宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的關(guān)系

唐清華　李艷萍

[摘要] 目的 探究宮頸高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的關(guān)系。 方法 選取2017年2月～2019年6月昆明市婦幼保健院因?qū)m頸炎就診的女性患者218例為研究對象。所有患者均行高危型HPV檢查，根據(jù)結(jié)果將其分為觀察組（n = 80，高危型HPV陽性者）、對照組（n = 138，高危型HPV陰性者）。比較兩組陰道微生態(tài)失調(diào)的情況及宮頸局部細(xì)胞免疫情況， Pearson相關(guān)性分析分析宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的關(guān)系。 結(jié)果 共檢測出高危型HPV感染患者80例，陽性率為36.70%（80/218），其中以HPV16的檢出率最高（52.50%），其次是HPV52（22.50%）。觀察組陰道微生態(tài)失調(diào)、支原體、解脲脲原體、衣原體、乳酸桿菌異常率、細(xì)菌性陰道炎發(fā)生率均高于對照組（均P < 0.05）。觀察組CD4+、CD4+/CD8+均低于對照組（P < 0.05）。高危型HPV感染與宮頸局部CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)（r = -0.453、-0.421，P < 0.05），與細(xì)菌性陰道炎、衣原體、乳酸桿菌、解脲脲原體呈正相關(guān)（r = 0.432、0.525、0.504、0.472，P < 0.05）。 結(jié)論 宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫息息相關(guān)，可加重患者的陰道微生態(tài)紊亂，降低患者局部細(xì)胞免疫功能。

[關(guān)鍵詞] 高危型人乳頭瘤病毒;陰道微生態(tài);宮頸;局部細(xì)胞免疫;關(guān)系

[中圖分類號] R737.33? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2020）06（c）-0107-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between high risk human papillomavirus （HPV） infection and vaginal microecology and local cellular immunity. Methods From February 2017 to June 2019， 218 female patients with cervicitis who came to Kunming Maternal and Child Health Hospital were selected as the study subjects. All patients were tested for high risk HPV examination， according to the results， they were divided into observation group （n = 80， high risk HPV positive）， control group （n = 138， high risk HPV negative）. The vaginal microecology disorders and cervical local cell immunity were compared between two groups. Pearson correlation analysis was used to analyze the relationship between cervical high risk HPV infection and vaginal microecology and cervical local cellular immunity. Results Eighty cases were found to be high risk HPV infection， the positive rate was 36.70% （80/218）， among which HPV16 was the highest （52.50%）， followed by HPV52 （22.50%）. The vaginal microecology disorder， mycoplasma， ureaplasma urealyticum， chlamydia， lactobacillus abnormal rate and bacterial vaginitis rate in observation group were higher than those in control group （P < 0.05）. CD4+， CD4+/CD8+ in observation group were lower than those in control group （P < 0.05）. High risk HPV infection was negatively correlated with CD4+， CD4+/CD8+ （r = -0.453，-0.421， P < 0.05）， while positively correlated with bacterial vaginitis， chlamydia， lactobacillus and ureaplasma urealyticum （r = 0.432，0.525， 0.504，0.472， P < 0.05）. Conclusion Cervical high risk HPV infection is closely related to vaginal microecology and cervical local cellular immunity， which can aggravate the disorder of vaginal microecology and reduce the local cellular immune function of patients.

[Key words] High risk human papillomavirus; Vaginal microecology; Cervix; Local cellular immunity; Relationship

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，早期常無癥狀體征，但伴隨疾病的進(jìn)一步發(fā)展，患者將會出現(xiàn)陰道流血、排液的情況，晚期可引起貧血、惡病質(zhì)等全身衰竭表現(xiàn)，預(yù)后較差[1]。宮頸癌的發(fā)病過程極為漫長，多始于慢性炎癥，逐步進(jìn)展為上皮內(nèi)瘤變，最終進(jìn)展為宮頸癌[2]。宮頸癌病因明確，主要是由于高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的感染[3]。故臨床多通過篩查高危型HPV以預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。但現(xiàn)階段研究認(rèn)為，高危型HPV感染后，并非所有患者會發(fā)展為宮頸癌。多數(shù)患者依靠自身強(qiáng)大的免疫清除作用可消除高危型HPV感染，只有少部分患者無法自行清除而成為持續(xù)感染者，此類群體才易成為宮頸癌的高發(fā)群體[4-5]。另有研究顯示，宮頸癌的發(fā)生還需要一些協(xié)同因素的刺激[6-7]。女性的陰道主要由陰道菌群、生理結(jié)構(gòu)及免疫功能組成，具有抵抗感染及抑制炎性反應(yīng)等作用[8-9]。因此，本研究分析宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的關(guān)系，以期為臨床宮頸癌的防治提供數(shù)據(jù)支撐。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年2月～2019年6月昆明市婦幼保健院因?qū)m頸炎就診的218例女性患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《新編實(shí)用婦科學(xué)》[10]，宮頸管伴持續(xù)出血，或棉拭子有膿性黏液/膿性分泌物;②月經(jīng)及性生活均正常者;③臨床資料齊全者;④患者及其家屬均簽署同意書;⑤均為單一感染者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①全子宮切除者;②合并免疫缺陷、急慢性感染史者;③合并其他惡性腫瘤者;④合并嚴(yán)重心肺腎等臟器功能不全者;⑤入組前1個月接受宮頸疾病治療者;⑥入組前2周內(nèi)服用抗菌、抗病毒藥物者;⑦妊娠及哺乳期女性。

所有患者均行高危型HPV檢查，根據(jù)檢查結(jié)果將其分為觀察組（n = 80，高危型HPV陽性者）、對照組（n = 138，高危型HPV陰性者）。其中對照組年齡26～55歲，平均（38.62±3.42）歲;體重指數(shù)20.6～25.8 kg/m2，平均（23.07±1.08）kg/m2。觀察組年齡25～54歲，平均（38.59±2.96）歲;體重指數(shù)20.2～26.3 kg/m2，平均（23.11±1.16）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 高危型HPV檢測? 檢查前3 d無陰道沖洗、用藥、性生活，取擴(kuò)陰器以暴露宮頸，于宮頸管內(nèi)用無菌棉拭子順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3周，放置于專用細(xì)胞保存液內(nèi)待檢。宮頸細(xì)胞液經(jīng)13 000 r/min離心2 min，離心半徑8 cm，取上清液，采用亞能生物HPV分型檢測試劑盒（生產(chǎn)批號：20170112）檢測，包括HPV68、59、58、56、52、51、45、39、35、33、31、18、16共13種高危型。實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 宮頸局部細(xì)胞免疫檢測? 取擴(kuò)陰器以暴露宮頸，于宮頸管內(nèi)用無菌棉拭子順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3周，放置于盛有1 mL生理鹽水的無菌EP管內(nèi)，經(jīng)1500 r/min離心10 min，離心半徑8 cm，棄上清，隨后加入生理鹽水2 mL重懸下層細(xì)胞，放置于含肝素的抗凝管中，采用流式細(xì)胞儀（美國BD公司，F(xiàn)ACS Calibur型）檢測CD4+、CD8+，計(jì)算CD4+/CD8+。

1.2.3 陰道微生態(tài)檢測? 取3支無菌長棉簽，于患者陰道側(cè)壁刮取分泌物，1支滴10%氫氧化鉀溶液，查看是否有氨氣味;1支放置于盛有生理鹽水的無菌管內(nèi)用于檢測支原體、滴蟲、解脲脲原體及衣原體感染;1支用于制作涂片，用革蘭染色，觀察陰道內(nèi)線索細(xì)胞、乳酸桿菌及霉菌的分布情況。

1.2.4 陰道微生態(tài)平衡檢測? 取1支無菌長棉簽，于患者陰道側(cè)壁刮取分泌物，采用陰道微生態(tài)聯(lián)合測定試劑盒（山東仁智生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20161220）進(jìn)行檢測，包括白細(xì)胞酯酶（LE）、唾液酸苷酶活性（SNA）、過氧化氫（H2O2）三項(xiàng)。SNA顯紅色或紫色，H2O2<2 mmol/L呈藍(lán)色，LE顯綠色或藍(lán)色為陽性。三者均為陰性者提示陰道微生態(tài)環(huán)境正常，出現(xiàn)一項(xiàng)陽性者則提示陰道微生態(tài)失調(diào)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的關(guān)系分析采用Pearson相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組高危型HPV感染情況

218例患者中，高危型HPV感染患者80例，陽性率為36.70%（80/218）。其中以HPV16的檢出率最高，為52.50%（42/80）;其次為HPV52，檢出率為22.50%（18/80）;HPV18檢出率為10.00%（8/80）;HPV31檢出率為7.50%（6/80）;HPV33檢出率為5.00%（4/80）;HPV51檢出率為1.25%（1/80）;HPV58檢出率為1.25%（1/80）。

2.2 兩組陰道微生態(tài)情況比較

兩組滴蟲、線索細(xì)胞、霉菌發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;觀察組陰道微生態(tài)失調(diào)、支原體、解脲脲原體、衣原體、乳酸桿菌異常率、細(xì)菌性陰道炎發(fā)生率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。見表1。

2.3 兩組局部細(xì)胞免疫情況比較

觀察組CD4+、CD4+/CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;兩組CD8+比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.4 高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫的相關(guān)性分析

高危型HPV感染與宮頸局部CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05）;與細(xì)菌性陰道炎、乳酸桿菌、衣原體、解脲脲原體呈正相關(guān)（P < 0.05）;與支原體、滴蟲、線索細(xì)胞、霉菌、CD8+、陰道微生態(tài)失調(diào)無相關(guān)性（P > 0.05）。見表3。

3 討論

HPV通過感染、整合、癌變參與宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展，此類觀點(diǎn)已獲得國內(nèi)外學(xué)者的一致認(rèn)同[11-13]。現(xiàn)全球范圍內(nèi)并沒有有效清除HPV感染的藥物，雖然已有HPV疫苗在臨床取得了一定療效，但現(xiàn)有的HPV疫苗藥效時(shí)間較短，其長期預(yù)防效果仍未達(dá)到理想預(yù)期[14-15]。因此，如何有效避免或減少HPV感染，對預(yù)防宮頸癌的發(fā)生具有積極臨床意義。隨著對宮頸癌的深入研究，不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)，較多HPV感染患者在發(fā)生宮頸癌前病變類疾病后可自行轉(zhuǎn)歸，并未發(fā)展為宮頸癌，只有少部分持續(xù)HPV感染患者才易成為宮頸癌的高危發(fā)病群體[16-20]。這使得研究人員得出HPV感染并非導(dǎo)致宮頸癌的唯一因素，其發(fā)病過程同樣伴隨著其他未知因素。在HPV感染的過程中，陰道微生態(tài)環(huán)境的改變作用重大。陰道內(nèi)有多種微生物存在，與機(jī)體生理結(jié)構(gòu)、免疫功能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能組成陰道微生態(tài)環(huán)境，構(gòu)成一個獨(dú)特、動態(tài)的體系。當(dāng)其處于失衡狀態(tài)時(shí)，機(jī)體局部免疫功能降低，提高HPV感染的敏感性[21]。

既往研究顯示[22]，有40多種HPV會引起生殖道的感染，高危型感染誘發(fā)宮頸癌，而低危型感染則多誘發(fā)尖銳濕疣等疾病。本研究結(jié)果顯示，高危型HPV陽性率為36.70%（80/218），其中以HPV16的檢出率最高，其次為HPV52。崔艷雙等[6]研究結(jié)果顯示，高危型HPV陽性率為39.2%，以HPV16的檢出率最高，與本研究結(jié)果基本一致。維持陰道微生態(tài)的平衡是保障女性生殖道健康的關(guān)鍵，當(dāng)其平衡被打破時(shí)，會促使厭氧菌大量生長，進(jìn)而誘導(dǎo)宮頸細(xì)胞學(xué)發(fā)生變化。本研究結(jié)果顯示，觀察組陰道微生態(tài)失調(diào)、支原體、解脲脲原體、衣原體、乳酸桿菌異常率、細(xì)菌性陰道炎發(fā)生率均高于對照組（P < 0.05），可見宮頸高危型HPV感染者其存在陰道微生態(tài)失衡情況，乳酸桿菌是微生態(tài)系統(tǒng)中的優(yōu)勢菌群，不僅能抑制病原體的入侵、生殖道腫瘤的發(fā)生，還可激活黏膜免疫系統(tǒng)。當(dāng)宿主感染HPV時(shí)，抑制機(jī)體細(xì)胞乳酸桿菌的生長，導(dǎo)致衣原體、厭氧菌等致病微生物大量繁殖，進(jìn)而加速宮頸上皮細(xì)胞的突變，最終增加宮頸癌變的風(fēng)險(xiǎn)[23-24]。根據(jù)表面抗原可將T細(xì)胞分為CD4+、CD8+兩種，CD4+主要參與炎性反應(yīng)，CD8+參與抗腫瘤免疫應(yīng)答，CD4+/CD8+可以反映機(jī)體細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)與炎性反應(yīng)的平衡狀態(tài)[25]。本研究結(jié)果顯示，觀察組CD4+、CD4+/CD8+低于對照組（P < 0.05），可見宮頸高危型HPV感染者均存在一定程度的細(xì)胞免疫功能降低，宿主對HPV感染以局部免疫應(yīng)答為主，當(dāng)存在持續(xù)感染時(shí)，局部免疫功能降低。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，高危型HPV感染與宮頸局部CD4+、CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)，與細(xì)菌性陰道炎、衣原體、乳酸桿菌、解脲脲原體感染陽性呈正相關(guān)。可見宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫息息相關(guān)，后續(xù)可考慮成為臨床防治宮頸癌病變的新靶點(diǎn)。

綜上所述，宮頸高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及局部細(xì)胞免疫息息相關(guān)，可加重患者陰道微生態(tài)紊亂，降低患者局部細(xì)胞免疫功能。

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（收稿日期：2019-11-06? 本文編輯：劉明玉）