結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在疑似結(jié)核感染的應(yīng)用價(jià)值分析*

廣東省博羅縣人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 (廣東 惠州 516100)

胡春榮 黎小惠

結(jié)核感染是由結(jié)核分歧桿菌所致，會(huì)對(duì)肺以及淋巴細(xì)胞，以及中樞神經(jīng)、泌尿系統(tǒng)等造成影響。受到生態(tài)環(huán)境和社會(huì)環(huán)境逐漸惡化的影響，世界各國結(jié)核病的發(fā)病率有了明顯上升，并且呈現(xiàn)出一定的年輕化趨勢(shì)[1]。相關(guān)數(shù)據(jù)調(diào)查顯示，全球結(jié)核感染患者數(shù)量已經(jīng)超過了20億，并且每年新增結(jié)核感染人數(shù)多達(dá)800～1000萬，死亡數(shù)為200～300萬[2]。我國是結(jié)核感染疫情非常嚴(yán)重的國家，臨床防治形勢(shì)不容樂觀。針對(duì)結(jié)核病的防治，應(yīng)做到早診斷、早發(fā)現(xiàn)、早治療的“三早”原則。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的數(shù)據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病的早期平均診斷率在40%以下，而結(jié)核病防治水平較高的國家也僅為50%左右[3]。因此，尋找一種更為簡單、便捷、診斷準(zhǔn)確率高的早期診斷手段，對(duì)結(jié)核病的防治有著十分重要的意義。近年來，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在早期結(jié)核感染的診斷檢查中逐漸被應(yīng)用，盡管受到了臨床的一致認(rèn)可，但是其診斷效果如何，仍舊值得探究[4]。為此，本研究將我院2018年1月～2019年7月收治的60例疑似結(jié)核感染患者納入樣本，對(duì)T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的診斷檢查效果進(jìn)行分析。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018年1月～2019年7月視為病例收集時(shí)間段，納入期間在我院接受診治的疑似結(jié)核感染患者60例進(jìn)行研究。全部患者中，男性34例(56.67%)，女性26例(43.33%)；年齡15～88歲，平均年齡(53.16±2.58)歲。病程最長2個(gè)月，最短4d，平均病程(25.36±5.48)d。根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果，證實(shí)為結(jié)核感染患者39例(65.00%)，非結(jié)核感染患者21例(35.00%)，結(jié)核感染患者和非結(jié)核感染患者在性別、年齡和病程等資料方面，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。結(jié)核感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：(1)若抗酸桿菌涂片培養(yǎng)結(jié)果顯示陽性，則為肯定結(jié)核性疾病；(2)若抗酸桿菌涂片培養(yǎng)為陰性，但經(jīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)觀察、影像學(xué)檢查以及病理學(xué)檢查等支持為結(jié)核桿菌感染，同時(shí)抗結(jié)核治療效果明顯，可判定為疑似結(jié)核性疾病。(3)若與肯定性結(jié)核疾病和疑似結(jié)核性疾病均不符，則Wie非結(jié)核感染。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑：二氧化碳培養(yǎng)箱(力康HealForce)、T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)試劑盒(默沙克生物有限公司)、酶聯(lián)免疫熒光斑點(diǎn)分析儀(博科BIOBASE)、淋巴細(xì)胞分離液(天津美德太平洋科技有限公司)、細(xì)胞培養(yǎng)液(北京譜析科技有限公司)。

1.2.2 T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)：于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取患者靜脈血5ml并行抗凝處理，而進(jìn)行3000r/min離心處理10min，分離出外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，將其分別加入不同的陰性對(duì)照物細(xì)胞培養(yǎng)液，陽性對(duì)照物(植物血凝素)。A抗原早期分泌性靶抗原6，而B抗原濾液培養(yǎng)蛋白10，在已包被抗血清γ-干擾素抗體微量板四個(gè)孔中，之后將2×105濃度的單個(gè)核細(xì)胞一次性加入每個(gè)孔中，使用二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，設(shè)置培養(yǎng)溫度為37℃。使用磷酸緩沖鹽溶液進(jìn)行洗脫處理，完成之后將堿性磷酸酶標(biāo)記的抗γ擾素抗體加入其中，再次培養(yǎng)2h(室溫下)，再次重復(fù)磷酸緩沖鹽溶液洗脫，發(fā)現(xiàn)顯色，而后最后用磷酸緩沖鹽溶液終止反應(yīng)，最后計(jì)算斑點(diǎn)的數(shù)量。陽性判定的標(biāo)準(zhǔn)[6]：孔點(diǎn)數(shù)測(cè)量2倍以上于陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)：于前臂掌側(cè)1/3皮位處，注射0.mlPPD，注射方法為孟都氏法注射，對(duì)平均浸潤硬結(jié)直徑進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)量，持續(xù)觀察72h，記錄期間患者的反應(yīng)。

1.3 觀察指標(biāo)：記錄T細(xì)胞斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)和結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)的診斷情況，同時(shí)比較T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中結(jié)核和非結(jié)核感染診斷情況，主要比較內(nèi)容包括診斷準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用n(%)表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用(±s)表示，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)和結(jié)核菌素試驗(yàn)診斷情況的比較 在診斷準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度方面，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)均高于結(jié)核菌素試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。如表1所示。

2.2 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中結(jié)核和非結(jié)核感染診斷的比較 在診斷準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度方面，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核和非結(jié)核診斷相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。如表2所示。

3 討 論

結(jié)核病是臨床作為常見的傳染性疾病之一，傳染率非常高，會(huì)嚴(yán)重影響患者的日常生活和工作，降低患者的生存質(zhì)量，甚至威脅患者的生命安全。早期及時(shí)的診治，是改善結(jié)核病患者疾病狀態(tài)的重要手段，也是結(jié)核病防治的必然要求。目前，臨床對(duì)于結(jié)核感染的診斷試驗(yàn)中，涂片鏡檢法、結(jié)核菌素試驗(yàn)、影像學(xué)診斷、分離培養(yǎng)方等較為常見，但均存在著各自的不足和局限。比如，涂片鏡檢法、影像學(xué)診斷等為例，檢測(cè)的準(zhǔn)確度并不是非常高，仍有較大的提升空間。又比如，分離培養(yǎng)雖然為結(jié)核感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，具有較高的診斷準(zhǔn)確率，但是該診斷法也存在一定的不足，如耗費(fèi)的時(shí)間比較長，一般為6～8周，在一定程度上與結(jié)核感染的早期防治相背離[7]。因此，如何提升結(jié)核感染的診斷質(zhì)量，應(yīng)當(dāng)從準(zhǔn)確、快速、便捷等方面著手。

表1 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)和結(jié)核菌素試驗(yàn)診斷情況的比較

表2 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中結(jié)核和非結(jié)核感染診斷的比較

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)是一種相較于影像學(xué)檢測(cè)、涂片鏡檢法、結(jié)核菌素試驗(yàn)等診斷手段更為新型的診斷檢查方，在歐美國家的結(jié)核感染早期診斷檢查中，已被廣泛應(yīng)用，已獲準(zhǔn)為早期篩查結(jié)核感染及結(jié)核潛伏感染的重要手段，但是在我國的開展還有進(jìn)一步的改進(jìn)和提升空間。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)期月酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，原理是以結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對(duì)單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行刺激IFN-γ分泌，檢測(cè)抗原特異性T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答，是以單細(xì)胞水平檢測(cè)進(jìn)行的細(xì)胞免疫學(xué)技 術(shù)[8]。實(shí)踐證明，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)操作起來，難度并不大，比較的簡單便捷，價(jià)格比較低廉，試驗(yàn)周期比較短，通常24h內(nèi)即可生成報(bào)告。本研究結(jié)果顯示，與結(jié)核菌素試驗(yàn)相比較，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度均更高(P＜0.05)，另外在結(jié)核感染和非結(jié)核感染患者的診斷檢查中，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的準(zhǔn)確性、靈敏度和特異度相比較，均保持在較高水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明了T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷的準(zhǔn)確性，在靈敏度和特異度方面有較高的保障。

綜上所述，疑似結(jié)核感染患者早期診斷時(shí)，采用T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷，準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度均比較高，值得臨床推廣和應(yīng)用。