急性腹瀉患者非傷寒沙門菌的耐藥性檢測和基因分型研究

李立巍

（桂林市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科，廣西 桂林 541001）

沙門氏菌可以食物為媒介傳播至餐桌，也可通過生物媒介如感染者或帶菌者傳播，從而導(dǎo)致感染性腹瀉的發(fā)生。在我國，因沙門氏菌感染導(dǎo)致的腹瀉比例遠(yuǎn)高于其他細(xì)胞[1]。頭孢類抗菌藥為現(xiàn)階段臨床上治療沙門氏菌的常用藥，此外，四環(huán)素類/喹諾酮類等也常用于該菌感染導(dǎo)致的腹瀉治療[2]。但因我國抗生素濫用問題嚴(yán)重，導(dǎo)致沙門氏菌耐藥種類不斷增多，耐藥率也呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)[3]。本研究對(duì)某區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢測，收集的急性腹瀉患者糞便標(biāo)本檢出的沙門氏菌進(jìn)行藥敏檢測，對(duì)沙門氏菌的藥敏特點(diǎn)和相關(guān)耐藥基因進(jìn)行探討，明確本地區(qū)沙門氏菌耐藥性發(fā)展趨勢(shì)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年某區(qū)疾病預(yù)防控中心收集的急性腹瀉患者糞便標(biāo)本8702例，由上述標(biāo)本中檢測沙門氏菌，檢出沙門氏菌后應(yīng)按照《WS/T454-2014 從業(yè)人員預(yù)防性健康檢查 沙門菌志賀菌檢驗(yàn)方法》進(jìn)行復(fù)核，隨后在采用沙門氏菌屬診斷學(xué)血清確認(rèn)血清型。

1.2 方法

1.2.1 抗生素敏感試驗(yàn)

本研究藥敏試驗(yàn)抗菌藥物選取15種，即為氨芐西林、阿奇霉素、舒巴坦、慶大霉素、四環(huán)素、頭孢西丁等；檢測方法和結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參考肉湯稀釋法。質(zhì)控菌株為購自美國菌種保存中心的大腸埃希菌ATCC25922。

1.2.2 耐藥基因鑒定

選擇耐第一代喹諾酮類藥物萘啶酸的菌株進(jìn)行基因型鑒定和序列分析。采用DNA提取試劑盒提出基因組為模版，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，PCR轉(zhuǎn)錄完成后采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果。PCR產(chǎn)物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。測序結(jié)果采用相關(guān)軟件進(jìn)行編輯處理，隨后在采用BLAST程序在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行對(duì)比，確定突變點(diǎn)和突變種類。

2 結(jié) 果

2.1 沙門氏菌檢出率

某區(qū)疾病預(yù)防控中心收集的急性腹瀉患者糞便標(biāo)本8702例，其中檢出沙門氏菌286例（3.29%）。

2.2 286例沙門氏菌血清型

本研究中共檢測出沙門氏菌血清型51種，其中腸炎沙門氏菌最多，為67例（23.4%）；其他血清型比例為：鼠傷寒沙門氏菌43例（15.0%），拉古什沙門氏菌24例（8.4%），都柏林沙門氏菌15例（5.2%），布利丹沙門氏菌15例（5.2%），湯卜遜沙門氏菌10例（3.5%），阿貢納沙門氏菌9例（3.1%），倫敦沙門氏菌7例（2.4%），科特布斯沙門氏菌7 例（2.4%），其他沙門氏菌89例（31.1%）。

2.3 沙門氏菌對(duì)抗菌藥敏感性檢測

本研究中，沙門氏菌主要對(duì)紅霉素（100.0%）、氨芐西林（68.9%）、四環(huán)素及萘啶酸（52.8%）耐受。而沙門氏菌中多重耐藥率則可達(dá)65.0%，最多可耐受8類抗菌藥。結(jié)果見表1。

表1 某區(qū)疾病預(yù)防控制中心沙門氏菌耐藥情況分析

2.4 286例沙門氏菌耐藥基因鑒定

與野生型敏感株細(xì)菌的Ty2基因序列對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，耐萘啶酸沙門氏菌gyrA基因在Ser83位或Asp87位密碼子發(fā)生基因突變，各種基因突變所占比例分別為：Ser83→Phe為68例（45.3%），Asp87→Asn為48例（32.0%），A s p 8 7 →G l y 為2 0 例（1 3.3%），A s p 8 7 →Ty r 為13例（8.7%）。gyrB、parC和parE基因未發(fā)現(xiàn)發(fā)生基因突變。

3 討 論

沙門氏菌是一種可對(duì)機(jī)體健康造成嚴(yán)重影響的致病菌，其血清型種類較多，抗原較為復(fù)雜，現(xiàn)階段已鑒定出的血清型超過了3000種，時(shí)導(dǎo)致食源性腹瀉的重要因素之一。沙門氏菌感染在不同國家均有較高的發(fā)病率，但在發(fā)展中國家具有較高的死亡率[1]。沙門氏菌導(dǎo)致的傳染病對(duì)人類發(fā)展具有重大的影響，即使現(xiàn)階段，沙門氏菌感染對(duì)發(fā)展中國家亦可造成不利影響[2]。近些年來，隨著傷寒和副傷寒發(fā)病率的降低，而非傷寒沙門氏菌的感染率則呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，且由于抗生素濫用導(dǎo)致非傷寒沙門氏菌耐藥譜逐漸加寬。因此，清華對(duì)非傷寒沙門氏菌耐藥性的監(jiān)測，對(duì)于控制非傷寒沙門氏菌感染流行具有重要意義。

本研究結(jié)果表明，某區(qū)疾病預(yù)防控中心沙門氏菌檢出率為3.29%；沙門氏菌主要血清型為腸炎沙門氏菌（23.4%）、鼠傷寒沙門氏菌（15.0%）、拉古什沙門氏菌（8.4%）；沙門氏菌主要對(duì)紅霉素（100.0%）、氨芐西林（68.9%）、四環(huán)素及萘啶酸（52.8%）耐受，而沙門氏菌中多重耐藥率則可達(dá)65.0%，最多可耐受8類抗菌藥；耐萘啶酸沙門氏菌gyrA基因在Ser83位或Asp87位密碼子發(fā)生基因突變，而gyrB、parC和parE基因未發(fā)現(xiàn)發(fā)生基因突變。

綜上所述，某區(qū)疾病控中心監(jiān)測的非傷寒沙門氏菌耐藥情況較為嚴(yán)重，血清型與其他地區(qū)分布存在一定的差異，而其中喹諾酮類耐藥基因gyrA基因變異為引起非傷寒沙門氏菌產(chǎn)生耐藥的主要作用。