Cobas4800高危型HPV分型在中山市宮頸癌篩查中的臨床價值

王山云 曾建峰 廣東省中山市中醫院 528400

子宮頸癌是婦女常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害婦女的生命健康。在世界范圍內，子宮頸癌已成為女性第四大惡性腫瘤，全球每年新發子宮頸癌病例約52.8萬，死亡26.6萬。2015年我國子宮頸癌新發病例數達到9.89萬，死亡例數達3.05萬。國際上已經明確高危型人乳頭瘤病毒持續感染(High-humanpapilloma virus，HR-HPV)是導致子宮頸癌及其癌前病變的主要病因。WHO/IARC已明確13種HP-HPV型別包括HPV16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68[1]。Cobas4800 HPV檢測技術于2014年獲得美國FDA委員會及亞太生殖感染和腫瘤研究組織(AOGIN)年會推薦用于宮頸癌的早期篩查，2015年獲批進入中國。目前相關報道仍不多，為探討Cobas4800高危型HPV檢測在宮頸癌篩查的臨床意義，了解中山市高危型HPV感染分布特點及其與宮頸病變的關系,現將結果分析如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選擇2018年1月1日—12月31日在中山市中醫院行宮頸篩查的女性5 650例，年齡17～65歲，平均年齡(38±12)歲；按年齡段分為21～30歲、31～40歲、41～50歲及>50歲4個組。所有病例均進行液基細胞學檢查和高危型HPV分型檢測，剔除二次復查數據，并對細胞學診斷為AS-CUS及以上病變的婦女進行陰道鏡下宮頸活檢。本研究獲得患者或家屬的知情同意。所有婦女均有性生活史，自愿接受檢查，無宮頸手術史及盆腔放射治療史，排除妊娠期及月經期婦女。

1.2 方法 (1)Cobas4800 HR-HPV檢測：采用羅氏Cobas4800 HPV檢測技術，本方法可同時檢測國際公認的14種高危型HPV，并區分出致癌風險最高的HPV16和HPV18型，其他12種高危型HPV包括26、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68。嚴格依照試劑盒說明書步驟操作。(2)液基細胞學檢查：標本采集婦科檢查時用窺陰器暴露宮頸，擦凈宮口分泌物，用LCT專用刷插入宮頸內口旋轉5～8周，收集宮頸口及頸管脫落上皮細胞，并將采集刷頭放入LCT 保存液小瓶內抖動數次，把脫落細胞完全洗入LCT保存液中。LCT檢查采用美國TriPath Imaging 公司生產的AutoCyte Prep型自動制片染色機系列制片。(3)診斷標準：細胞學診斷采用2001 年的子宮頸細胞學分類系統(The Bethesdasystem，TBS)標準[2]。對細胞學診斷陽性者遵循宮頸癌綜合防控指南(中華預防醫學會婦女保健分會)HPV聯合LCT篩查流程方案進行陰道鏡檢查及鏡下活檢。

2 結果

2.1 HR-HPV陽性標本型別分別及對應陽性率 在接受Cobas4800 HR-HPV分型檢測的5 650例標本中，共檢出732例HR-HPV陽性(包括單一分型及多重感染)，總陽性率12.96%(732/5 650)，其中以其他12種分型感染率最高，陽性率為9.15%。見表1。

2.2 宮頸病理結果與HR-HPV各型別感染對照 按照LCT聯合HPV篩查流程，其中102例患者需行陰道鏡下宮頸組織病理學檢查，病理診斷≤宮頸低級別上皮內瘤變的患者61例，以其他12型感染為主[感染率為54.10%(33/61)]；病理診斷≥宮頸高級別上皮內瘤變的患者41例，其中以HPV16型感染為主[感染率為58.54%(24/41)]。見表2。

表1 HR-HPV陽性標本型別分別及對應陽性率

注：兩型或兩型以上者為多重感染。

表2 宮頸病理結果與HR-HPV各型別感染對照

注：*多重感染為12和18型，#多重感染為12和16型；Δ多重感染為16和18型。

2.3 不同年齡宮頸癌篩查婦女高危型HPV感染率比較 在研究的5 650例女性中，按年齡段分為4個組，31～40歲組的高危型HPV感染陽性率最高，感染率為38.80%(284/732)。見表3。

表3 不同年齡宮頸癌篩查婦女高危型HPV感染率比較[n(%)]

2.4 HPV陽性對應LCT不同級別比率比較 在HPV陽性患者對應的TCT結果分析，共635例正常或炎癥， HPV16型感染導致的HSIL感染明顯高于其他分組。見表4。

表4 HPV陽性對應LCT不同級別比率比較[n(%)]

3 討論

HPV感染是女性宮頸癌以及癌前病變的主要病因，目前已發現100多種HPV基因型，其中至少有40多種基因型主要侵襲生殖道[3]。根據其導致的病變程度，可分為高危型、低危型以及其他型[4]，高危型HPV16、18型持續感染導致70%以上的宮頸癌[5]。宮頸癌的發生、發展是由量變到質變、漸變到突變的連續過程，宮頸癌前病變可存在多年，在此期間及時診斷、采取正確的處理措施可有效阻斷癌變的發生，因此積極有效的篩查及預防手段顯得尤為重要[6]。

本文采用Cobas4800 HPV檢測技術對5 650位女性標本分析顯示，高危型HPV感染者總人數732例，陽性率12.96%(732/5 650)，HPV分型中其他12種(26、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68其中一種)感染率9.15%(517/5 650)最高，其次是HPV16型感染率2.25%(127/5 650)，多重HPV(兩型或兩型以上者為多型感染)感染率為1.06%(60/5 650)，HPV18型感染率為0.50%(28/5 650)。按照LCT聯合HPV篩查流程，其中102例患者需陰道鏡下宮頸組織病理學檢查，病理診斷≤宮頸低級別上皮內瘤變的患者61例，以其他12型感染為主[感染率為54.10%(33/61)]；病理診斷≥宮頸高級別上皮內瘤變的患者41例，其中以HPV16型感染為主[感染率為58.54%(24/41)]?？梢姼呶Ｐ虷PV感染與宮頸病變的發生、發展密切相關，而中山地區高危型HPV感染的亞型主要為其他12種高危型，HPV16導致宮頸癌變率最高。與廣東省河源市、浙江省麗水市、香港地區亞型等有差異[7-9]。另有研究發現，HPV 52型和HPV 58型引起的宮頸癌在亞洲地區所占比例明顯高于非洲及西方國家[10]，從而進一步說明不同地域、不同民族間因為文化、生活習慣等差異導致了HPV感染譜的不同。

在各年齡組中，21～30歲、31～40歲、41～50歲和>50歲年齡組高危型HPV總感染率分別為11.91%、13.95%、12.71%、12.41%。以31～40歲組陽性率最高(38.80%)，這與劉國忠等報道天津地區HPV的年齡分布基本一致[11]。這可能與該年齡組處于性活躍期、多性伴侶、吸煙或長期使用口服避孕藥等因素有關。另也可能緣于在臨床上按照篩查指南對30歲以上進行檢測者更多。此外本次研究在聯合LCT檢測對照中細胞學陽性(≥ASC-US)HR-HPV陽性率分別為16型25.20%(32/127)、多重感染組15%(9/60)、18型3.57%(1/28)、其他12型10.64%(55/517)。而且在患者宮頸病變CIN分級的增加HR-HPV檢測陽性率顯著升高，各分型陽性率分別為16型16.54%(21/127)、多重感染組13.33%(8/60)、18型3.57%(1/28)、其他12型5.22%(27/517)，提示HR-HPV對篩查CIN及早期宮頸癌具有很高的敏感度。

由于不同亞型HPV其編碼外殼的基因變異很大，不同亞型HPV之間基本沒有交叉保護性抗體，容易造成不同高危型HPV多重感染[12]。對宮頸病變與高危型HPV單型感染或多重感染間關系目前沒有統一意見。本研究發現，單一感染率(16、18，或其他12型其中一型)為91.80%，多重感染率(同時存在兩種或以上高危型感染)8.20%。在宮頸病變中，以單一感染中的16型感染為主，多重感染導致宮頸病變的陽性率高于單一感染中的18型感染，其原因可能是多重感染中以含16型感染比例更多或需增大樣本量進一步論證。

目前關于HPV的檢測方法有組織學檢查、免疫組化、原位雜交、PCR及Cobas4800 HPV檢測，其中Cobas4800 HPV檢測是一種新型的方式，能夠同時檢測HPV16型、18型等多種高危型HPV病毒。Cobas4800 HPV是美國FDA至目前推薦的唯一一種用于宮頸癌初篩的檢測方法，具有較高的靈敏度和陰性預測值，有助于宮頸癌早診斷、早治療。本研究為采用Cobas4800臨床檢測的準確性提供了依據。但目前在國內相關研究不多，有待于在國內外不同地區并同其他高危型HPV檢測方法進行比較，進一步證明其優勢或不足之處。