HPLC-MS/MS法鑒別中成藥和保健食品中的雙羥萘酸噻嘧啶

楊麗蓉*，張 筱，聶曉華，王 悅

（濰坊市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 濰坊 261200）

雙羥萘酸噻嘧啶為淡黃色粉末，無(wú)臭，無(wú)味。易溶于堿溶液，在N，N-二甲基甲酰胺中略溶，在乙醇中極微溶解，在水中幾乎不溶[1]。雙羥萘酸噻嘧啶的檢測(cè)方法收載在《中國(guó)藥典》2015年版二部中，其主要為化學(xué)反應(yīng)的理化鑒別法、高效液相色譜法、紫外分光光度法和紅外分光光度法等。近年來(lái)在中成藥和保健食品中非法添加化學(xué)藥品的情況屢屢發(fā)生[2-5]。近期又發(fā)現(xiàn)有在中成藥和保健食品中添加雙羥萘酸噻嘧啶的情況，且與其相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道比較少。本文建立HPLC-MS/MS的方法鑒別中成藥和保健食品中添加的雙羥萘酸噻嘧啶。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

驅(qū)蟲巧克力，批號(hào)（B）P51571

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

島津LC-20A液相色譜串聯(lián)AB4000+三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀

1.3 實(shí)驗(yàn)用對(duì)照品

雙羥萘酸噻嘧啶對(duì)照品純度：99.0﹪。

1.4 試劑

乙腈，乙酸，氨水，乙酸銨，試驗(yàn)用水為超純水

2 檢測(cè)方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件

a）色譜柱：C18柱，5μm，4.6×150 mm。b）流動(dòng)相：乙腈：20 mmol/L乙酸銨（80:20）。c）流速：0.3 ml/min。d）進(jìn)樣量：1.0 μL 。

2.2 質(zhì)譜檢測(cè)條件

1）電離方式：電噴霧正負(fù)離子模式。2）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）。3）霧化氣：高純氮?dú)狻?）氣簾氣：10psi。5）噴霧氣：13psi。6）離子噴霧電壓：4500（+，-）。7）主要質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取雙羥萘酸噻嘧啶對(duì)照品約0.025 g，至25 ml量瓶中，用溶液A[乙腈：水：乙酸：氨水（93.4:3:3:0.6）]溶解并稀釋至刻度，再精密量取1.00 ml至100 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。用微孔濾膜過(guò)濾（0.22 μm，下同）備用。

表1 質(zhì)譜參數(shù)

2.4 供試品溶液的制備

精密稱取樣品約0.5 g，置50 ml容量瓶中，加入溶液A適量，超聲提取30min，放冷至室溫，用溶液定容。精密量取1.00 ml至100 ml量瓶中，用甲醇定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為待測(cè)液。

2.5 檢出限

根據(jù)雙羥萘酸噻嘧啶的S/N=3時(shí)溶液的溶度計(jì)算方法的檢出限，檢出限測(cè)定液的配置見2.5.1-2.5.3，各種劑型的檢出限見表2。

2.5.1 稱取六種基質(zhì)各約2g，分別置100 ml量瓶中，用溶液A溶解并稀釋至刻度，作為基質(zhì)溶液。

2.5.2 稱取雙羥萘酸噻嘧啶對(duì)照品約25 mg置25 ml量瓶中，用溶液A溶解并稀釋至刻度，再精密量取1.00 ml置100 ml量瓶中，用溶液稀釋至刻度，得到10 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.5.3 以基質(zhì)溶液為稀釋劑，把10 μg/ml的對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，分別在噻嘧啶和雙羥萘酸的S/N接近3時(shí)，確定檢出限。

2.6 定性判定[6]

根據(jù)樣品中色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)照品中色譜峰的保留時(shí)間一致，以及樣品中色譜峰定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)?shù)膶?duì)照品相對(duì)豐度一致進(jìn)行判定。

表2 不同劑型的檢出限（μg/g）

2.7 樣品的測(cè)定

按照2.4項(xiàng)下方法，精密稱取樣品約0.5 g，置50 ml容量瓶中，加溶液A適量，超聲提取30 min，放冷至室溫，用溶液定容。精密量取1.00 ml至100 ml量瓶中，用甲醇定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為待測(cè)液。樣品中檢測(cè)出雙羥萘酸噻嘧啶。

2.8 樣品相對(duì)離子豐度

樣品相對(duì)離子豐度符合定性判定的要求，樣品相對(duì)離子豐度見表3。

表3 樣品相對(duì)離子豐度

3 討 論

《中國(guó)藥典》2015年版二部收載的雙羥萘酸噻嘧啶的液相色譜鑒別方法，采用的是硅膠柱。硅膠柱為正向色譜柱，在藥品檢驗(yàn)中使用反向色譜柱較多，而使用正向色譜柱較少。正向色譜柱使用時(shí)要用正己烷、乙酸乙酯等過(guò)度，使用時(shí)較為復(fù)雜。且《中國(guó)藥典》2015年版二部收載的雙羥萘酸噻嘧啶的液相色譜鑒別方法，需要使用雙羥萘酸對(duì)照品和雙羥萘酸噻嘧啶對(duì)照品兩種對(duì)照品，分別進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)兩種對(duì)照品的保留時(shí)間一致進(jìn)行定性判定，檢測(cè)過(guò)程較為繁瑣。采用HPLC-MS/MS法對(duì)雙羥萘酸噻嘧啶進(jìn)行鑒別，樣品的測(cè)定在10min之內(nèi)完成，既可以通過(guò)保留時(shí)間的一致性進(jìn)行判定，又可以通過(guò)特征離子對(duì)進(jìn)行判定，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷。因此，也建議《中國(guó)藥典》中增加液相-質(zhì)譜聯(lián)用多反應(yīng)檢測(cè)的方式對(duì)化合物進(jìn)行定性鑒別。