IL-35在RA患者中水平變化及其與疾病相關性

吳濤　曹天歌　王文華　于海躍　宋健　李榮濱

【摘 要】 目的：探討類風濕性關節（rheumatoid arthritis，RA）患者體內白介素-35（interleukin-35，IL-35）水平變化及其與疾病的相關性。方法：選取2017年5月至2018年9月齊齊哈爾市第一醫院收治的RA早期患者50例、RA中晚期患者50例以及骨關節炎（Osteoarthritis，OA）患者50例為研究對象，分別測定研究對象的血清和關節液中IL-35水平，血清C反應蛋白（CRP）水平，RA患者的疾病程度通過28個關節活動指數進行評估。結果：與OA患者比較，RA早期與RA中晚期患者治療前時血清IL-35水平顯著升高（P<0.05）;治療8周后，兩期患者IL-35水平均下降（P<0.05），IL-35能夠促進成骨細胞增殖，并呈現劑量依賴性。中晚期RA患者中，關節液IL-35水平與CRP水平（r=0.327，P<0.05）及DAS28值（r=0.425，P<0.05）分別呈現中等相關。結論：IL-35在RA患者中發揮著重要作用。

【關鍵詞】 類風濕性關節;OA;白細胞介素-35;血清;關節液

RA是一種慢性自身免疫性疾病，以往研究表明，其發病機制與許多細胞因子包括腫瘤壞死因子（TNF-α），白介素（IL-17）和IL-6相關[1]。RA是公認的炎癥性關節炎，2010年估計全球患病率為0.24%，女性的這一比例大約是男性的兩倍。近年來研究表明，IL-35，一種抗炎細胞因子，膠原誘導的關節炎（CIA）可減輕癥狀，降低CIA的發生率，防止骨損傷的進展[2-3]，然而IL-35在人類RA中的作用還無被闡明。本研究通過研究RA患者血清IL-35水平，以及疾病持續時間、疾病活動度、自身抗體產生等臨床特征，旨在幫助指導臨床對風濕性關節炎的診治及對藥物治療效果的評價。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年5月至2018年9月齊齊哈爾市第一醫院收治的RA早期患者50例、RA中晚期患者50例以及OA患者50例為研究對象，所有研究對象均熟知研究流程，并簽署知情同意書，該研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 治療方法

將來氟米特按說明書劑量給與各組患者應用治療，每日晚餐后頓服給藥，每晚20mg，治療周期為8周。

1.3 RA

患者的疾病程度評估通過28個關節活動指數（28-Joint Count Disease Activity Score，DAS28）進行RA患者的疾病程度評估。

1.4 標本采集及指標檢測

所有受試對象均于清晨空腹采集肘部靜脈血5mL，同時實施關節穿刺術，收集關節液。送至本院檢驗科進行IL-35水平測定。

1.5 成骨細胞培養

將購買的成骨細胞放入37℃水浴鍋復蘇，加入1640常規培養基，加入10% FBS于培養基中，放入細胞培養箱中進行常規培養。

1.6 CCK-8檢測成骨細胞增殖情況

將20μL CCK-8溶液加入到96孔板孔內，按照試劑盒說明書操作，利用酶標儀測定450nm處的OD值。

1.7 統計學分析

研究數據采用SPSS 17.0進行統計學分析。組間比較采用重復測量，相關性采用Pearson's積差相關分析，P<0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床資料

RA早期組、RA中晚期組及OA患者在年齡、性別、抗-CCP陽性構成方面差異無統計學意義（P>0.05）;與OA組患者比，RA早期、RA中晚期患者BMI降低（P<0.05）;早期及中晚期RA患者DAS治療后均有所改善，差異具有統計學意義（P<0.05）。

2.2 各組患者的血清、關節液IL-35水平變化情況

OA患者及藥物治療8周后的RA早期、RA中晚期患者其血清IL-35水平均明顯低于前期（P<0.01）。RA中晚期患者治療前時的關節液IL-35水平高于OA患者關節液水平（P<0.01），且明顯高于三組患者各時點的血清IL-35水平（P<0.01）。見表2。

2.3 各組患者的血清、關節液IL-35水平與RA疾病活動度的相關性

相關性分析結果表明，所有早期RA患者、中后期RA患者及OA患者，其血清IL-35水平與CRP水平、DAS28值均無相關性。而關節液IL-35水平與CRP水平及DAS28值分別呈現中等相關。見表3、表4。

2.4 IL-35促進成骨細胞增殖能力，并呈現劑量依賴性

用梯度濃度的IL-35刺激成骨細胞，72h后，25ng/mL的IL-35刺激的成骨細胞增殖能力顯著高于無IL-35刺激的成骨細胞（P<0.05），成骨細胞的增殖能力隨著濃度升高而升高，其差異具有統計學意義（P<0.05）。見圖1。

3 討論

類風濕關節炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病，其特點是炎癥和關節惡化，可導致功能喪失，降低生活質量，并提高發病率和死亡率[4-5]，本研究利用來氟米特對RA進行周期為8周的治療，觀察治療前后相關炎癥因子的變化。

通過對臨床上確診為RA不同時期患者的觀察研究，發現RA患者血清IL-35水平有很強的相關性。推測IL-35的內源性升高可能參與炎癥因子激活的負反饋免疫反應，而負反饋免疫反應可能參與炎癥因子激活的負反饋免疫反應，對抗過度炎癥反應，最終對RA患者起到保護作用，IL-35水平變化可能反映疾病的活動度而不反映治療的類型，這對了解RA的致病機制具有重要作用。

綜上所述，本研究顯示，血清、關節液中的IL-35在RA疾病的進展和控制中發揮著重要作用。這對于RA的診斷有著重要的臨床意義。但是本研究仍然存在一定的局限性，觀察到IL-35在RA治療前后的變化，但是對其在RA中發揮的作用機制卻未進行研究，這將在接下來的研究中進行設計并實施。

參考文獻

[1] 粟深偉，陸進明，盛君，等.類風濕關節炎患者血清白介素-33、白介素-35表達及其臨床意義[J].皖南醫學院學報，2012，31（06）：450-452.

[2] 王小茜，邢陳，黎燕，等.IL-12家族在自身免疫性疾病中的免疫調節作用[J].軍事醫學，2015，39（08）：637-640.

[3] 李澤，韓崇旭.IL-35在類風濕關節炎中抗炎促炎作用及與疾病指標的關系[J].檢驗醫學與臨床，2019，16（09）：1299-1301.

[4] 鄧代華.類風濕關節炎患者外周血白細胞介素-35的表達及臨床意義[D].2011，瀘州醫學院.

[5] 孟博，謝而付，周春剛.類風濕關節炎患者血清IL-35的水平及其與疾病活動度的關系[J].臨床檢驗雜志，2016，34（04）：277-280.