乙型病毒性肝炎感染者外周血細胞因子IL34表達及臨床意義*

劉志云，鄧茂林，王偉，姚利飛

（上海市東方醫院吉安醫院檢驗科，吉安 343000）

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒感染機體后引起的疾病。目前，全球有約20億人曾感染過HBV，我國乙肝病毒攜帶率為7.18%，其中三分之一感染者有反復的肝損害，是嚴重威脅著人類健康的全球性傳染病[1-3]。近年來，慢性乙型肝炎及肝硬化的發病機制及治療取得了極大的進展，細胞因子也成為了研究的熱點，IL-34是近年來發現的白介素家族的新成員，它是集落刺激因子受體1的另一個配體，與巨噬細胞集落刺激因子受體的功能相似，在各種炎性和自身免疫性疾病中發揮著重要的作用。本研究通過檢測乙肝病毒感染者外周血中IL-34的表達水平，旨在探討IL-34與乙肝病毒感染者病變程度的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取我院2016年1月-2018年12月就診的乙型肝炎感染者260例，其中慢性重型肝炎（CSHB）患者71例、慢性乙型肝炎(CHB)患者107例、乙型肝炎病毒攜帶者（ASC）患者32例、肝硬化（LC）患者50例；男150例，女110例，人平均年齡(37.7±12.3)歲。同時隨機選取既往無其他基礎疾病，身體健康體檢人群150例作為對照組，其中男80例，女70例，平均年齡(36.1±10.9)歲。260例HBV感染者中HBeAg陽性者96例，HBeAg陰性者164例。HBVDNA陽性者137例，陰性者123例。病毒性肝炎的診斷標準依據《慢性乙型肝炎防治指南》（2015版），所有研究對象均未進行干擾素、抗病毒和免疫調節治療及無甲型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎及其他自身免疫性肝病等。

1.2 標本收集 受試患者均無菌操作采靜脈血5ml，2-8℃以3000rpm離心10min，離心后將血清移至EP管中,標記后置于－70℃冰箱中凍存，備用。

1.3 方法

1.3.1 IL-34濃度的測定 按照ELISA試劑盒（abcam）說明書操作。標本于常溫解凍后重新離心。設標準孔(8個)和樣本孔，每個孔內分別加入100μl標準品或待測樣本，置于37℃孵育箱孵育2h，棄去液體后甩干，然后在各孔中加入抗生物素抗體100μl，置于37℃孵育箱孵育 1h，洗板 3次，甩干,加100μl辣根過氧化物酶標記親合素工作液,孵育1h。棄去液體甩干，洗板5次，每孔加底物溶液 90μl于37℃避光孵育 20min，結束后加入 50μl終止液終止反應，50μl終止液終止反應，450nm處檢測每孔的吸光度并自動換算為濃度值。

1.3.2 肝功能 ALT、AST、TBIL、AFP 和 HBV 標物由羅氏Cobas8000全自動生化免疫儀檢測完成，HA由亞輝龍iflsah 3000檢測完成，HBVDNA采用實時定量聚酶鏈反應(RT-PCR)技術由羅氏Z480檢測。

1.3.3 統計學處理 用SPSS17.0統計軟件對數據進行分析，數據資料以(±s)表示，兩組間計量資料比較用t檢驗，相關分析采用Spearson相關檢驗和線性回歸。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV感染者與對照組血清中IL-34表達HBV感染者血清中IL-34濃度顯著高于對照組(P＜0.05)，見表1。

表1 HBV感染者與正常對照組血清中IL-34表達濃度的比較

2.2 不同組HBV感染者與對照組血清中IL-34的表達 CSHB、CHB、ASC、LC組血清中 IL-34表達水平著均高于對照組，差異有統計學意義 (P<0.05）；CSHB組血清IL-34表達水平顯著高于 LC組、CHB組和ASC組，差異有統計學意義(P<0.05)；LC組血清中IL-34表達高于ASC組和CHB組，差異有統計學意義 (P<0.05)；ASC組血清中L-34表達水平高于CHB組，差異亦有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組HBV感染者與正常對照組血清中IL-34表達水平的比較

2.3 肝功能指標 ALT、AST、TBil、HA 與 IL-34表達水平的關系 將 260例患者血清中 ALT、AST、TBil和HA與IL-34表達水平進行線性相關分析，結果顯示血清 IL-34 水平與 ALT、AST、TBil、HA呈正相關，見圖1。

圖1 肝功能ALT、AST、TBil和HA與IL-35表達水平的線性相關性分析

2.4 腫瘤標志物AFP與IL-34表達水平的關系將AFP與IL-34表達水平進行線性相關分析，結果顯示AFP與IL-34呈正相關(P<0.05)，見圖2。

圖2 AFP與IL-34 表達水平之間的線性相關

2.5 IL-34表達水平與HBeAg陰陽性及HBV DNA病毒載量相關性分析 IL-34表達水平與HBeAg及HBV DNA拷貝數間均無相關性，見圖3。

圖 3HBeAg與IL-34表達水平之間的線性相關性分析

3 討論

Lin等于2008年通過檢測3400種人類分泌蛋白發現了白介素因子34（IL-34），其主要由巨噬細胞、內皮細胞、成纖維細胞和神經元細胞產生，廣泛存在于人體的心、腦、肝、肺、腎、脾、淋巴結等器官組織中[4]。具有巨噬細胞集落刺激因子 （MCSF）相似的生物學功能，能夠激活和調節免疫細胞，參與調節炎癥免疫[5]。IL-34可以與 CD4+單核細胞特異性結合，維持外周血單核細胞的生長以及促進單核細胞的增殖[6]；通過NF-κB通路刺激骨髓中單核母細胞向巨噬細胞分化[7]。最近研究發現，在慢性乙型肝炎患者中，IL-34的表達水平明顯增高[8]。

本研究通過對不同類型HBV感染者外周血IL-34表達水平分析發現HBV感染者血清中IL-34水平均高于對照組，且慢性重型肝炎（CSHB）組顯著高于CHB、LC、ASC和對照組，CHB組血清中IL-34水平高于LC和ASC組，LC組高于ASC組。ALT、AST、TBil、HA、AFP 是肝功能炎癥的臨床指標之一，可反映臟受損及細胞壞死的嚴重嚴重程度，本研究結果表明乙型肝炎病毒感染者外周血IL-34的表達水平與 ALT、AST、TBil、HA和 AFP之間呈正相關。IL-34是一種高選擇性的分泌蛋白，其與單核細胞的GSF-1R結合后，磷酸化細胞外信號調節激酶4及激酶2（ERK1/2），促進單核細胞向巨噬細胞集落單元、分化[9]，其對肝纖維化有直接和間接促進的作用，與肝臟炎癥、壞死、合成功能呈一定程度的相關性，使CSHB、CHB、LC和ASC組患者外周血中IL-34表達水平高于和對照組。

本研究結果表明HBeAg陰性與陽性感染者血清中IL-34表達水平無統計學意義，與HBV DNA載量亦無相關性，表明IL-34的免疫調節作用可能與病毒復制情況無直接關系，也可能與及早進行抗病毒治療相關。

大量研究證實IL-34與巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）的生物學功能相似，能夠激活和調節免疫細胞，參與調節炎癥免疫[5]。上世紀九十年代，日本學者[10]早期的研究表明M-CSF的血清表達水平與急慢性肝病、肝硬化都有著有密切關系，可反應了急、慢性肝病中肝細胞壞死及肝臟組織炎癥的嚴重程度。在眾多細胞因子中，轉化生長因子(transforming growth factoe beta 1，TGF-β1)是公認最強的促纖維因子，但近期相關學者的研究發現1/5的肝纖維化患者TGF-β1的表達沒有增加[11]，而IL-34的表達卻增強了，這似乎說明IL-34與肝臟纖維化進展關系密切，還與多種自身免疫性疾病如類風濕性關節炎[12-14]、潰瘍性結腸炎[15]、糖尿病、肥胖[16]肺癌[17]等密切相關。何曉榮等[18]研究發現，IL-34的表達量與腫瘤的大小、TNM分期等無明顯的相關性，但是與患者的生存期明顯相關，提示IL-34可能不是通過影響腫瘤細胞的增殖、凋亡等機制參與腫瘤的發病過程。

總而言之，IL-34作為促炎性細胞因子其在乙型肝炎患者的血清表達水平與乙型肝炎的炎癥反應和病變程度密切相關，通過檢測患者外周血IL-34表達水平，可以為乙型肝炎患者臨床治療提供參考依據。