不同月齡廣西富鳳麻公雞的繁殖性能比較

施文 杜幸柱 彭臘如 黃振文 謝龍 洪永興 廖玉英 陸陽清

摘要：【目的】明確不同月齡廣西富鳳麻公雞間的繁殖性能差異和相關性，為其種質資源保護提供更好的配種條件，同時為種雞生產提供參考依據。【方法】以廣西富鳳麻公雞為研究對象，從精液品質、睪丸發育狀況及血清激素等角度系統研究不同月齡公雞間的繁殖性能差異和相關性，并使用不同月齡公雞的精液對母雞進行人工授精，孵化第9 d照蛋并統計受精率。【結果】5、8和18月齡廣西富鳳麻公雞的精液體積和精子密度無顯著差異（P>0.05，下同），18月齡廣西富鳳麻公雞的精子活力較5和8月齡公雞的精子活力極顯著降低（P<0.01，下同），在精子畸形率方面則表現為18月齡廣西富鳳麻公雞較5和8月齡公雞極顯著升高。廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間，隨著月齡的增長公雞睪丸的體積和重量均呈上升趨勢，睪丸曲細精管直徑呈增粗趨勢，血清睪酮含量呈上升趨勢;但在8～18月齡期間，整體上表現為隨著月齡的增長公雞睪丸的體積和重量呈下降趨勢，睪丸曲細精管直徑逐漸變細，且血清睪酮含量急劇下降。廣西富鳳麻公雞各繁殖性能指標間的相關性分析發現，血清睪酮含量與兩側睪丸總重量、精液體積與精子活力呈中等強度正相關，精子畸形率與血清睪酮含量、精子活力與精子畸形率呈強負相關。不同月齡廣西富鳳麻公雞精液的受精率無顯著差異。【結論】廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間其繁殖性能隨著月齡的增長而提高，但在8～18月齡期間整體上表現為繁殖性能隨月齡的增長而下降。即8月齡廣西富鳳麻公雞睪丸發育狀況最佳，生產上可適當提高8月齡公雞的利用率。

關鍵詞： 廣西富鳳麻公雞;月齡;繁殖性能;精子活力;畸形率;受精率;睪酮

中圖分類號： S831.89? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）05-1224-07

Abstract：【Objective】To clarify the difference and correlation of reproductive performance between different age groups of Guangxi Fufeng rooster， so as to provide better reference breeding conditions for the protection of the germplasm resources of Guangxi Fufeng rooster， and provide reference for improving the production of breeders. 【Method】Guangxi Fufeng rooster was as research object. Difference and correlation of reproductive performance between different age groups of Guangxi Fufeng rooster were studied through the perspectives of semen quality， testicular development and serum hormone. The hens were artificially inseminated with the sperm of the corresponding roosters at different month ages， eggs were incubated on the 9th day and fertilization rate was calculated. 【Result】There was no significant difference in semen volume and sperm density among 5-， 8- and 18-month-old Guangxi Fufeng roosters（P>0.05， the same below）， the sperm motility of 18-month-old was extremely lower than that of 5 and 8 months old（P<0.01， the same below）， in terms of sperm abnormality rate， the 18-month-old rooster was extremely higher than that of the 5-month-old rooster and the 8-month-old rooster. During 5- to 8-month-old， testicular volume and weight increased as month age increased， testicu-lar seminiferous tubule diameter enlarged and serum testosterone content increased. During 8- to 18-month-old， as month age increased， testicular volume and weight decreased， testicular seminiferous tubule diameter became thinner and serum testosterone content dropped sharply. Correlation analysis among the reproductive traits showed that testosterone content had moderately intensive positive positive correlation with testicular weight of both sides， semen volume and sperm moti-lity， sperm abnormality rate had intensively negative correlation with testosterone content， sperm motility and sperm abnormality rate. The fertilization rate of sperm from roosters at different month ages had no significant difference. 【Conclusion】The reproductive performance of Guangxi Fufeng roosters increase during the age of 5-8 months as month age increases， but decrease during the age of 8-18 months. The testicles of 8-month-old Guangxi Fufeng roosters are in the best condition， therefore the utilization of 8 month-old roosters can be enhanced in production.

Key words： Guangxi Fufeng rooster; month age; reproductive performance; sperm motility; sperm abnormality rate; fertilization rate; testosterone

Foundation item： National Natural Science Foundation of China（31360329）

0 引言

【研究意義】在家禽生產中常利用人工授精進行繁殖，一羽性成熟公雞可與多羽性成熟母雞配合，以獲得最高效益，一般繁殖性能良好的公雞能與30～35羽母雞配合（趙永軍，2009）。已有學者研究影響母雞產蛋性能的原因并加以改善（張秀榮等，2008;陸海英等，2014），但實際生產上公雞繁殖性能對生產率的影響更重大。公雞在繁殖過程中受多種因素影響，常出現采精精液量少或配種受精率低等繁殖性能低下的問題。因此，解決公雞精液質量問題對提高蛋雞生產效率及加強種質資源保護具有重要意義。【前人研究進展】至今，有關提高公雞繁殖性能方法的研究報道較多（譚千洪等，2011;官永勝等，2017;孫丹彤等，2018），但基于公雞自身年齡和精液質量指標的研究較少。公雞繁殖性能評定的常用指標有精液品質、受精率及睪丸大小等（韓楓，2005;朱琳等，2019）。其中，精液品質鑒定指標包括精液體積、精液滲透壓、精子密度、精子活力、精子畸形率和有效精子數等（王世銀，2008;李湛，2010）。趙增成和魏相法（1995）研究發現，公雞精液的體積與其年齡增長和體質下降有關，同時影響公雞的繁殖性能。Kelso等（1996）研究報道，家禽的精液品質隨著年齡的增長而下降，且該結論在人類精液也得到證實（Kidd et al.，2001）。此外，有研究發現種公雞體重與精液體積、精液pH和精子畸形率呈顯著正相關，而與精子密度和精子活力存在負相關（李維等，2018）。畸形率是衡量精子質量的一個重要指標（周其趙等，2009）。公雞精液精子畸形率對母雞的生產性能影響極大，以精子畸形率高的精液進行人工授精時受精率極低，主要是由于精子頂體反應受精子畸形率影響，且畸形率高時精子的運動能力和存活能力明顯下降（魏穎等，2019）。【本研究切入點】生產上，通常選擇精液量多、精子密度大、精液品質優的公雞留作種用，一般選用120～300日齡的青年公雞（劉淑新，2000），但種公雞的最適淘汰年齡還需進一步研究確定。因此，準確測定公雞的精液體積、精子活力和精子密度，才能確定人工授精中每羽母雞的輸精量，有效保證或提高受精率（甘建伉等，2012;王坤等，2014），但至今鮮見針對廣西富鳳麻公雞繁殖性能的研究報道。【擬解決的關鍵問題】以廣西富鳳麻公雞為研究對象，從精液品質、睪丸發育狀況及血清激素等角度系統研究不同月齡公雞間的繁殖性能差異和相關性，以期為廣西富鳳麻雞種質資源保護提供更好的配種條件，同時為種雞生產提供參考依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

選取5、8和18月齡的廣西富鳳麻公雞各25羽及2250羽配種母雞。精液稀釋液配方：在500.0 mL蒸餾水中加入7.0 g葡萄糖、1.8 g磷酸二氫鉀和7.0 g檸檬酸鈉，pH調至7.0～8.0。

1. 2 精液指標及受精率檢測

采集公雞精液并稱量精液體積，用稀釋液按1∶1稀釋后在37 ℃水浴鍋中恒溫保存，取20 μL稀釋精液在顯微鏡下檢測精子活力，統計視野中直線前進運動精子數占總精子數的比例;利用血細胞計數板計算精子密度。稀釋精液經伊紅染色后，在顯微鏡下檢查計算精子畸形率。受精率試驗中，采集5、8和18月齡公雞精液，以稀釋液進行1∶1稀釋后，按照1∶30的公母配比進行人工授精，收集雞蛋，消毒后在孵化室內按程序進行孵化，孵化第9 d照蛋并統計受精率。

1. 3 公雞血清睪酮含量檢測

采集不同月齡公雞血樣，3000 r/min離心10 min，吸取上層血清1.0～2.0 mL，分裝至2 mL的離心管中，4 ℃冰箱靜置過夜后送至廣西第二人民醫院，使用ARCHITECT i2000sr全自動免疫發光分析儀通過化學發光微粒子免疫檢測法檢測血清睪酮含量。

1. 4 公雞睪丸性狀檢測

稱量公雞體重后，宰殺解剖并分離睪丸，測量睪丸的長、寬、高和重量。制作睪丸石蠟切片，經HE染色后觀察比較不同月齡段公雞睪丸內曲細精管和各級生殖細胞的發育狀態。

1. 5 統計分析

使用GraphPad Prism 5.0對試驗數據進行單因子方差分析（One-way ANOVA），并制圖。

2 結果與分析

2. 1 廣西富鳳麻公雞精液品質分析結果

公雞精液品質分析結果（圖1）表明，5、8和18月齡廣西富鳳麻公雞的精液體積和精子密度無顯著差異（P>0.05，下同），18月齡廣西富鳳麻公雞的精子活力較5和8月齡公雞的精子活力極顯著降低（P<0.01，下同），在精子畸形率方面則表現為18月齡廣西富鳳麻公雞較5和8月齡公雞極顯著升高。顯微鏡下觀察到的畸形精子主要有雙頭畸形、折頸畸形、卷尾畸形、雙尾畸形及原生質滴未脫落畸形（圖2）。

2. 2 廣西富鳳麻公雞睪丸性狀分析結果

分離不同月齡廣西富鳳麻公雞睪丸，經測量和稱重發現，廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間，隨著月齡的增長公雞睪丸的體積和重量均呈上升趨勢;但在8～18月齡期間，整體上表現為隨著月齡的增長公雞睪丸的體積和重量呈下降趨勢（圖3和圖4）。

2. 3 廣西富鳳麻公雞曲細精管結構觀察分析結果

廣西富鳳麻公雞睪丸組織切片觀察結果（圖5）顯示，5和8月齡公雞的曲細精管內各級生殖細胞發育狀態良好，各細胞柱間分界明顯，細胞柱中的生殖細胞連接緊密，管腔中可見大量精子;18月齡公雞的曲細精管內各級生殖細胞逐漸退化，各細胞柱間分界模糊，細胞柱中的生殖細胞連接較松散，管腔中空，僅有少數精子。由圖6可看出，18月齡廣西富鳳麻公雞的睪丸曲細精管直徑極顯著小于5和8月齡廣西富鳳麻公雞。其中，廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間，隨著月齡的增長公雞睪丸曲細精管直徑呈增粗趨勢;在8～18月齡期間則表現為隨著月齡的增長公雞睪丸曲細精管直徑逐漸變細。

2. 4 廣西富鳳麻公雞血清睪酮含量分析結果

利用化學發光微粒子免疫檢測法對廣西富鳳麻公雞血清睪酮含量進行檢測分析，結果發現8月齡公雞血清睪酮含量較18月齡公雞的高，且差異極顯著（圖7）。廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間，隨著月齡的增長公雞血清睪酮含量呈上升趨勢;在8～18月齡期間則表現為隨著月齡的增長公雞血清睪酮含量急劇下降。

2. 5 廣西富鳳麻公雞各繁殖性能指標間的相關性

廣西富鳳麻公雞各繁殖性能指標間的相關性分析結果表明，公雞血清睪酮含量與兩側睪丸總重量呈中等強度正相關，精子畸形率與血清睪酮含量存在強負相關，精子活力與精子畸形率也呈強負相關，精液體積與精子活力呈中等強度正相關，其他繁殖性能指標間的相關性較弱（圖8）。

2. 6 廣西富鳳麻公雞精液受精率分析結果

分別采集5、8和18月齡廣西富鳳麻公雞的精液，以稀釋液進行1∶1稀釋后，按照1∶30的公母配比進行人工授精。孵化第9 d對雞胚受精率的檢查結果表明，各月齡組廣西富鳳麻公雞精液的受精率無顯著差異（圖9）。

3 討論

Tabatabaei等（2010）研究表明，隨著年齡的增加，公雞精液的精子密度和精子活力均會下降，而精子畸形率呈上升趨勢。該結論在其他動物中也得到廣泛驗證（Alavi et al.，2007）。本研究結果表明，18月齡廣西富鳳麻公雞的精液品質與5和8月齡時相比，其精子活力下降且伴隨著精子畸形率升高。相對于8月齡公雞，18月齡公雞的采精量也明顯下降。此外，隨著公雞月齡的增長，睪丸重量、精細管直徑及血清睪酮濃度等均呈下降趨勢。Lin等（2006）在公豬繁殖性能的研究中也發現睪丸重量對豬精液品質有明顯影響。說明廣西富鳳麻公雞的精液品質在8月齡達峰值后，隨著月齡的增長，精子質量逐漸下降。Douard等（2003）研究報道，火雞的精子活力受公雞年齡的影響顯著，32～35和39～42周齡公雞精液的受精率高于44～47周齡的公雞。姚靜等（2013）研究表明，母豬受孕率也取決于公豬的精子質量。為明確公雞月齡對受精率的影響，本研究以1∶30的公母配比進行人工授精，結果顯示，不同月齡廣西富鳳麻公雞的受精率無顯著差異，可能是人工授精時本研究使用的公母雞比例較小，輸入的精子量超過受精所需的精子量，或在孵出小雞后的存活率才出現差異。

睪丸的體積和重量及其曲細精管直徑是反映雄性動物生精能力的重要指標（孔令振等，2009）。本研究結果顯示，8月齡廣西富鳳麻公雞睪丸發育狀況最佳，18月齡公雞的睪丸出現退化，但有研究發現精液的精子密度隨年齡增加而升高可能是由于睪丸對內分泌影響的反應受損，導致精子的形成異常加速（Singer et al.，1990）。睪丸內曲細精管的發育狀況決定了精子的活性，隨著公雞年齡的增長，曲細精管管腔會變窄且硬化，精子活力下降，生殖細胞變性，間質細胞數量和功能下降，導致精子密度降低（卿素珠等，1998）。睪丸組織石蠟切片經HE染色后觀察曲細精管形態并計算曲細精管直徑，結果顯示，廣西富鳳麻公雞在5月齡時其睪丸內平均曲細精管直徑為133.01 μm，至8月齡時為145.94 μm，但18月齡時縮小至92.67 μm。5和8月齡廣西富鳳麻公雞睪丸內曲細精管直徑較大，各級生殖細胞發育良好，管中央可見大量精子;18月齡公雞睪丸內曲細精管直徑縮小，管腔中精子數量明顯減少。這與18月齡公雞精液體積和有效精子數下降的結果相吻合。

在雄性動物中，血清睪酮含量峰值與其年齡和身體狀況有關。本研究結果顯示，8月齡廣西富鳳麻公雞的血清睪酮含量最高，與18月齡公雞血清睪酮含量差異極顯著。血清睪酮含量隨年齡變化的原因可能是：首先隨著年齡的增長，垂體對促性激素釋放激素的反應能力下降，睪丸間質細胞對黃體生成素的反應能力也下降，進而導致下丘腦—垂體—性腺軸的功能下降（馬嶸和鄭寶鐘，2004）;其次，隨著年齡的增長，睪丸內間質細胞數目減少（應俊等，2000）。

4 結論

廣西富鳳麻公雞在5～8月齡期間其繁殖性能隨著月齡的增長而提高，但在8～18月齡期間整體上表現為繁殖性能隨月齡的增長而下降。即8月齡廣西富鳳麻公雞睪丸發育狀況最佳，生產上可適當提高8月齡公雞的利用率。

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（責任編輯 蘭宗寶）