大棗花清蒸后主要活性成分含量變化的初步研究

劉世軍，張 陽，唐志書，張 娛，宋忠興，崔春利，許洪波，劉紅波，張軍武，王少程

(陜西中醫藥大學/陜西省中藥資源產業化協同創新中心/秦藥特色資源研究開發國家重點實驗室(培育)/陜西省創新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083)

大棗花為鼠李科植物棗ZiziphusjujubaMill的干燥花朵。一般5-7月左右開花，掉落到地上的花朵被人們當做垃圾處理，非常可惜，而沒有被充分利用。目前，對于大棗果實和大棗葉的研究比較多，而對于大棗花的研究很少，幾乎沒有。根據研究者對大棗和大棗葉的研究和我們前期對大棗花定性預試驗研究發現大棗花含有酚類、黃酮、三萜、生物堿、皂苷、多糖等成分，課題組對大棗花酒蒸前后其活性成分總酚、總黃酮、總三萜、總生物堿、總皂苷、總多糖含量的變化進行研究，為大棗花進一步研究和產品的開發利用提供一定的參考。

1 材料

1.1 樣品與試劑

大棗花：產地陜西；蘆丁(16122801，陜西樂博生化科技有限公司)、沒食子酸(B20851，上海源葉生物科技有限公司)、齊墩果酸(16051205，陜西樂博生化科技有限公司)、蓮心堿(B20730，上海源葉生物科技有限公司)、甲醇(天津市天力化學科技有限公司)、甲酸(天津市科密歐化學試劑有限公司)、NaOH(天津市天力化學試劑有限公司)、香草醛(天津市科密歐化學試劑有限公司)、冰醋酸(天津市天力化學科技有限公司)、乙酸乙酯(天津市天力化學科技有限公司)、高氯酸(天津市天力化學科技有限公司)、Folin酚試劑(天津市天力化學科技有限公司)、濃鹽酸(西安三浦化學試劑有限公司)、無水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)，所用化學試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

電熱鼓風干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)；高速萬能粉碎機(天津鑫博得儀器有限公司)；KQ-300DE型數控超生波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；島津UV-2600紫外可見分光光度計；電子分析天平(賽多利斯科儀器有限公司)；DZKW-4電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業儀器有限公司)；KSW型電爐溫度控制器(北京科偉永興儀器有限公司)；箱式電阻爐(北京科偉永興儀器有限公司)；WFH-201B紫外透射反射儀(上海精科實業有限公司)；MH-500調溫型電熱套(北京科偉永興儀器有限公司)；C21-HT2109多功能電磁爐；離心機等。

2 方法與結果

2.1 大棗花的蒸制處理

取新鮮干燥的棗花進行挑揀，一部分棗花直接蒸制30 min得到清蒸品，一部分棗花干燥直接用于實驗。樣品的水分控制在5%以內。

2.2 活性成分測定[1～2]

2.2.1 棗花甲醇提取液的制備 準確稱取各樣品0.5 g，轉入50 mL離心管中，然后分別加5 mL 80%甲醇溶液，100 W超聲提取30 min，4 000 r·min-1離心10 min后收集上清液，殘渣以同樣方法提取2次，合并提取液，用甲醇定容至10 mL，4℃冷藏備用。

2.2.2 總酚含量的測定[3]主要有:

(1)標準曲線的繪制。稱量1 mg沒食子酸標準樣品，用蒸餾水定容至10 mL，得濃度為0.1 mg·mL-1標準液，分別準確量取上述標準液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加6 mL蒸餾水，搖勻后加Folin酚試劑0.5 mL，搖勻，1 min后加入1.5 mL的20% Na2CO3溶液，混勻定容，在75℃恒溫水浴反應10 min，取出后冷卻后于760 nm波長處測定其吸光度。

圖1 總酚標準曲線

(2)樣品測定。準確移取樣品80% 甲醇提取液0.1 mL，分別加入稀釋一倍的Folin酚試劑0.5 mL，混勻后加入1.5 mL，質量分數10%的Na2CO3溶液，然后用蒸餾水定容至10 mL，混合均勻，75℃恒溫水浴反應10 min，取出冷卻后于760 nm波長處測定其吸光值。

表1 樣品總酚含量測定

由表1可知生品總酚含量為12.085 mg·g-1，經過清蒸后其含量增加為12.694 mg·g-1，大棗花清蒸后總酚含量增加。

2.2.3 總黃酮含量測定[4]主要有:

(1)標準曲線的繪制稱量蘆丁標準品2 mg，80%甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，即為0.2 mg·mL-1的蘆丁標準液，吸取蘆丁標準液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液補充至5 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入0.3 mL 10% Al(NO3)3溶液搖勻，6 min后加入4 mL，1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻，用80%甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長處測定吸光度。

圖2 總黃酮標準曲線

(2)樣品測定。用移液槍準確移取生品80%甲醇提取液1 mL，清蒸品0.7 mL于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液補充至5 mL，加入5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，6 min后加入1 mol·L-1的NaOH溶液4 mL，混勻，用80% 甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，10 min后在510 nm波長處測定吸光度。

表2 樣品總黃酮含量測定

由表2可知大棗花生品總黃酮含量為9.567 mg·g-1，經過清蒸后其含量增加為12.497 mg·g-1，大棗花清蒸后總黃酮含量增加。

2.2.4 總三萜含量的測定[5]主要有:

(1)標準曲線的繪制。稱量齊墩果酸對照品1 mg，用80%甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中搖勻，即得對照品溶液。準確吸取對照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后于90℃水浴加熱反應15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻后在560 nm波長處測定吸光度，制作標準曲線。

(2)樣品測定。準確移取樣品80%甲醇提取液0.1 mL于10 mL容量瓶中，水浴揮去溶劑后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后于70℃水浴加熱反應15 min，冷卻至室溫，加乙酸乙酯定容至刻度線，搖勻后在560 nm波長處測定吸光度。

圖3 總三萜標準曲線

表3 樣品總三萜含量測定

由表3可知大棗花生品總三萜含量為6.107 mg·g-1，經過清蒸后其含量增加為9.654 mg·g-1，大棗花清蒸后總三萜含量增加。

2.2.5 總生物堿含量測定[6～7]主要有:

(1)標準曲線的繪制。稱取2 mg蓮心堿對照品至10 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解定容，配置成0.2 mg·ml-1的溶液。分別量取0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL于10 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度于282 nm波長處測定吸光度。

圖4 總生物堿標準曲線

(2)樣品制備。①配制1%鹽酸250 mL，1% 氫氧化鈉300 mL備用。②分別稱取各棗花樣品0.5 g置于離心管中，并貼好標簽。③向每個離心管中分別加入10 mL的1%鹽酸，調節pH=2，浸泡2 h，使生物堿都形成生物堿鹽溶于酸水中。④堿化。每個離心管中分別加入1%氫氧化鈉，調節pH為9～10，使生物堿游離出來。⑤有機溶劑萃取。分別加入無水乙醇15 mL，封住蓋，超聲處理40 min，取出離心管，準備下一步處理。⑥過濾樣品溶液。⑦然后將經過過濾后的濾液用無水乙醇溶液定容到50 mL的容量瓶中并貼上標簽備用。⑧用移液槍移取生品和清蒸品試液1 mL于10 mL容量瓶中，用無水乙醇溶液稀釋至刻度。

(3)樣品測定。將上述溶液于282 nm波長處測定吸光度。

表4 樣品總生物堿含量測定

由表4可知大棗花生品總生物堿含量為59.137 mg·g-1，經過清蒸后其含量增加為67.343 mg·g1-，大棗花清蒸后總生物堿含量增加。

3 結論和討論

大棗花作為大棗植物的一部分，在花季常常散落在地，被人們當做垃圾處理而不被重視。課題組對大棗花清蒸前后化學成分進行了初探。根據試驗結果，大棗花經過清蒸后其主要活性成分總酚、總黃酮、總三萜、總生物堿含量均增加。這其中的炮制原理是什么,這些主要成分的藥理作用是什么,有待進一步的深入研究。筆者研究的實施可以變廢為寶，為大棗花的深入研究奠定一定的基礎，同時為大棗花產品的開發和利用提供一定的參考。