兩種方法檢測乳腺癌組織中Her2蛋白表達并分析

郭秋杰，鄒佳芮，解水杉，劉 偉，柳春輝，郝俊梅*

（濱州醫(yī)學(xué)院煙臺附屬醫(yī)院，山東 煙臺 264100）

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率逐年上升。Her2是一種原癌基因，在腫瘤組織中過表達，且提示不良預(yù)后[1-2]。目前Her2蛋白的測定大多是通過IHC,由于其半定量性質(zhì)，該方法不能提供組織生物標志物的絕對定量。近期有研究已經(jīng)證明QDB能夠用變性樣品實現(xiàn)組織水平的蛋白質(zhì)含量的絕對定量[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2008～2013年本院存檔的女性乳腺癌患者239例，術(shù)前均未經(jīng)過放療或化療，年齡31～86歲。

1.2 試劑與方法

免疫組化Elivision法檢測Her2蛋白表達情況，Her2免疫組化試劑為多克隆兔抗人her2蛋白，購于DAKO公司。參照文獻[3]中的QDB方法檢測Her2蛋白表達情況，QDB板購于煙臺康體診醫(yī)療科技有限公司。FISH試劑購于安必平公司。

1.3 結(jié)果判讀

免疫組化判讀參考最新《乳腺癌HER2檢測指南》，定義0和1+為低表達，2+和3+為高表達。QDB結(jié)果判讀：低表達：QDB值＜0.261 nmole/g，高表達：QDB值≥0.261 nmole/g[3]。FISH判讀：參考2018版《CAP臨床實踐指南：乳腺癌HER2檢測》。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件處理數(shù)據(jù)。Kappa檢驗評價不同檢測方法的一致性。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法檢測Her2蛋白結(jié)果及一致性比較

239例乳腺癌患者中，IHC和QDB檢出均低表達162例，均高表達48例。（IHC染色見圖1）。兩檢測方法有相關(guān)性（r=0.697，P＜0.001）（見表1），Kappa值為0.687,說明二者一致性較高。

表1 兩種檢測方法之間的關(guān)系

圖1 乳腺癌Her2免疫組化染色：A低表達（1+）、B高表達（3+）

2.2 3例乳腺癌FISH檢測結(jié)果分析

在兩種檢測方法結(jié)果不一致的病例中隨機選取3例，2例IHC結(jié)果為Her2（2+），QDB為低表達；1例IHC結(jié)果為Her2（1+），QDB為高表達。對這3例標本進行FISH檢測（見圖2），結(jié)果與QDB一致。

圖2 乳腺癌Her2 FISH檢測：A無擴增、B擴增

3 討論

乳腺癌中Her2基因擴增是獨立的預(yù)后因素，提示預(yù)后較差，其過表達提示腫瘤對曲妥珠單抗靶向治療反應(yīng)良好[4]。所以，Her2蛋白檢測結(jié)果的準確性對患者的治療尤為重要。目前Her2蛋白的測定大多是通過IHC，但由于不同批號Her2蛋白抗體的差異及判讀者主觀性，會出現(xiàn)假陰性和假陽性的問題[5]。另外IHC屬于半定量檢測，所以不能準確、定量的測定乳腺癌標本中Her2蛋白的水平。

QDB方法是首個在福爾馬林固定石蠟包埋樣品中可以實現(xiàn)蛋白的絕對定量的方法，該測定只需較少的總蛋白裂解物[3]。這種定量測定的方法在測量中沒有模棱兩可的案例，檢測的結(jié)果是或高于或低于建議的臨界值的。

本實驗用兩種方法進行檢測，得出Kappa=0.687, 兩種方法一致性較高,表明QDB可作為除IHC之外臨床實驗室常規(guī)使用的選擇。

FISH檢測是乳腺癌Her2檢測的金標準，本實驗在兩種檢測方法結(jié)果不一致的病例中隨機選取3例進行了FISH檢測，結(jié)果與QDB一致，說明QDB可能較IHC準確性更高。

本實驗證明QDB作為一種絕對定量的檢測方法，可作為臨床實驗室乳腺癌Her2蛋白的檢測常規(guī)使用的選擇。