HPLC法測定不同時期鮮棗中環磷酸腺苷含量變化的研究

苗瀲涓，侯艷霞，宿炳林，郝瑞芳，常 寧，盧桂賓

(山西林業職業技術學院園藝系，山西 太原 030009)

環磷酸腺苷(cAMP)是在人體內廣泛存在的一種具有生理活性的重要物質，是生命傳遞的“第二信使”，參與調節細胞的生理活動和新陳代謝。據報道，在目前所有測得的動植物樣品中，cAMP含量在棗中是最高的。cAMP檢測大多采用蛋白免疫結合法、高效液相色譜法、紫外分光光度法、薄層色譜法等。本試驗以鮮棗為研究對象，通過纖維素酶水解浸提，提取鮮棗樣品中的活性成分cAMP，采用高效液相色譜法，測定不同品種鮮棗中cAMP的含量，同時檢測不同成熟期鮮棗樣品中cAMP含量的變化，為后期開發棗功能產品提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料

鮮棗(包括木棗、壺瓶棗、板棗3種)，采自山西省農科院果樹所國家棗種質資源圃。

1.1.2 試劑與儀器

試劑與儀器見第2頁表1.

表1 試劑與儀器

1.2 方法

1.2.1 標準溶液配制

精確稱取環磷酸腺苷標準品0.100 0 g，用純水溶解并定容至100 mL，得到1.0 mg/mL的標準貯備液，保存于4 ℃，可穩定1個月。分別吸取cAMP貯備液0.1 mL，0.2 mL，0.5 mL，1.0 mL，1.5 mL，2.0 mL加到100 mL容量瓶內，配制成1.0 μg/mL，2.0 μg/mL，5.0 μg/mL，10 μg/mL，15 μg/mL，20 μg/mL濃度系列標準液，過0.45 μm有機系濾膜，備用待測。

1.2.2 樣品預處理

將3種鮮棗切條干燥，粉碎機磨成粉末并過篩，棗粉備用。準確稱取1.000 0 g棗粉，熱水溶解后65 ℃溫水浴1 h，取出后冷卻到室溫，檸檬酸調節pH為5.0.加入纖維素酶(1∶100)在45 ℃水浴45 min，然后超聲20 min，取出后用50 mL離心管定容。4 ℃離心10 min，轉速4 000 r/min，樣液過0.45 μm有機系濾膜，裝入進樣瓶，備用待測。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的制作

分別把裝有1.0 μg/mL，2.0 μg/mL，5.0 μg/mL，10 μg/mL，15 μg/mL，20 μg/mL濃度系列標準液的樣品瓶放入自動進樣器，設置進樣量為10 μL.峰面積為橫坐標(X)，濃度為縱坐標(Y)，作標準曲線，結果見圖1.

圖1 環磷酸腺苷標準曲線

由圖1可以看出，環磷酸腺苷在10.0 μg/mL～50.0 μg/mL濃度范圍內，濃度和檢測峰面積呈良好線性關系，線性方程為y=0.000 317 88x+0.254 771 30，相關系數為0.999 148 04.

2.2 分離度

研究發現，在本試驗色譜條件下分析環磷酸腺苷保留時間是5.86 min，和cAMP標準品色譜圖對比，確定測定樣品含環磷酸腺苷。

環磷酸腺苷標準品、樣品HPLC譜圖見圖2，圖3.

圖2 環磷酸腺苷標準品HPLC譜圖

圖3 環磷酸腺苷樣品HPLC譜圖

2.3 不同品種不同生長時期環磷酸腺苷含量

不同品種不同生長時期環磷酸腺苷含量見第15頁圖4.

由圖4可以看出，不同品種不同生長時期鮮棗中cAMP含量差異較大。其中，木棗各時期cAMP含量均高于板棗和壺瓶棗。木棗在白熟期含量最高，可達到580.9 μg/g；板棗和壺瓶棗中cAMP含量相對較低，分別為135.83 μg/g和129.92 μg/g.

圖4 不同品種不同生長時期環磷酸腺苷含量

3 結論

1) 從3個品種鮮棗中cAMP含量分析結果來看，不同品種不同生長期cAMP含量不同。其中，木棗含量最高，達到580.9 μg/g，尤其是白熟期含量較其它生長期更高。隨著棗果的成熟，其cAMP含量呈下降趨勢。

2) 木棗白熟期cAMP含量最高，是板棗和壺瓶棗含量的4倍左右；木棗白熟期cAMP含量是半紅期的4倍左右，是全紅期的9倍左右。

3) 本研究為不同地域棗果cAMP含量研究提供了理論依據，下一步可對不同地域環境不同時期棗果中cAMP含量進行深度研究。