結核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗在活動性肺結核中的診斷價值

李 卓

（錦州市傳染病醫院結核內二科，遼寧 錦州 121000）

肺結核為全球面臨的主要公共衛生、社會問題之一，WHO統計數據顯示，全球1/3左右人口受到結核分枝桿菌的感染，而每年新發結核病例、死亡病例高達830萬、180萬[1]。我國為肺結核高發國家，尤其是農村地區、中西部地區肺結核防治工作仍然面臨較大的困難，因此盡早鑒別、篩查肺結核病并給予相應的治療尤為重要[2-3]。臨床主要采用影像學、細菌學診斷肺結核，然而上述診斷方法敏感度、特異度均比較低，極易引起誤診、漏診的發生。隨著免疫技術、生物技術的不斷發展，結核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）逐漸用于肺結核診斷，為進一步明確其在活動性肺結核中的應用價值，筆者選取我院近兩年收治的100例疑似肺結核患者作為研究對象，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院自2016年10月至2018年10月在我院就診并接受治療的100例疑似肺結核患者，均符合以下標準：①臨床伴有咳嗽、胸痛和（或）發熱至少2周；②結核中毒表現；③胸部CT檢查、痰液或支氣管鏡刷檢涂片抗酸染色、細菌培養等資料完善；④知曉本次研究且自愿參與。排除近期抗結核治療4周以上、臨床資料不完善患者。其中男60例，女40例，年齡25～70歲，平均（46.69±3.33）歲。

1.2 方法：完善患者既往病史、結核病接觸史等臨床資料，完善胸部CT檢查、痰涂片檢查及PPD實驗等，必要時可進行病理組織活檢?；颊呔邮躎-SPOT.TB實驗，試劑盒由法國維達萊勃公司生產，嚴格按照規范操作。肝素鈉真空抗凝管采血5 mL，采血完成后輕輕顛倒5～8次，充分混勻，并放置于18～25 ℃環境下；4 h內將外周血單個核細胞分離，并在每個預包被抗人γ-干擾素抗體的孔中加入2.5×105個PBMCs，分別與早期分泌靶抗6（ESAT-6）和培養過濾蛋白10（CFP-10）兩種抗原共同孵育16～20 h，并利用堿性磷酸酶耦聯的二抗和底物顯色，采用ELISPOT讀板儀記錄斑點形成細胞（SFCs）。陰性對照孔內的內斑點數在0～5個時，則用A、B孔內任意一個孔的斑點數減陰性對照孔斑點數，≥6個即為陽性；若陰性對照孔內斑點數在6～10個，則A、B孔任意一孔斑點數大于陰性對照的2倍時即為陽性。若不符合上述標準且陽性對照孔為正常，則為陰性。

1.3 肺結核診斷標準：臨床診斷參考2005年臨床診療指南結核病分冊[4]將肺結核分為活動性肺結核及潛伏性肺結核。活動性肺結核診斷標準如下。①細菌學陽性證據；②臨床診斷為陽性：臨床排除其他非結合型肺疾病、典型的肺結核臨床癥狀以及肺部CT表現、診斷性抗結核治療≥2周且有效者。T-SPOT.TB肺結核診斷臨界值的確定參考石學萍[5]在研究中提出的標準，即A抗原取值16.0 SFCs/2.5×105PBMC、B抗原取值7.0 SFCs/2.5×105PBMC時為活動性肺結核。

1.4 統計學分析：用SPSS20.0軟件分析數據，計量資料使用（±s）表示，符合正態分布，以t檢驗分析對比；計數資料以χ2檢驗分析對比。P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 臨床診斷結果：依據臨床最終診斷（包含胸部CT、痰涂片檢查及PPD實驗等結果） 100例患者中確診68例[68.00%，其中活動性結核40例（40.00%），潛伏性結核28例（28.00%）]納入肺結核組，其余32例[32.00%，其中細菌性肺炎17例（17.00%），肺部腫瘤15例（15.0%）]納入非肺結核組。

2.2 T-SPOT.TB的檢測結果：肺結核組患者T-SP OT.T B檢測的A、B抗原斑點數的中位數明顯高于非肺結核組（P＜0.05），肺結核組內活動性肺結核A、B抗原斑點數的中位數明顯高于潛伏性肺結核（P＜0.05）。見表1。

2.3 T-SPOT.TB試驗與最終診斷結果：以最終診斷結果為金標準，則T-SPOT.TB診斷敏感度、特異度及準確度分別為95.00%、90.00%、92.00%，見表2。

表1 各組患者T-SPOT.TB抗原斑點數中位數的檢測結果

表2 T-SPOT.TB試驗與最終診斷結果

3 討 論

結核病是由于結核桿菌侵入人體引起的一種慢性傳染性疾病，本病發病較慢，多數患者癥狀較輕，然而隨著病情加重，患者可出現咯血、發熱、盜汗、呼吸困難等表現，目前臨床尚無特效治療藥物[6]。流行病學統計數據顯示我國每年新發肺結核患者90萬例左右，已經成為全球第3名肺結核大國之一[7]。由于結核病原體可通過飛沫、空氣傳播，因此防控難度較大，近年來隨著國家加大了肺結核知識的宣教、疾病防控措施，然而肺結核防控效果并不理想，尤其是隨著人口大規模流動，結核耐藥菌株的出現，結核疫情的防控已經成為臨床面臨的重要問題。

細菌培養法為結核診斷的金標準，然而其時間周期較長且陽性率較低，在疾病的診斷中較為遲緩；分子生物學的快速發展，核酸擴增檢測等技術廣泛應用，然而上述實驗的特異度、敏感度均不理想，因此急需找尋一種快速、準確且可開的結核病診斷方法[8]。本次研究中采用以酶聯免疫斑點技術為檢測的T-SPOT.TB檢測方法，該方法于2010年由我國食品和藥品監督管理局批準上市，依據國外系統分析資料，T-SPOT.TB在結核病診斷中，敏感度、特異度分別為81%～91%，特異度為59%～93%，目前國內研究數據顯示其敏感度、特異度分別為78.4%～90.1%，特異度為78.4%～90.1%[9]，本次研究中T-SPOT.TB在活動性肺結核的診斷中敏感度、特異度分別為95.00%、90.00%，高出國內相關水平，分析認為除去研究人員、結核病流程程度差異外，患者免疫力、結核接觸史、潛伏感染率以及研究樣本大小等均可對結果產生一定的影響。

肺結核的快速診斷為結核病防控的關鍵因素，而T-SPOT.TB檢測作為T細胞免疫應答基礎上發展而來的γ干擾素釋放試驗，與傳統TST不同，其使用抗原為結合分枝桿菌RDI區內的特異抗原CFP-10和ESAT-6，能夠區別大部分環境分枝桿菌感染、卡介苗接種的回憶反應，此外其敏感性、特異性均比傳統的痰培養、痰涂片及結核菌素試驗等高[10-11]，本次研究中，活動性肺結核組患者A、B抗原斑點數的中位數明顯高于潛伏性肺結核、非肺結核組患者（P＜0.05），提示T-SPOT.TB檢測在活動性肺結核的診斷中能夠通過抗原斑點數高表達提示診斷。以往研究認為T-SPOT.TB的斑點數無法顯示結核活動程度[12-13]，然而筆者認為當發現T-SPOT.TB的斑點數在短期內急劇增加時，則強烈提示體內出現結核活動，此時需給予患者預防性的治療。

總之，T-SPOT.TB在肺結核診斷具有一定的診斷價值，通過斑點數的表達可提示活動性肺結核，具有較高的敏感度、特異度及準確度，然而其過程復雜，同時結果受到結核菌、患者自身免疫情況等影響，穩定性欠佳，因此為降低誤診漏診的發生，需充分結合患者影像學、基礎疾病、結核病接觸史等判斷。