呼吸道合胞病毒核酸分型檢測性能驗證

俞敏

摘 要：呼吸道合胞病毒核酸分型檢測已經成為患兒診斷、治療及預后情況的重要檢測手段。在文章中，將采用實驗分析的方法，對呼吸道合胞病毒核酸分型檢測性能進行評估，希望能為指導臨床工作提供一定的支持。

關鍵詞：呼吸道合胞病毒;核酸分型檢測;性能驗證

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus Pneumonia，RSV）是兒童呼吸道感染的主要病原體，可引起間質性肺炎及毛細支氣管炎。患兒發病后臨床常表現為輕度的中耳炎或者上呼吸道感染，隨著病情的發展，可演變為下呼吸道感染等，嚴重的會危及患兒生命，因此需要尋找一種能夠有效診斷呼吸道合胞病毒的方法，保證患兒能夠得到及時的診斷和治療。

1 ? ?性能驗證實驗

1.1 ?實驗材料選擇

以某醫院于2018年4月份提供的咽拭子樣本為研究對象，樣本在經過免疫熒光法抗原分型檢測后，發現抗原檢測為陽性的樣本數為20份，抗原檢測為陰性的樣本數為20份，其中呼吸道合胞病毒感染患者在經過抗病毒治療有效后，檢測結果為陰性的患者無病毒感染癥狀。

1.2 ?實驗方法

1.2.1 ?符合率驗證

向咽拭子標本中添加500 μL生理鹽水進行渦旋洗脫，相關試劑為上海之江生物科技有限公司生產的全自動核酸提取儀及其配套試劑盒，按照操作說明書進行操作。使用RSV分型核酸檢測試劑盒以及熒光定量聚合酶鏈反應儀測量核酸，其中的基本操作程序均按照說明書進行。

從患者的咽拭子中提取核酸，檢測核酸AB分型以及陰陽分型的情況，記錄檢測結果;擴增產物送至生物醫藥科技有關公司做高通量測量。測量結果與美國國立生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）標準序列進行對比，根據對比結果判斷是否滿足呼吸道合胞病毒分型標準。在得到測量試劑盒的測試結果與測序結果后，判斷精準度，記錄測量結果的符合率。在本次研究中，以測序結果為正確結果，當結果顯示分型以及測試結果分型符合率大于等于90%時就可以認為合格[1]。

1.2.2 ?驗證精密度

選擇一份呼吸道合胞病毒A型與B型的陽性標準進行混合，在稀釋到CT值呈弱陽性之后，配置一份呼吸道合胞病毒A型與B型核酸檢測結果為陰性的樣本，每次測量4次，連續測量5天后共獲得20次結果，若結果為陽性則記錄CT值，檢測結果陰性與陽性的符合率超過90%，且陽性標本中批內與批間CT值的CV值≤5%的情況下判定為合格。

2 ? ?實驗結果研究

2.1 ?符合率檢驗

在本次研究中，發現20份陽性樣本的標本分型結果與測序結果的分型是相同的，其中包括A型分型結果13例，B型分型結果7例，與測試結果相比，符合率達到100%，明顯超過了90%的準確度標準，證明本次驗證結果順利通過。

2.2 ?精密度驗證結果

在本次實驗中，精密度的實驗結果如表1所示。

從表1的相關數據可以發現，從第1天到第5天的驗證結果均小于5%，因此認為驗證結果是通過的。

3 ? ?研究結果分析

呼吸道合胞病毒是引起兒童急性呼吸系統疾病的主要病原體，每年有超過3 000萬5歲以下的兒童感染呼吸道合胞病毒，近幾年該病癥的發病率呈逐年升高的趨勢，已經嚴重影響了兒童的身體健康。又因為呼吸道合胞病毒感染的早期臨床癥狀不明顯，所以易出現漏診和誤診等情況，實驗室檢查是診斷呼吸道合胞病毒的主要方法。

病毒是兒童社區獲得性肺炎（Community Acquired Pneumonia，CAP）的主要病原體，也是兒童社區獲得性肺炎病原學區別于成人的主要特征，而呼吸道合胞病毒則是引起兒童CAP的首位病毒，發病率較高。在該病癥的早期診斷中，通過呼吸道標本病毒抗原快速檢測是臨床診斷呼吸道合胞病毒的常見方法，文章選擇醫療機構提供的呼吸道合胞病毒抗原測試咽拭子，并將其作為早期診斷的重要依據。呼吸道標本的病毒抗原快速檢測，已經成為醫療機構早期診斷病毒感染的主要方法，而病毒檢測作為臨床診斷的金標準，受資金、設備以及技術等因素影響而無法大面積推廣，從現有技術發展來看，成熟的呼吸道合胞病毒檢查方法包括免疫熒光法、酶免疫法等，能夠有效檢測患兒呼吸道分泌物中的病毒特異性抗原，具有設備要求低、簡單快速的優點[2]。但是實際上標本的來源、質量以及采集等都是影響檢測結果的重要因素，在檢驗過程中就可能出現結果不準確的情況。而分子生物學方法已經成為檢測呼吸道分泌物病毒特異性基因片段的有效方法。文章利用上海之江生物科技有限公司生產的全自動核酸提取儀及其配套試劑盒，詳細研究了呼吸道合胞病毒核酸分型檢測方法的應用效果，結果發現，該核酸檢測方法具有準確率高（準確率達到100%）等優點，并且精密度驗證結果顯示，不同分型結果5天內CV均小于5%，說明精密度高，滿足呼吸道合胞病毒臨床診斷需求。結合文章的研究結果可以發現，該方法具有特異度高、靈敏度高的優點，在臨床上具有滿意的應用效果，是一種科學有效的診斷方法。

4 ? ?結語

在呼吸道合胞病毒核酸分型檢測性能中，利用上海之江生物科技有限公司生產的全自動核酸提取儀及其配套試劑盒，通過檢測某醫院提供的研究樣本，研究了呼吸道合胞病毒核酸分型檢測方法的準確度和精密度，證明該方法滿足臨床分子生物學的檢驗要求，可以為臨床診斷、治療及預后判斷提供必要的依據，提高了疾病的檢出率，為保證患兒的預后奠定了基礎，因此值得進一步推廣。

[參考文獻]

[1]姜梨梨，王瑞芳，周海群，等.亳州地區2846例兒童急性呼吸道感染病原IgM抗體檢測結果分析[J].重慶醫學，2017（25）：3569-3570.

[2]于娟，李紅，饒華祥，等.流感高發季節150例流感病毒核酸陰性的流感樣病例鼻咽分泌物呼吸道病毒檢測分析[J].山東醫藥，2018（31）：40-43.