復(fù)方山楂煎劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型的影響

李月 李想

【摘要】 目的：觀(guān)察復(fù)方山楂煎劑對(duì)大鼠心肌缺血模型的影響。方法：選取2017年10月26日-2018年1月8日90只SD大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、復(fù)方山楂煎劑組（低14.85 g/kg、中29.70 g/kg、高59.40 g/kg劑量組），脂必妥對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組10只，其余各組每組16只，雌雄各半?？瞻讓?duì)照組喂飼普通飼料，其余各組喂飼高脂飼料造大鼠冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組灌胃蒸餾水，其余給藥組灌胃相應(yīng)藥物，連續(xù)造模并預(yù)防給藥10周。第5周除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠分別于皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素1 mg/（kg·d），隔日1次，共3次。給藥第10周檢測(cè)血清低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）以及血清超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH），取心臟用于HE染色及免疫組化染色檢測(cè)Caspase-3在心肌組織中的表達(dá)。結(jié)果：復(fù)方山楂煎劑顯著降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型大鼠血清LDL-C、LDH，顯著提高冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型大鼠血清HDL-C含量及SOD的活性（P<0.05或P<0.01）;復(fù)方山楂煎劑可顯著降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型大鼠心肌損傷積分平均值（P<0.05或P<0.01）。復(fù)方山楂煎劑可顯著降低Caspase-3在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型大鼠心肌的表達(dá)（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：復(fù)方山楂煎劑可能通過(guò)影響脂質(zhì)代謝、抗氧化能力及Caspase-3的表達(dá)產(chǎn)生調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病模型大鼠心肌損傷的作用。

【關(guān)鍵詞】 大鼠 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病 復(fù)方山楂煎劑 細(xì)胞凋亡

[Abstract] Objective： To observe the effect of Fufang Shanzha Decoction on myocardial ischemia in rats. Method： Ninety SD rats were selected from October 26， 2017 to January 8， 2018， they were randomly divided into normal control group， model control group and Fufang Shanzha Decoction group （lower 14.85 g/kg， middle 29.70 g/kg，

high 59.40 g/kg dose group）， Zhibituo control group. There were 10 rats in normal control groups， each of the other groups had 16 rats， half male and half female. The normal control group was fed with normal diet， and the other groups were fed with high-fat diet to establish a rat model of coronary atherosclerotic heart disease. The normal control group and the model control group were given distilled water， the other groups were given the corresponding drug. Dosing while modeling for 10 weeks. In the 5th week， except for the normal control group， rats in each group were injected with Isoproterenol 1 mg/（kg·d） at multiple times， once every other day for 3 times. At the 10th week of administration， serum low density lipoprotein （LDL-C）， high density lipoprotein （HDL-C）， serum superoxide dismutase （SOD）， lactate dehydrogenase （LDH） were measured. Detection of myocardial damage by HE staining. The expression of Caspase-3 in myocardial tissue was detected by immunohistochemical staining. Result： Fufang Shanzha Decoction significantly reduced serum LDL-C and LDH in rats with coronary atherosclerotic heart disease， and significantly increased serum HDL-C content and SOD activity in rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Fufang Shanzha Decoction can significantly reduce the mean value of myocardial injury in rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Fufang Shanzha Decoction can significantly reduce the expression of Caspase-3 in the myocardium of rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion： Fufang Shanzha Decoction may regulate myocardial injury in rats with experimental coronary atherosclerotic heart disease by affecting lipid metabolism， antioxidant capacity and expression of Caspase-3.

2.3 復(fù)方山楂煎劑對(duì)心肌缺血模型心肌組織中Caspase-3表達(dá)的影響 空白對(duì)照組心肌組織Caspase-3表達(dá)灰度值為（198.75±26.58），模型對(duì)照組為（126.73±20.36），SJ低劑量組為（157.25±19.65），SJ中劑量組為（161.64±20.48），SJ高劑量組為（168.51±22.39），脂必妥組為（171.54±24.31）。與空白對(duì)照組相比，造模后模型對(duì)照組心肌組織中Caspase-3表達(dá)顯著升高（P<0.01）;與模型對(duì)照組相比，SJ低劑量組、SJ中劑量組、SJ高劑量組、脂必妥組Caspase-3表達(dá)顯著降低（P<0.05或P<0.01）。各組大鼠Caspase-3表達(dá)情況，見(jiàn)圖2。

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化指動(dòng)脈內(nèi)膜有脂質(zhì)的沉積，平滑肌細(xì)胞增生，膠原纖維增多，形成粥糜樣壞死病灶[9]。基本病理改變是在動(dòng)脈內(nèi)膜面形成斑塊，有脂質(zhì)條紋，血栓形成和斑塊內(nèi)出血等繼發(fā)病變，血清中LDL-L升高，HDL-C降低，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損傷，是激發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的起始環(huán)節(jié)。SOD是肌體重要的內(nèi)源性自由基清除劑，通過(guò)歧化方式清除超氧化物，它的活性反映機(jī)體對(duì)抗自由基損傷的抵抗能力，機(jī)體的抗氧化能力有利于保護(hù)心肌和動(dòng)脈內(nèi)膜[10]。乳酸脫氫酶活性增高主要見(jiàn)于心肌梗死，LDH活性的降低就是抗心肌和動(dòng)脈內(nèi)膜保護(hù)的體現(xiàn)[11]。高脂飲食誘導(dǎo)大鼠發(fā)生冠心病性心肌缺血成模率很低，因此本研究中又采用了高脂飲食聯(lián)合皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素誘發(fā)心肌缺血模型[12]，既可以考察復(fù)方山楂煎劑對(duì)冠狀動(dòng)脈模型的影響，又可以考察復(fù)方山楂煎劑對(duì)心肌缺血模型的影響。本研究通過(guò)灌胃給予高脂飼料10周造模，引起了大鼠脂質(zhì)代謝障礙，結(jié)果顯示模型大鼠血清LDL-C顯著升高，HDL-C顯著降低，模型組大鼠血清SOD活力顯著降低，抗氧化能力減弱。復(fù)方山楂煎劑組對(duì)血液中LDL-C、LDH含量的上升均有很明顯的抑制作用，同時(shí)HDL-C、SOD含量有明顯的提高。因此復(fù)方山楂煎劑具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝及抗氧化的作用。

動(dòng)脈粥樣硬化病變易累及大型彈性動(dòng)脈，如主動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈，動(dòng)脈管腔變窄甚至閉塞可造成臟器的缺血性改變。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病血管管徑狹窄達(dá)75%以上，則可發(fā)生心肌梗死[13]。在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的基礎(chǔ)上心肌暫時(shí)性缺血會(huì)引起的血管發(fā)生痙攣，心肌缺氧使酸性代謝產(chǎn)物刺激感覺(jué)神經(jīng)末梢所產(chǎn)生的反射性癥狀誘發(fā)心絞痛[14]。心肌梗死是由于心肌持久缺血、缺氧所引起的心肌細(xì)胞凋亡[15]，可引起心肌細(xì)胞凋亡的因素有很多，如氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子、鈣穩(wěn)態(tài)失衡、線(xiàn)粒體功能異常，本研究中高脂飲食可增加心血管系統(tǒng)發(fā)生氧化應(yīng)激風(fēng)險(xiǎn)，皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素也可因增加心肌耗氧量而引起心肌損傷，因此本研究誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的主要途徑為氧化應(yīng)激[16]。Caspases調(diào)節(jié)多種生物過(guò)程，Caspase-2，3，6，7，8，9，10具有促凋亡的作用，它們以級(jí)聯(lián)的方式切割一系列胞內(nèi)蛋白，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-14參與角化細(xì)胞的分化，但不在炎癥或細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用[17]。Caspase-1，4，5，11，12，13具有促炎性的作用，它們可以介導(dǎo)特異性細(xì)胞因子的成熟，還參與細(xì)胞凋亡。Caspase活化基本有兩種機(jī)制，即同源活化和異源活化，Caspase-8，10，9誘導(dǎo)凋亡后，起始Caspase通過(guò)adaptor被募集到特定的起始活化復(fù)合體，形成同源二聚體構(gòu)象改變，導(dǎo)致同源分子之間的酶切而自身活化，通常Caspase-8，10，2介導(dǎo)死亡受體通路的細(xì)胞凋亡，而Caspase-9參與線(xiàn)粒體通路的細(xì)胞凋亡。異源活化是由一種Caspase活化另一種caspase是凋亡蛋白酶的酶原被活化的經(jīng)典途徑，包括Caspase-3，6，7。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過(guò)程中最主要的終末剪切酶[18]，也是CTL細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分。本研究結(jié)果表明復(fù)方山楂煎劑可顯著降低Caspase-3在模型大鼠心肌的表達(dá)，并能顯著減輕心肌缺血模型大鼠的心肌損傷。

綜上所述，復(fù)方山楂煎劑可通過(guò)調(diào)節(jié)脂代謝、抗氧化應(yīng)激、抗凋亡等作用產(chǎn)生對(duì)心肌的保護(hù)

作用。

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（收稿日期：2019-11-21） （本文編輯：周亞杰）