。本研究提示，凍融胚胎復蘇后過夜培養，卵裂球進一步增殖的胚胎具有較好的發育潛能，臨床妊娠率及胚胎種植率均優于未增殖的胚胎。表明提前解凍過夜培養觀察復蘇后胚胎的進一步發育情況對胚胎技術人員及臨床醫生選擇高質量的胚胎提供有價值的參考。有研究發現，隨著胚胎復蘇后卵裂求數目的進一步增加，臨床妊娠率似有逐漸升高的趨勢[5]。

凍融胚胎經過一段時間體外培養卵裂球未發生增殖的胚胎大多數存在染色體異常。而此類胚胎進行移植，會影響臨床著床率，即使著床成功，也會因為染色體異常而發生流產[6]。LAVERGE[7]等對復蘇后無生長的胚胎進行熒光原位雜交，發現這類胚胎大多數有單倍體、三倍體、四倍體甚至六倍體和嵌合體的發生，僅有20%左右的胚胎表現為正常二倍體，因此建議不要移植此類胚胎。

可見凍融胚胎提前解凍行過夜培養，觀察卵裂球的增殖情況有助于評價胚胎的種植潛能，為胚胎的選擇提供可靠依據，也有利于臨床醫生對患者妊娠結局進行預判。