胃痛消痞方對(duì)肝郁脾虛型功能性消化不良大鼠胃腸動(dòng)力及5-HT3aR表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

范夢(mèng)男，張 博，陳蘇寧*

0 引言

功能性消化不良(Functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種或一組起源于胃及十二指腸區(qū)域，臨床無其他器質(zhì)性、系統(tǒng)性或代謝性疾病的原因能解釋的病癥總稱[1]。FD病理機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為與胃腸動(dòng)力障礙、遺傳易感性、幽門螺桿菌感染、內(nèi)臟高敏感性、社會(huì)心理等因素相關(guān)[2-3]。近年來，腦腸軸(Brain-gut axis,BGA)異常成為FD的關(guān)注熱點(diǎn)[4]。腦腸肽(Brain-gut peptide,BGP)是BGA的主要作用物質(zhì)，腦腸肽水平的變化是引起FD胃腸動(dòng)力的因素之一。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)是重要的腦腸肽之一，主要分布在胃腸道黏膜。5-羥色胺受體(5-HT receptor，5-HT3aR)是5-HT高親和性的結(jié)合抗體，二者結(jié)合以發(fā)揮5-HT調(diào)節(jié)胃腸道的動(dòng)力功能。

針對(duì)FD的發(fā)病原因，現(xiàn)代西醫(yī)學(xué)主要采用綜合對(duì)癥治療，包括促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)、抑酸、保護(hù)胃黏膜、抗Hp、抗抑郁焦慮等，但多不能根本解決問題。本研究以胃痛消痞方干預(yù)實(shí)驗(yàn)性FD大鼠，觀察FD大鼠胃腸動(dòng)力及胃竇組織5-HT3aR蛋白的變化，探討胃痛消痞方治療FD的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性、健康SPF級(jí)SD大鼠48只(250～280 g/只)，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京)，2014-0004。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 枸櫞酸莫沙必利片，購于亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：H20090158。胃痛消痞方(中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院中藥房)，免煎中藥顆粒劑(北京康仁堂藥物有限公司)組成：黨參10 g、白芍20 g、白術(shù)20 g、延胡索20 g、柴胡12 g、砂仁15 g、枳實(shí)12 g、炒麥芽20 g、雞內(nèi)金10 g，焦山楂10 g、炙甘草6 g。實(shí)驗(yàn)時(shí)均以蒸餾水配制成所需濃度。各治療組大鼠每日給藥量均按人體等效劑量(g/kg)的6.3倍計(jì)算：莫沙必利組大鼠的等效劑量為1.575 g/(kg·d)，胃痛消痞方組大鼠的等效劑量為16.275 g/(kg·d)。實(shí)驗(yàn)時(shí)均以蒸餾水配制成所需濃度。

1.3 主要試劑和儀器 GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，BL-420S生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：取羥甲基纖維素5 g，蔗糖4 g，奶粉8 g，碳素墨水2 ml，淀粉4 g，分別溶于125 ml蒸餾水中，均勻攪拌，調(diào)配成約150 ml(150 g)的半固體糊，并儲(chǔ)存于4 ℃冰箱中。

1.4 方法

1.4.1 FD模型的制備 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，將48只大鼠隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組(空白組)、模型對(duì)照組(模型組)、胃痛消痞方組(中藥組)、莫沙必利組(西藥組)，每組12只。采用改良郭氏夾尾刺激法聯(lián)合張氏不規(guī)則喂養(yǎng)法[5-6]復(fù)制FD大鼠模型。首先，將卵圓鉗頭部用紗布包裹，并連續(xù)不斷地夾持大鼠尾巴末端1/3處，以此來激怒大鼠并使其相互廝打，如有夾持部位或廝打部位受傷，用沾取0.5%碘伏的無菌棉簽涂擦以防感染。每次刺激持續(xù)30 min，每12小時(shí)重復(fù)進(jìn)行1次；同時(shí)，配合單、雙日不規(guī)則喂食，連續(xù)刺激21 d。造模結(jié)束后剔除死亡大鼠(死亡原因未知)，每組剩余9只，給予光影處置。

1.4.2 藥物干預(yù) 各組藥物以蒸餾水溶解，空白組和模型組以生理鹽水2 ml灌胃，中藥組予顆粒劑溶液16.275 g/(kg·d)，西藥組予莫沙必利片溶液1.575 g/(kg·d)，每天2次，持續(xù)給藥21 d。

1.4.3 標(biāo)本采集 末次給藥后，觀察各組大鼠的一般狀態(tài)。禁食不禁水24 h，將混有墨水的營養(yǎng)性半固體糊灌胃各組大鼠，灌胃容積為2 ml/只。灌胃后1 h，以10%水合氯醛腹腔麻醉，打開腹腔，以羊腸線結(jié)扎大鼠賁門及幽門處，剪取全胃，電子天平稱重后記錄。沿著胃大彎將胃體剪開，以0.9%生理鹽水沖洗，濾紙拭干后，再次稱重記錄。部分胃竇組織剪取后，分別放入凍存管及多聚甲醛內(nèi)備用。幽門至回盲部小腸部分剪取后展開，用軟尺測(cè)量幽門至小腸內(nèi)容物長度及小腸總長度。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 除正常組外，各組大鼠均出現(xiàn)毛色光澤度變差、飲食質(zhì)量減少以及活動(dòng)度降低等現(xiàn)象。治療結(jié)束后，模型組大鼠一般情況最差，各治療組大鼠一般情況均有好轉(zhuǎn)，但較空白組差。

2.2 各組大鼠胃腸動(dòng)力比較 模型組大鼠胃內(nèi)殘留率高于空白組(P<0.05)；中藥組和西藥組大鼠胃內(nèi)殘留率低于模型組(P<0.05)，且中藥組更低(P<0.05)。模型組大鼠小腸推進(jìn)率低于空白組(P<0.05)；中藥組和西藥組大鼠小腸推進(jìn)率高于模型組(P<0.05)，且中藥組更高(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠胃腸動(dòng)力比較(%)

2.3 各組大鼠下丘腦及胃竇組織中5-HT3aR 蛋白表達(dá)(WB法)比較 模型組大鼠下丘腦及胃竇組織5-HT3aR 蛋白相對(duì)表達(dá)量低于空白組(P<0.05)；用藥組大鼠下丘腦及胃竇組織5-HT3aR 蛋白相對(duì)表達(dá)量高于模型組(P<0.05)；中藥組大鼠下丘腦及胃竇組織5-HT3aR 蛋白相對(duì)表達(dá)量較西藥組明顯增加(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠下丘腦及胃竇組織中5-HT3aR蛋白表達(dá)比較

3 討論

FD是消化科常見的功能性胃腸病，在我國占消化科門診數(shù)量的40%左右[6]。FD以慢性、反復(fù)發(fā)作為特點(diǎn)，臨床以持續(xù)或反復(fù)發(fā)作上腹痛、上腹脹、早飽、噯氣、惡心等癥狀為主要表現(xiàn)[7-8]。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，BGP是目前較為公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制。BGP是由腸神經(jīng)系統(tǒng)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)構(gòu)成的一個(gè)嚴(yán)密的神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)，其并非解剖學(xué)上的實(shí)際通路，而是功能性的通道。BGP異?？蓪?dǎo)致胃腸動(dòng)力及感覺異常，而胃腸動(dòng)力障礙及敏感性增高是FD的病理生理基礎(chǔ)[1]。機(jī)體通過BGP的雙向環(huán)路進(jìn)行胃腸功能的調(diào)節(jié)稱為腦-腸互動(dòng)，腦-腸互動(dòng)是通過BGA來實(shí)現(xiàn)的。

目前發(fā)現(xiàn)與FD相關(guān)的BGA有10余種，其中最主要的是5-HT。5-HT的各種生理作用與其受體關(guān)系密切。其在中樞內(nèi)主要分布于下丘腦，其生理功能是參與睡眠覺醒、精神心理情緒方面的調(diào)控；在外周主要分布于胃腸道，其生理功能是參與胃腸道的感覺、運(yùn)動(dòng)和分泌[9-10]。5-HTR受體有7種，5-HT3R與胃腸道的傳導(dǎo)及高敏感關(guān)系密切[11]。5-HT3R被激活后能促使胃動(dòng)素的釋放，經(jīng)過神經(jīng)元活化，增加乙酰膽堿的釋放，從而增加腸道的運(yùn)動(dòng)功能。在此過程中，5-HT與5-HT3R結(jié)合后，引起感覺神經(jīng)末梢去極化，這個(gè)過程又使得5-HT與內(nèi)臟感覺具有了相關(guān)性。

根據(jù)FD的發(fā)病及臨床表現(xiàn)，中醫(yī)將其歸屬于“痞滿”、“胃脘痛”的范疇，古今醫(yī)家多認(rèn)為FD的病位在胃，涉及肝、脾兩臟，肝郁和脾虛是兩個(gè)關(guān)鍵的病機(jī)：脾虛是基礎(chǔ)，肝郁是條件[12]。《素問·寶命全形論》記載：“土得木而達(dá)”，強(qiáng)調(diào)了疏肝解郁、調(diào)暢氣機(jī)的治法對(duì)脾虛的治療作用。胃痛消痞方中，黨參、茯苓、白術(shù)健脾燥濕，砂仁、延胡索芳香行散，薏苡仁利水滲濕，內(nèi)金、焦山楂消積化食，肉桂、干姜溫陽止痛，甘草以調(diào)和諸藥?？v觀全方共達(dá)疏肝理氣、健脾和胃之功效。

本研究基于胃痛消痞方對(duì)FD患者的臨床療效，從胃腸動(dòng)力和BGA水平探討胃痛消痞方的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，造模組大鼠一般狀態(tài)差，胃內(nèi)殘留率升高，小腸推進(jìn)率明顯減低，提示造模成功。經(jīng)胃痛消痞方及莫沙必利治療后，大鼠一般狀態(tài)有所改變，胃內(nèi)殘留率下降，小腸推進(jìn)率增加，胃竇及下丘腦組織中5-HT3aR蛋白表達(dá)增加。本研究結(jié)果進(jìn)一步證明，胃痛消痞方可能通過調(diào)節(jié)5-HT3aR的表達(dá)而達(dá)到治療FD的作用。