菊明降壓丸的薄層色譜研究

葉紫金 廖樹(shù)清 楊澤旋 李焯星 姚楠泓 林耿豐

1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510000；2.廣東省揭陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所，廣東 揭陽(yáng) 522000； 3.廣東匯康元藥業(yè)有限公司，廣東 揭陽(yáng) 522000

菊明降壓丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十一冊(cè)，是由野菊花和決明子組成的中成藥，具有降低血壓的功效。用于高血壓及其引起的頭痛、目眩[1]。但因衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅有顯微鑒別項(xiàng)和檢查項(xiàng)，因此，為能更好的控制該藥的質(zhì)量，本研究對(duì)野菊花和決明子建立薄層色譜鑒別方法，提供了薄層鑒別指標(biāo)，為控制菊明降壓丸的內(nèi)在質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DCS-10薄層色譜自動(dòng)分析系統(tǒng)；TII-II型薄層加熱器；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，功率300 W，頻率300 W)；電子分析天平(梅特勒AL204)；硅膠G預(yù)制板(德國(guó)默克有限公司，批號(hào)：536092，規(guī)格：10×20 cm)；硅膠G預(yù)制板(煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所，批號(hào)：150325，規(guī)格：10×20 cm)，硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：20150108，規(guī)格：10×20 cm)。

1.2 試藥 野菊花對(duì)照藥材(批號(hào)120995-201506)；蒙花苷對(duì)照品(批號(hào)111578-201710)；決明子對(duì)照藥材(批號(hào)121011-200604)；橙黃決明素對(duì)照品(批號(hào)111900-201605)，均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、石油醚(60～90 ℃)、丙酮、丁酮、甲酸均為分析純；菊明降壓丸4批(批號(hào)：14071348、14072106、14072107、17072812，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠)，陰性樣品為自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 野菊花的薄層色譜鑒別 取本品10 g，粉碎，加無(wú)水乙醇30 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取野菊花對(duì)照藥材1 g，加無(wú)水乙醇20 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取蒙花苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液[2]。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁溶液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果表明，供試品中清晰，分離效果，陰性無(wú)明顯干擾，方法專屬性強(qiáng)。如圖1所示。

1.缺野菊花陰性供試品，2～5.供試品， 6.野菊花對(duì)照藥材，7.蒙花苷對(duì)照品圖1 野菊花的薄層色譜鑒別

2.2 決明子的薄層色譜鑒別 取本品10 g，粉碎，加乙酸乙酯30 mL、鹽酸1 mL，加熱回流30 min ，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取決明子對(duì)照藥材0.2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取橙黃決明素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)(10∶4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，在紫外光(365 nm)下檢視。置氨蒸氣中熏后，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點(diǎn)。結(jié)果表明，供試品中清晰，分離效果，陰性無(wú)明顯干擾，方法專屬性強(qiáng)。如圖2所示。

1.缺決明子陰性供試品，2～5.供試品， 6.決明子對(duì)照藥材，7.橙黃決明素對(duì)照品圖2 決明子的薄層色譜鑒別

3 方法學(xué)考察

3.1 不同薄層板的考察 選用硅膠G預(yù)制板(德國(guó)默克有限公司，批號(hào)：536092)；硅膠G預(yù)制板(煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所，批號(hào)：150325)，硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：20150108)3種薄層板，斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾，結(jié)果表明不同產(chǎn)家的薄層板對(duì)本實(shí)驗(yàn)所建立的方法無(wú)明顯影響。如圖3、圖4所示。

1.缺野菊花陰性供試品 2～5.供試品 6.野菊花對(duì)照藥材 7.蒙花苷對(duì)照品 A：默克；B：青島；C：煙臺(tái)圖3 不同薄層板的考察：野菊花

1.缺決明子陰性供試品 2～5.供試品 6.決明子對(duì)照藥材 7.橙黃決明素對(duì)照品 A：默克；B：青島；C：煙臺(tái)圖4 不同薄層板的考察：決明子

3.2 不同溫度的考察 對(duì)低溫(6 ℃)、室溫(26 ℃)進(jìn)行了考察，結(jié)果展開(kāi)溫度為低溫(6 ℃)、室溫(26 ℃)時(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，結(jié)果表明不同溫度展開(kāi)的條件對(duì)本實(shí)驗(yàn)建立的方法無(wú)明顯影響。如圖5、圖6所示。

1.缺野菊花陰性供試品 2～5.供試品 6.野菊花對(duì)照藥材 7.蒙花苷對(duì)照品 A：低溫(6 ℃)；B：室溫(26 ℃)圖5 不同展開(kāi)溫度的考察：野菊花

1.缺決明子陰性供試品 2～5.供試品 6.決明子對(duì)照藥材 7.橙黃決明素對(duì)照品 A：低溫(6 ℃)；B：室溫(26 ℃)圖6 不同展開(kāi)溫度的考察：決明子

3.4 不同濕度的考察 對(duì)低濕度(18%)、中濕度(55%)、高濕度(88%)進(jìn)行考察，結(jié)果在展開(kāi)溫度為室溫，濕度分別為18%和88%時(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無(wú)干擾，結(jié)果表明不同濕度下的展開(kāi)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)所建立的方法無(wú)明顯影響。如圖7、圖8所示。

1.缺野菊花陰性供試品 2～5.供試品 6.野菊花對(duì)照藥材 7.蒙花苷對(duì)照品 A：相對(duì)濕度(18%)；B：相對(duì)濕度(55%)；C：相對(duì)濕度(88%)圖7 不同展開(kāi)濕度的考察：野菊花

1.缺決明子陰性供試品 2～5.供試品 6.決明子對(duì)照藥材 7.橙黃決明素對(duì)照品 A：相對(duì)濕度(18%)；B：相對(duì)濕度(55%)；C：相對(duì)濕度(88%)圖8 不同展開(kāi)濕度的考察：決明子

4 討論

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中野菊花和決明子提取方法和展開(kāi)劑系統(tǒng)均參考了藥典中單味藥材及部分相關(guān)中成藥的鑒別方法[3],而根據(jù)復(fù)方制劑的復(fù)雜性、實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)易型及所使用試劑的安全性。筆者對(duì)最終的薄層方法進(jìn)行了一定的優(yōu)化，以達(dá)到鑒別的最佳效果。

4.1 野菊花的鑒別 提取方法比較了水超聲后乙醚再萃提[4]、80% 乙醇浸泡后提取[5]、甲醇超聲[6]、乙醇超聲[7]、無(wú)水乙醇超聲、展開(kāi)系統(tǒng)比較了乙酸乙酯-丁酮-氯仿-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)[3]、正己烷-乙酸乙酯-丁酮-甲酸(2∶5∶5∶1)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲醇超聲提取和無(wú)水乙醇超聲提取差別不大，所以最終選擇無(wú)水乙醇作為提取溶劑，展開(kāi)劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)這個(gè)組合操作簡(jiǎn)易，試劑環(huán)保，所得到的斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)、陰性對(duì)照無(wú)干擾，故用此法。

4.2 決明子的鑒別 通過(guò)比較7種提取方法，最終以乙酸乙酯加鹽酸加熱回流提取，去除以乙醚作萃取，三氯甲烷溶解為主體的幾種類似提取方法；展開(kāi)系統(tǒng)比較了石油醚(30～60 ℃)-丙酮(2∶1)、石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上層溶液[8]、環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.15)、石油醚(30～60 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶12∶5∶0.5)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶1)上層溶液、石油醚(30～60 ℃)-丙酮(3∶1)、石油醚(60～90 ℃)-丙酮(1∶3)[9],實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乙酸乙酯加鹽酸加熱回流提取的操作最為簡(jiǎn)易，所用試劑毒性低，對(duì)環(huán)境污染少，所得到的斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)、陰性對(duì)照無(wú)干擾，故用此法。

綜上，菊明降壓丸中的野菊花和決明子的薄層色譜具有明顯的鑒別特征。所采用的方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，可為有效控制菊明降壓丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)的依據(jù)，填補(bǔ)該藥缺少薄層鑒別的空白。