腫瘤標志物檢測中如何應用化學發光免疫分析

劉欣霖　汪志勇

摘 要：化學發光免疫分析（CLIA）具有使用簡便、可自動化、儀器價格低、靈敏度高、無放射性污染等眾多優勢，因此受到人們的重視。近年來CLIA在腫瘤標志物檢測中應用廣泛，本文對CLIA在腫瘤標志物檢測的應用進展作一綜述。

關鍵詞：化學發光免疫分析;腫瘤標志物;糖鏈抗原

0 引言

CLIA將酶或者發光物質標記在抗體或抗原上，完成免疫反應后，加入的酶底物或氧化劑發光，對發光強度進行測量，依據標準曲線進行待測物濃度的測定。

1 CLIA研究進展

1.1 發光物質

1.1.1 吖啶脂類

吖啶脂類為高效、快速的發光化學物質，可迅速發射大量光子。其發光效率與試劑中解離的酸性基團有關，堿性條件下基團發生化學反應。CLIA分析時，發光試劑經過具有磁性的顆粒時將堿性糾正液加入其中，此時發光劑可在無催化劑的條件下分解而發光。

1.1.2 魯米諾及其衍生物

魯米諾及其衍生物系常用化學發光物，堿性溶液條件下可被氧化，氧化后的魯米諾及其衍生物發光。特種氧化酶氧化下，發光底物出現化學反應而釋放能量，之后底物轉變為激發態中間體，返回穩定狀態時可發射光子[1]。

1.1.3 光澤糖

光澤糖以硝酸鹽形式存在，堿性條件下經過氧化氫氧化為中間體并進一步裂解，生成激發態吡啶酮，發射淡綠色光芒。光澤糖常用于甲胎球蛋白的檢測。

1.2 CILIA分析方法

1.2.1 化學發光酶免疫分析

這一方法通過酶來標記生物活性物質并進行免疫反應，其將酶附著在免疫活性物質上并催化發光底物，發光物質反應，定量分析發光信號。當前常用的酶包括辣根過氧化物酶及堿性磷酸酶，其發光底物存在差異。辣根過氧化物酶常用魯米諾及其衍生物作為發光底物，采用酶標記物標記抗體，堿性條件下發光底物化學反應發光。

1.2.2 化學發光免疫分析

這一方法采用可發光的化學試劑直接標記抗體并進行檢測。合適的發光化學試劑要能滿足以下要求：①不影響被標記物的免疫活性，或影響非常小;②耦聯后，發光試劑可在一定時間內保持量子效能穩定;③試劑可與抗原或抗體結合，其結合物要足夠穩定。常用的標記發光物質包括魯米諾、吖啶脂類。

1.2.3 電化學發光免疫分析

物質電化學反應而發光的現象被稱為電化學發光，電化學反應時，電極上通過電壓，此時電極上出現化學反應而引起物質相互作用轉變為激發態，激發態回到基態時發光[2]。魯米諾及其衍生物是常用發光標記物，堿性環境下受到帶電電極刺激而發光，這一方法的應用使得檢測敏感度明顯提高，在腫瘤標志物測量中應用廣泛。

1.3 CLIA技術新進展

近年來CLIA的新進展主要體現在：①試劑及原料的制備標記的發展及研究;②新CLIA體系、條件的建立及優化;③CLIA與納米材料的聯用;④CLIA與其他技術的聯用，例如毛細管電泳分離技術、微流控技術、流動注射技術、新傳感器技術等;⑤CLIA儀器的開發。基于磁性微粒子的CLIA[3]、化學發光共振能量轉移免疫分析等都是當前的熱門，免疫層析技術也受到關注[4]。

2 CLIA在腫瘤標志物檢測中的應用

2.1 糖鏈抗原（CA）

當前已經發現多種CA，常見的包括CA153、CA199、CA125等，分別對應乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌標志物。楊麗[5]評估了CLIA測定CA199、AFP應用于原發性肝癌診斷的效果，發現CA199、AFP截斷點分別為76.91U/mL、207.84μg/L時，原發性肝癌的診斷靈敏度分別為79.63%、85.19%，特異度均為84.00%，聯用CA199、AFP診斷原發性肝癌的準確度達到93.27%。

2.2 胚胎抗原

胚胎抗原為胚胎某一時間表達的膜結合或可溶性成分，正常成人組織中無胚胎抗原或含量極低。腫瘤患者體內的胚胎抗原水平增高，常見胚胎抗原包括甲胎蛋白（AFP）及癌胚抗原（CEA），分別是肝癌、消化道腫瘤的標志物。AFP、CEA的常用檢測方法包括放射免疫分析（RIA）、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）等，CLIA技術不斷發展的當前，CLIA已經廣泛應用于AFP、CEA的檢測中，基本取代了RIA、ELISA。張學棟等[6]比較了CLIA及時間分辨熒光免疫分析（TRFIA）法測定肝癌患者及體檢健康者AFP的效果，發現兩種測定方法的準確性均較高。王堃等[7]發現CLIE及電化學發光免疫分析（ECLIA）法應用于7項腫瘤標志物檢測中的一致性良好。

2.3 酶類

神經元特異性烯醇化酶（NSE）為烯醇化酶同工酶，是神經母細胞瘤、小細胞癌的早期標志物。研究證實，NSE與轉移部位、神經轉移無關系，與疾病嚴重程度相關。羅桑艷[8]采用ECLIA測定NSE、CEA及細胞角蛋白19

片段（CYFRA21-1），發現其應用于診斷肺癌的應用價值良好。

2.4 前列腺特異抗原（PSA）

周友俊等[9]建立了前列腺特異抗原-α1-抗胰凝乳蛋白酶（PSA-ACT）單抗細胞株，采用辣根過氧化物酶催化魯米諾，建立PSA-ACT的CLIA的分析方法。延海秀等[10]應用Cobas 601型全自動電化學發光免疫分析系統對PSA、CA153、CA199、CA125、AFP、CEA進行同時測定，對原發性肝癌、結腸癌的輔助診斷具有臨床意義。

3 討論

多數腫瘤標志物均并非某癌癥的特異性標志物，很多癌癥的腫瘤標志物種類多樣，因此單獨測定某種腫瘤標志物無法滿足診斷需求的。聯合測定同一樣品種的兩種及以上腫瘤標志物是當前的發展方向。CLIA應用于測定腫瘤標志物，不僅可應用于早期輔助診斷及術后監測，還能為尋找新腫瘤標志物提供方法，這對臨床醫學的發展意義重大。可以預計，CLIA的技術將不斷發展，與其他材料、技術聯合應用，其穩定性、靈敏度將進一步提高，可實現集成化、自動化、微型化，多組分的全自動快速檢測儀器將在更多領域中進一步應用。

參考文獻：

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[6]張學棟，趙潔，潘有龍.化學發光免疫檢測在甲胎蛋白檢驗中的應用準確性評價及其性能分析[J].中國醫學裝備， 2019，16（03）：22-25.

[7]王堃，喻晶，雷旦生.CLIA法和ECLIA法檢測7項腫瘤標志物的比較研究[J].中國衛生檢驗雜志，2015，25（17）： 2853-2856.

[8]羅桑艷.血清神經元特異性烯醇化酶、細胞角蛋白19片段、癌胚抗原檢測在肺癌診斷中的價值[J].現代實用醫學，2017，29（12）：1590-1592.

[9]周友俊，李嬌霞，程繪珺，等.化學發光免疫分析法檢測血清中前列腺特異抗原復合物[J].分析化學，2016（8）：1209-1214.

[10]延海秀，朱現菊.利用Cobas601型全自動電化學發光免疫分析系統檢測腫瘤相關抗原的臨床意義[J].包頭醫學院學報，2017，33（9）：82-83.

本文系2019年貴州省大學生創新創業訓練計劃項目，項目編號20195200881。