CD56、CK19、Galectin-3和TPO的聯合檢測在甲狀腺乳頭狀癌中的應用

鄭詣 唐玉嫻

甲狀腺癌是內分泌系統和頭頸部腫瘤中常見的惡性腫瘤，近年來其發病率呈逐年升高的趨勢[1]。甲狀腺癌的主要病理分型為乳頭狀癌和濾泡狀癌，其中約85%為甲狀腺乳頭狀癌，可在任何年齡段發病，常見于兒童和年輕女性[2]。其病理診斷主要依賴于組織形態學及細胞核特點的特征，如乳頭狀結構、核溝、核內假包涵體、毛玻璃樣核等，但是一些無典型特征的早期甲狀腺乳頭狀癌或類似甲狀腺乳頭狀癌樣的真乳頭狀結構的良性甲狀腺病變的出現可能出現漏診或誤診的情況，因此臨床上需要尋求一些特異性的標記物來輔助甲狀腺乳頭狀癌的診斷。本研究采用免疫組化方法檢測CD56、CK19、Galectin-3和TPO的表達情況，探究和分析其在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年10月—2019年9月期間我院收治497例甲狀腺切除術患者的病理標本作為研究對象，其中男性93例，女性404例，年齡20～72歲，平均（43.6±10.1）歲。根據WHO內分泌腺腫瘤分類標準診斷為甲狀腺乳頭狀癌的有103例，良性甲狀腺腫瘤的有394例。甲狀腺乳頭狀癌組中男性18例，女性85例，年齡20～72歲，平均（44.1±10.3）歲，良性甲狀腺腫瘤組中男性75例，女性319例，年齡20～72歲，平均（43.1±9.9）歲。兩組患者的性別和年齡比較其差異無統計學意義（P＞0.05），具有臨床可比性。

1.2 方法

采用免疫組化SP（streptavidin-perosidase）法檢測CD56、CK19、Galectin-3和TPO的表達情況，將患者手術切除的甲狀腺標本用10%中性緩沖福爾馬林固定，進行常規組織處理，石蠟包埋后以4 μm連續切片。采用CD56、CK19、Galectin-3和TPO抗體進行染色，根據試劑的說明書進行操作，陰性對照為磷酸緩沖鹽溶液，已知陽性切片作為陽性對照。CD56、CK19、Galectin-3和TPO抗體均為鼠抗人抗體，購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 判定標準

采用雙盲法，有兩位病理診斷醫生獨立閱片，觀察10個高倍視野計數1 000個細胞，進行免疫組化結果評估，兩者均值為樣本的最終結果。CD56陽性定位于細胞膜和（或）細胞質，CK19陽性定位于細胞質，Galectin-3定位與細胞漿，部分細胞核亦著色，TPO陽性定位于細胞質和細胞膜，陽性物質均為棕黃色。染色結果按陽性細胞占腫瘤細胞的百分比判定：陰性（-）為陽性細胞≤10%；弱陽（+）為陽性細胞11%～25%；中陽性（++）為陽性細胞26%～50%；強陽性（+++）為陽性細胞＞50%。串聯聯合檢測標準：所有的診斷方法均診斷為甲狀腺乳頭狀癌即為陽性，如有一項或一項以上不能診斷即為陰性；并聯聯合檢測標準：只要有一項或一項以上能診斷為甲狀腺乳頭狀癌即為陽性，如均不能診斷才為陰性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0統計軟件進行統計學分析。計量資料用（±s）表示，組間比較用t檢驗；計數資料用（%）表示，組間比較用χ2檢驗。靈敏度＝真陽性/（真陽性+假陰性），特異性＝真陰性/（真陰性+假陽性），準確度＝（真陽性+真陰性）/（所有陽性+所有陰性），P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 患者CD56免疫組化的表達情況

CD56在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為7.69%，在良性甲狀腺腫瘤中的陽性率為93.06%。CD56在兩組患者之間的表達差異存在統計學意義，甲狀腺乳頭狀癌中的CD56表達明顯低于良性甲狀腺腫瘤（P＜0.05）。見表1。

2.2 患者CK19免疫組化的表達情況

CD19在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為92.23%，在良性甲狀腺腫瘤中的陽性率為57.36%。CD19在兩組患者之間的表達存在顯著統計學差異，甲狀腺乳頭狀癌中的CD19表達顯著高于良性甲狀腺腫瘤（P＜0.05）。見表2。

2.3 患者Galectin-3免疫組化的表達情況

Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為96.12%，在良性甲狀腺腫瘤中的陽性率為16.75%。Galectin-3在兩組患者之間的表達差異存在統計學意義，甲狀腺乳頭狀癌中的Galectin-3表達顯著高于良性甲狀腺腫瘤（P＜0.05）。見表3。

2.4 患者TPO免疫組化的表達情況

TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為11.65%，在良性甲狀腺腫瘤中的陽性率為82.74%。TPO在兩組患者之間的表達差異存在統計學意義，甲狀腺乳頭狀癌中的TPO表達顯著低于良性甲狀腺腫瘤（P＜0.05）。見表4。

2.5 單項檢測與聯合檢測的診斷價值比較

根據上述結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌多數呈CK19和CD56陽性和（或）CD56和TPO陰性，以此作為甲狀腺乳頭狀癌診斷標準進行分子標志物診斷價值比較。單項檢測結果顯示，CD56的靈敏度最高，TPO的特異度最好。串聯聯合檢測時CK19表達陽性、Galectin-3表達陽性、CD56表達陰性、TPO表達陰性這四項同時達標才可診斷為甲狀腺乳頭狀癌；并聯聯合檢測時CK19表達陽性、Galectin-3表達陽性、CD56表達陰性、TPO表達陰性中有一項達標即診斷為甲狀腺乳頭狀癌。聯合檢測結果顯示，串聯檢測診斷的靈敏度、特異度和準確度均高于各項檢測；并聯檢測時，靈敏度雖高于各單項檢測，特異度和準確度卻低于各單項檢測。見表5。

表1 兩組患者CD56免疫組化表達情況比較

表2 兩組患者CD19免疫組化表達情況比較

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌起病隱匿，最初僅表現為可觸及的無痛性甲狀腺結節，目前臨床主要采用觸診、組織病理學檢查、超聲檢查、細針穿刺細胞學活檢、反射性核素掃描等[3]。但上述方法均存在一定程度的缺陷，如觸診和超聲檢查漏診和誤診率較高，且無法分辨腫瘤的病理類型；細針穿刺細胞學檢查雖靈敏度和準確度較高，但仍會有一部分患者無法確定良惡性；放射性核素掃描具有一定的輻射影響，部分患者難以接受；在甲狀腺病變的臨床病理診斷中，常規手段難以鑒別一些非典型的病變，如在甲狀腺腫瘤的病理診斷中HE染色法并不絕對可靠，存在靈敏度和特異度較低的缺陷，尤其是在甲狀腺乳頭狀癌與腺瘤和乳頭增生的鑒別診斷上存在較大的困難[4]。目前病理檢驗關注的焦點在于甲狀腺癌上具有較高的特異性的分子標志物，并通過檢測其表達情況來輔助診斷甲狀腺乳頭狀癌。

表3 兩組患者Galectin-3免疫組化表達情況比較

表4 兩組患者Galectin-3免疫組化表達情況比較

表5 單項檢測與聯合檢測的診斷價值比較（%）

CD56屬于免疫球蛋白家族，是一種細胞表面唾液酸糖蛋白，又稱為神經細胞黏附分子（N-CAM）。CD56在自然殺傷細胞、肌細胞以及漿液黏液腺有正常表達，也在自然殺傷細胞淋巴瘤、神經內分泌瘤以及皮膚T細胞淋巴瘤有表達，其表達在一定程度上會影響腫瘤細胞的繁殖和腫瘤相關淋巴管生成。有研究表明，CD56在正常甲狀腺組織、結節性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤和乳頭狀增生中高表達，而在甲狀腺乳頭狀癌中失表達或呈灶性弱表達[5]。CK19常見于正常上皮細胞及各種上皮尤其是單層上皮和間皮來源的腫瘤，是一種低分子量的細胞角蛋白，現已廣泛應用于甲狀腺良惡性疾病的鑒別診斷中[6]。有關研究表明[7]，CK19在甲狀腺乳頭狀癌中主要呈彌漫性強陽性表達，而在其他甲狀腺乳頭狀增生中多呈陰性表達，即使表達也多為弱陽性表達，可見CK19在甲狀腺乳頭狀癌與乳頭狀增生鑒別診斷中的重要價值。Galectin-3是（半乳糖結合蛋白，屬于植物凝集素蛋白家族的成員之一，通過與特異性配體結合來調控甲狀腺細胞的黏附、浸潤、轉移、增殖、凋亡等生物學行為，具有重要的生理作用，廣泛表達于正常組織以及腫瘤組織中[8]。目前國內外多項研究[9-13]顯示Galectin-3在甲狀腺癌中的陽性表達率顯著高于良性甲狀腺病變。TPO其化學本質是一種糖基化血紅蛋白，合成于甲狀腺濾泡細胞，位于甲狀腺細胞的內質網、核周膜及頂膜，是合成甲狀腺激素的關鍵酶。在正常、炎性病變和良性腫瘤中的濾泡上皮均可見TPO的彌漫性表達，多項研究表明甲狀腺惡性腫瘤中TPO呈低表達或失表達[14]。在本研究中CD56、CK19、Galectin-3和TPO在甲狀腺乳頭狀癌和良性甲狀腺腫瘤中的表達差異均存在統計學意義（P＜0.05），CD56和TPO在甲狀腺乳頭狀癌中失表達或低表達，而在良性甲狀腺腫瘤中高表達；CK19 和Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中多數呈強陽性的高表達，而在良性甲狀腺腫瘤中失表達或低表達。各項分子的標志在甲狀腺疾病中的表達情況與目前已發表的研究結果一致。在單項檢測中CD56診斷的靈敏度最高，CD56診斷的特異度最高，四項聯合檢測時串聯檢測診斷的靈敏度、特異度和準確度均高于各項檢測；并聯檢測時，靈敏度雖高于各單項檢測，特異度和準確度卻低于各單項檢測。因此在臨床工作中，可采用四項分析標記物串聯聯合檢測提高甲狀腺乳頭狀癌的診斷效率。

綜上所述，CD56、CK19、Galectin-3和TPO可作為甲狀腺乳頭狀癌的有效指標，并采用串聯聯合檢測診斷提高其診斷價值。因此在臨床病例形態不典型時，可通過檢測CD56、CK19、Galectin-3和TPO等分子標志物或采用合適的聯合診斷方案輔助甲狀腺乳頭狀癌的診斷，提高其診斷靈敏度、特異度和準確度。