熒光定量聚合酶鏈反應法監(jiān)測血漿EBV-DNA水平在鼻咽癌患者診療中價值

溫東輝

廣東省惠州市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東惠州 516003

鼻咽癌是鼻咽腔頂部、側壁發(fā)生的惡性腫瘤病變，目前關于鼻咽癌的病因機制尚處于研究階段[1]。研究指出早期對鼻咽癌的有效治療可延長患者生存時間，其中早期鼻咽癌5年生率可達到50%，因而臨床對鼻咽癌強調早發(fā)現、早治療[2]。盡管鼻咽癌的發(fā)病機制尚不清楚，但是較多研究指出EBV（皰疹）病毒感染是鼻咽癌的高危因素，通過對EBV病毒檢測可作為疾病診斷、疾病進展以及疾病評價的重要依據[3-4]。為證實熒光定量聚合酶鏈反應法監(jiān)測血漿EBV-DNA水平對鼻咽癌患者診療價值，進而為鼻咽癌患者診治奠定基礎，最大程度幫助患者改善預后。現就結合我院2017年9月～2019年8月收治的150例鼻咽癌患者，對其治療期間血漿EBV-DNA水平情況分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察組為2017年9月～2019年8月收治的150例鼻咽癌患者，對照組為同期體檢的150例健康人員。觀察組男84例、女66例，年齡35～77歲、平均（58.6±4.9）歲；臨床分期方面：Ⅰ期34例、Ⅱ93例、Ⅲ期23例。對照組男80例、女70例，年齡33～76歲、平均（58.6±4.9）歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

觀察組為鼻咽癌患者應用放化療，化療藥物為草酸鉑（成都世紀華洋制藥有限責任公司，H20020648），藥物劑 量為 70mg/m2，5- 氟尿嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，H31020593）用量為500mg/m2，加入50mL 0.9%的生理鹽水中，連續(xù)靜脈滴注，每周1次，連續(xù)治療6周，化療基礎上為患者實施放療。放化療期間對患者定期進行鼻咽檢查，每周2次。放化療完成后應用影像學方法對鼻咽癌患者進行全面檢查。對照組陽性患者進行對癥支持治療。

分別在治療后 1、2、3、4、5 周以及 6 周測定觀察組與對照組人員血漿EBV-DNA水平，熒光定量聚合酶鏈反應法使用儀器設備包括：德國QIAGEN公司Rotor-Gene Q5plex定量PCR擴增儀、離心機、紫外線投射分析儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、擴增試劑盒等。不同時間段分別采集觀察組、對照組人員3mL外周血，規(guī)范采集血樣，將血樣加入到EDTA抗凝劑試管中，常規(guī)離心5min，選擇200μL血漿，于-20℃條件下保存?zhèn)溆谩z驗前需要將血樣放置于室溫下復融，然后根據試劑盒操作說明完成核酸提取、反應體系處理、基因擴增等一系列操作，所有操作均由經驗豐富人員完成。

1.3 觀察指標

（1）治療前血漿EBV-DNA陽性檢出；（2）治療后1～6周血漿EBV-DNA水平；（3）不同預后患者EBV-DNA陽性檢出情況。

1.4 評價標準

血漿EBV-DNA陽性標準：＞5.0×102IU/mL。參照世界衛(wèi)生組織實體瘤療效評價標準[5]對鼻咽癌患者治療效果進行評價，包括：完全緩解（病灶完全消失且持續(xù)時間超過4周；部分緩解（病灶縮小超過50%，維持4周；穩(wěn)定（病情穩(wěn)定，病灶增加不＞25%）；進展（有新病灶產生，達不到穩(wěn)定標準）。

1.5 統計學方法

應用統計學軟件SPSS23.0對數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前兩組EBV-DNA陽性率比較

治療前觀察組血漿EBV-DNA陽性率較對照組明顯更高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 治療前兩組EBV-DNA陽性率比較[n（%）]

2.2 兩組患者治療后不同時間EBV-DNA水平比較

隨著治療時間的延長，觀察組患者治療后不同時間EBV-DNA水平呈現出總體下降趨勢，且治療6周后的血漿EBV-DNA平均水平達到陰性標準，見表2。對照組8例陽性患者其EBV-DNA水平也在下降，但不同時間對應EBV-DNA水平較觀察組更高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 不同預后患者EBV-DNA陽性結果

經過對患者的全面治療與護理，150例鼻咽癌患者中完全緩解10例（6.67%）、部分緩解74例（49.33%）、疾病穩(wěn)定52例（34.67%）、疾病進展14例（9.33%），總緩解率為56.00%、未緩解率為44.00%。緩解患者中EBV-DNA陽性率為16.67%（14/84）；未緩解患者中EBV-DNA陽性率為43.93%（29/66），差異有統計學意義（χ2=10.625，P=0.001）。

表2 兩組患者治療后不同時間EBV-DNA水平（x ± s，IU/mL）

3 討論

鼻咽癌屬于一種發(fā)病率較高的惡性腫瘤，典型癥狀包括耳悶堵感、鼻塞、涕中帶血、聽力下降、頭痛等[6]。現代影像學檢查技術以及不同人群健康意識的提高使得早期鼻咽癌檢出率有所提高，一定程度上提高了鼻咽癌患者的生存時間[7]。盡管如此，但是鼻咽癌患者術后仍有較高的復發(fā)率，重視對患者診療以及預后研究分析，便于為患者的診治提供更多依據，幫助患者改善預后。

目前臨床對鼻咽癌患者術后復發(fā)以及預后預測方面有較多方法可供選擇，比如鼻咽纖維鏡檢查、臨床影像學檢查等，上述相關方法對鼻咽癌診治以及預后評價有參考價值，但總體特異性、靈敏度較低，而且操作較為麻煩，造成實際應用價值受到影響[8-9]。

隨著對鼻咽癌研究的不斷深入，EB病毒感染與鼻咽癌有著密切關系，臨床研究指出EB病毒是進行鼻咽癌診斷的一個重要指標[10]。王琳等[11]指出血漿EBV-DNA水平測定能夠提高鼻咽癌高危人群的早期篩查準確率，有助于延伸篩查范圍。劉春霞等[12]指出通過將咽拭子EBV-DNA與EB病毒抗體進行聯合檢測，有助于提高鼻咽癌篩查的靈敏度。劉艷石等[13]分析了EB病毒抗體及其DNA在鼻咽癌復發(fā)患者血清中的表達情況，研究認為EBV-DNA對復發(fā)性鼻咽癌的診斷以及確定分期具有重要參考價值，但EB病毒抗體無法用于未復發(fā)鼻咽癌患者復發(fā)的預測。上述研究從不同角度證實了EBV-DNA在鼻咽癌診治方面具有重要的臨床價值。

本研究重點分析熒光定量聚合酶鏈反應法監(jiān)測血漿EBV-DNA水平在鼻咽癌患者診療方面的應用價值，根據研究結果部分數據分析，鼻咽癌患者其血漿EBV-DNA陽性率達到89.33%，這一結果明顯高于健康對照組5.33%的血漿EBV-DNA陽性率，提示鼻咽癌患者其血漿EBV-DNA陽性表達率較高，這與國內文獻[14-15]中指出的鼻咽癌與EB病毒感染存在密切關系具有高度一致性。鼻咽癌患者經過采取放化療治療措施，其血漿EBV-DNA水平呈現出下降趨勢，證實鼻咽癌患者體內的EB病毒量不斷減少，再次證實了EB病毒感染同鼻咽癌疾病發(fā)生以及進展存在密切關系；對照組健康人員中EBV-DNA陽性人員在不同時間段血漿EBVDNA水平方面較觀察組更高，分析可能是患者EB病毒感染嚴重，同時也體現出觀察組鼻咽癌患者具有較好的放化療效果。鼻咽癌患者預后方面，患者總緩解率達到56.00%、未緩解率（穩(wěn)定與進展）達到44.00%，且緩解患者EBV-DNA陽性率（16.67%）小于未緩解患者的EBV-DNA陽性率（43.93%），提示鼻咽癌患者預后同EB病毒陽性結果也存在一定的關系。總體研究結果同國內相關文獻[16-17]報道存在高度一致性。

同常規(guī)檢查方法比較，熒光定量聚合酶鏈反應法監(jiān)測血漿EBV-DNA水平具有較高的靈敏度，操作過程相對簡單，檢測結果受到外界環(huán)境因素影響較少[18]。

綜上所述，熒光定量聚合酶鏈反應法監(jiān)測血漿EBV-DNA水平能夠為鼻咽癌患者的診斷與預后評價提供依據，有利于根據不同患者實際監(jiān)測結果調整治療方案，改善患者預后。