小兒傷科泡騰顆粒對閉合性骨折模型大鼠治療效果研究

溫慧敏，尹小娟，楊 沙，馮光富，陳詩韻

0 引言

小兒骨傷發病率遠高于成人，是造成兒童殘疾和死亡的重要原因之一[1]。小兒傷科方是四川省骨科醫院臨床專家、全國重點專科專病(兒童骨科)學術帶頭人王英主任醫師基于中醫活血化瘀代表方劑-桃紅四物湯加減擬定的小兒骨折協定處方。臨床證實其在治療兒童閉合性骨折方面具有顯著的效果。但通過臨床觀察，閉合性骨折患兒在服用小兒傷科方時依從性較差，其主要原因為湯劑劑型口感差，攜帶不便，且每日服用劑量也較大。為了滿足臨床兒科的特殊需求，本團隊在前期研究中將小兒傷科湯劑開發為泡騰顆粒，現通過對比觀察小兒傷科湯劑與小兒傷科泡騰顆粒對閉合性骨折模型大鼠的治療效果，擬為小兒傷科泡騰顆粒臨床應用和開發提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康SPF級6～8周齡SD大鼠45只，體重(260±20) g，雄性，購于成都達碩實驗動物有限公司，動物許可證號：SCXK(川)2015-030。試驗前在照明12 h、通風良好的條件下適應性飼養觀察7 d。

1.2 實驗材料 小兒傷科湯劑，四川省骨科醫院藥劑科自制；小兒傷科方泡騰顆粒(實驗室自制)；生理鹽水購于成都市科隆化學品有限公司，批號：100503。大鼠血清鈣試劑盒(批號：20190423)、血清磷試劑盒(批號：20190423)、血清堿性磷酸酶(ALP)試劑盒(批號：20190423)均購于中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 實驗儀器 重力造模骨折器(實驗室自制)；BT1250型十萬分之一電子天平購于北京賽多利斯儀器系統有限公司；PL-203型電子天平購于上海梅特勒-托利多儀器有限公司；Neofuge 15R型臺式高速冷凍離心機(Heal Force)；X線攝片機(四川省骨科醫院放射科提供)。

1.4 造模方法 參考文獻[2]，采用重力造模法進行造模。造模前選取右側脛骨進行備皮，以3%戊巴比妥鈉溶液按0.2 ml/100 g體重腹腔注射進行麻醉，仰臥位固定大鼠于帶有1.5 cm縫隙的模板上，脛骨橫跨縫隙，皮膚表面覆蓋紗布，用重力500 g砝碼于30 cm處自由下落，沖擊脛骨造成脛骨中下段骨折。

1.5 分組方法 根據隨機數字表原則，將模型大鼠隨機分為對照組、湯劑組和顆粒組，每組各15只。

1.6 干預方法 所有大鼠在造模完成后均行外夾板固定。湯劑組大鼠采用小兒傷科湯劑進行灌胃，顆粒組采用小兒傷科方泡騰顆粒進行灌胃，依照臨床用藥劑量進行折算給藥(8 g/kg，按生藥量計)，對照組大鼠給予同體積溫開水灌胃進行對照。試驗期間，每天定時按劑量灌胃給藥1次，記錄其飲水量和采食量及行為表現。

1.7 觀察指標

1.7.1 血清生化指標 分別在治療14 d、28 d、35 d時，每組隨機選取5只大鼠，以3%戊巴比妥鈉溶液按0.2 ml/100 g體重腹腔注射進行麻醉，采集腹主動脈血10 ml，在3 000 r/min下離心10 min，利用試劑盒檢測血清鈣、血清磷、血清ALP指標，并記錄。

1.7.2 X片檢查 采集腹主動脈血后，放血處死大鼠，送至四川省骨科醫院放射科進行X攝片檢查，觀察骨折愈合情況，以Lane-Sandhu X射線評分標準[3]評價骨缺損修復情況。

2 結果

2.1 三組大鼠血清生化指標比較 治療14 d時，三組大鼠血清鈣、血清磷、血清ALP指標分別比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。治療35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠血清鈣指標低于對照組(P<0.05)。但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療28 d、35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠血清ALP高于對照組(P<0.05)。見表1～表3。

表1 三組大鼠血清鈣指標比較(mmol/L)

表2 三組大鼠血清磷指標比較(mmol/L)

表3 三組大鼠血清ALP指標比較(U/L)

2.2 三組大鼠Lane-Sandhu評分比較 治療14 d時，三組大鼠Lane-Sandhu評分比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療28 d、35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評分均高于對照組(P<0.05)，但湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評分比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 三組大鼠Lane-Sandhu評分比較(分)

3 討論

小兒傷科方由桃仁、紅花、當歸、生地黃、川芎、赤芍、牡丹皮、川木通、酒大黃、延胡索、川楝子、茯苓、三七等中藥組成。方中桃仁、紅花、川芎活血化瘀，生地、當歸、赤芍可加強活血化瘀作用，并且當歸具有補血養肝之功，赤芍有涼血消腫之效[4-6]。延胡索活血，行氣，止痛，川楝子可增強行氣止痛之功[7]。諸藥共奏活血化瘀，行氣止痛之功。臨床實踐證明，小兒傷科方對兒童骨折的愈合、骨性關節炎的防治具有良好的效果。相比于傳統湯劑，顆粒劑可滿足兒童服藥特殊要求，并且具有生產方便、服用量小、不易霉變、易攜帶等優勢[8]。但這兩種制劑是否具有同等的治療效果，尚未見報道。為了解決這一問題，本研究選取幼年大鼠作為研究對象，通過制作閉合性骨折模型，對比分析了小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對模型大鼠的治療效果。

本研究結果顯示，治療35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠血清鈣指標低于對照組，但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統計學意義。治療28 d、35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠血清ALP明顯高于對照組，但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統計學意義。結果表明，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對加速鈣沉積具有積極的作用。骨折發生后，在破骨細胞活動下，鈣離子釋放入血，使血中鈣離子升高，隨著骨折的愈合，血中鈣離子逐漸降低，鈣鹽沉積[9-10]。相比于僅做內固定干預的對照組大鼠，無論是使用湯劑還是顆粒進行干預，其均具有降低鈣離子、加速鈣鹽沉積的作用，并且二者效果等同。既往研究認為，骨折愈合過程中，磷離子呈現逐漸升高的趨勢，在4～5周達到高峰[11]。本研究尚未發現小兒傷科湯劑或小兒傷科泡騰顆粒對磷離子存在顯著影響，這可能是觀察時間較短所致。但也應看到，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對磷離子的影響效果是等同的。目前認為，ALP是反映成骨細胞功能和分化程度的指標之一，ALP表達的升高可作為成骨細胞成熟的標志之一[12]。本研究結果提示，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒可在骨折愈合過程中促進成骨細胞成熟，且二者具有等同的效果。

X片結果顯示，治療28 d、35 d時，湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評分均明顯高于對照組，但湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評分比較差異無統計學意義。Lane-Sandhu X射線評分標準從骨形成、骨連接、骨塑形3個方面對骨折愈合情況進行形態學上的評價，是目前動物實驗和臨床研究中用于反映骨折愈合的常用指標之一[13]。

綜上所述，小兒傷科湯劑與小兒傷科泡騰顆粒治療閉合性骨折模型大鼠效果無顯著差異，為小兒傷科泡騰顆粒的臨床應用和開發提供了數據支持。