131 I治療老年分化型甲狀腺癌患者的效果分析及對胞外信號調節激酶通路蛋白的調控作用研究

王磊，凌瑞，易軍，贠軍，李南林，呂勇剛，孟慶杰

空軍軍醫大學西京醫院（解放軍第四軍醫大學第一附屬醫院）甲狀腺乳腺血管外科，西安710032

甲狀腺癌是臨床上發病率較高的內分泌系統惡性腫瘤，也是引起死亡的重要原因[1‐2]。雖然目前分化型甲狀腺癌發病率占甲狀腺癌比例較低，但有逐年升高的趨勢[3‐4]。目前臨床上治療甲狀腺癌通常采用的方法為手術合并131I治療[5]。131I治療分化型甲狀腺癌已經被臨床廣泛采用，且其安全性和有效性已經得到廣泛的認可[6]。但是隨著治療劑量的增大，131I的治療風險也明顯增加。因此，探索131I治療后患者的不良反應及治療相關生物大分子參與機制具有重要的臨床價值和實踐意義。本研究分析131I治療老年分化型甲狀腺癌患者的效果及對胞外信號調節激酶（extracellular signal‐regu‐lated kinase，ERK）通路蛋白的調控作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年2月至2016年12月解放軍第四軍醫大學第一附屬醫院收治的老年分化型甲狀腺癌患者的病歷資料。納入標準：均經病理檢查確診為甲狀腺癌，屬于乳頭狀癌，且均無肝腎轉移。排除標準：嚴重的肝腎功能異常；嚴重的代謝性疾病；嚴重的免疫系統疾病；存在明顯的認知功能障礙。根據納入、排除標準，共納入180例老年分化型甲狀腺癌患者，男95例，女85例；年齡61～65歲，平均（63.3±3.1）歲；肺部轉移31例，頸部淋巴結轉移149例。

1.2 治療方法

所有患者在治療前均停用左甲狀腺素鈉片3周，忌碘攝入4周；服用131I后2 h開始采取促進唾液分泌的措施。所有患者均接受131I一次性口服治療，無轉移首次治療劑量為100 mCi，淋巴結轉移為150 mCi，肺轉移為200 mCi，骨轉移為 250 mCi。每日早、中、晚觀察患者的情況直至治療結束。

1.3 觀察指標

取患者空腹靜脈血血清待用。分析患者治療前后白細胞數、血小板數、紅細胞數和淋巴細胞數變化，并檢測肝腎功能相關蛋白谷丙轉氨酶（ala‐nine aminotransferase，ALT）、谷草轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、血尿素氮（blood urea nitro‐gen，BUN）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）及肌漿網鈣離子ATP酶2a（sarcoplasmic retic‐ulum calcium ATPase 2a，SERCA2a）水平的變化；分析患者血清中相關生物大分子Ras、Raf、胞外信號調節蛋白激酶（mitogen‐activated protein kinase，MEK）、胞外信號調節激酶1/2（extracellular signal‐regulated kinase 1/2，ERK1/2）、B細胞淋巴瘤/白血病‐2相關X蛋白（B‐cell lymphoma/leukemia‐2 asso‐ciated X protein，BAX）、B細胞淋巴瘤/白血病‐2（B cell lymphoma/leukemia‐2，Bcl‐2）、p53、p73、熱休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）、磷酸酶和緊張 素同系 物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）、Beclin1、高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）及增殖細胞核抗原（prolifer‐ating cell nuclear antigen，PCNA）水平的變化。結果以與β‐actin蛋白的相對表達量表示。

1.4 儀器及試劑

冷凍離心機購自BIORIDGE公司；酶標儀購自美國伯樂公司；全自動生化分析儀購自羅氏公司。ALT、AST、BUN、ALP及SERCA2a檢測試劑盒購自南京檢測生物工程研究所；白細胞、血小板、紅細胞和淋巴細胞檢測試劑盒購自羅氏公司；Ras、Raf檢測試劑盒購自Omega公司；MEK和ERK1/2蛋白檢測試劑盒購自Abcam公司；BAX/Bcl‐2、p53檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；p73、HMGB1及PCNA檢測試劑盒購自R&D公司。

1.5 統計學分析

采用SPSS 21.0統計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用配對t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 131 I治療前后血細胞水平的比較

131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者血清中白細胞數和血小板數均低于治療前，差異均有統計學意義（P＜0.05）；治療前后紅細胞數和淋巴細胞數比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 131I治療前后血細胞水平的比較（± s）

表1 131I治療前后血細胞水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值6.3 3±1.0 2 5.0 6±0.9 9 2.5 4 6 4.5 5±0.6 8 4.5 1±0.6 9 1.9 8 6 2 8 9.6±2 5.2 2 3 6.9±1 8.7 2.1 4 7 1.5 2±0.3 2 1.1 5±0.2 8 3.6 5 3 P值白細胞（×1 0 9/L）＜0.0 5紅細胞（×1 0 12/L）＞0.0 5血小板（×1 0 9/L）＜0.0 5淋巴細胞（×1 0 9/L）＞0.0 5

2.2 131 I治療前后肝腎功能指標水平的比較

131I治療前后老年分化型甲狀腺癌患者血清中肝腎功能相關分子ALT、AST、BUN、ALP及SER‐CA2a蛋白水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表 2）

表2 131I治療前后肝腎功能指標水平的比較（± s）

表2 131I治療前后肝腎功能指標水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值P值2 4.6±1.7 7 2 4.9±2.5 4 0.4 8 7＞0.0 5 2 3.9±4.0 2 2 3.0±2.3 5 0.3 4 1＞0.0 5 4.5 2±0.3 4 4.5 6±0.4 5 0.6 5 4＞0.0 5 6 3.9±7.5 8 6 1.2±6.3 9 0.6 4 5＞0.0 5 4 5.6±5.2 2 4 7.5±3.6 3 0.2 5 4＞0.0 5 A L T（U/L）A S T（U/L）B U N（m m o l/L）A L P（μ m o l/L）S E R C A 2 a（U/L）

2.3 131 I治療前后ERK通路蛋白相對表達水平的比較

131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者ERK信號通路關鍵分子Ras、Raf、MEK及ERK1/2水平均降低，且與治療前相比差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表 3）

表3 131I治療前后ERK通路蛋白相對表達水平的比較（± s）

表3 131I治療前后ERK通路蛋白相對表達水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值P值0.5 6±0.0 9 0.4 6±0.0 8 2.1 7 5＜0.0 5 0.4 4±0.0 8 0.3 3±0.0 7 2.1 1 8＜0.0 5 0.4 5±0.0 6 0.4 0±0.0 9 3.4 7 4＜0.0 5 0.5 0±0.1 1 0.4 5±0.0 7 6.3 4 7＜0.0 5 R a s R a f M E K E R K 1/2

2.4 131 I治療前后HSP70、PTEN及Beclin 1相對表達水平的比較

131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者HSP70、PTEN及Beclin1蛋白相對表達水平均低于治療前，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表4）

表4 131I治療前后HSP70、PTEN及Beclin 1相對表達水平的比較（± s）

表4 131I治療前后HSP70、PTEN及Beclin 1相對表達水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值P值0.5 1±0.1 0 0.4 4±0.0 5 1.2 8 7＜0.0 5 0.4 1±0.0 8 0.3 6±0.0 6 3.3 4 2＜0.0 5 0.4 4±0.0 8 0.3 8±0.0 7 2.6 4 8＜0.0 5 H S P 7 0 P T E N B e c l i n 1

2.5 131 I治療前后 p53、 p73、BAX及Bcl- 2相對表達水平的比較

131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者血清中p53、p73及BAX蛋白相對表達水平均升高，而Bcl‐2蛋白相對表達水平降低，與治療前比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表5）

表5 131I治療前后 p53、 p73、BAX及Bcl‐ 2相對表達水平的比較（± s）

表5 131I治療前后 p53、 p73、BAX及Bcl‐ 2相對表達水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值P值0.1 5±0.0 3 0.1 9±0.0 6 4.2 2 8＜0.0 5 0.2 0±0.0 4 0.2 4±0.0 5 3.3 3 7＜0.0 5 0.3 0±0.0 5 0.3 5±0.0 5 2.9 4 6＜0.0 5 0.3 4±0.0 8 0.3 0±0.0 5 2.7 8 0＜0.0 5 p 5 3 p 7 3 B A X B c l‐2

2.6 131 I治療前后HMGB 1及PCNA相對表達水平的比較

131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者HMGB1及PCNA蛋白相對表達水平均低于治療前，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表6）

表6 131I治療前后HMGB 1及PCNA相對表達水平的比較（± s）

表6 131I治療前后HMGB 1及PCNA相對表達水平的比較（± s）

時間131I治療前（n=1 8 0）131I治療后（n=1 8 0）t值P值0.5 4±0.1 2 0.4 5±0.0 9 5.2 7 9＜0.0 5 0.4 7±0.0 8 0.3 8±0.0 9 2.9 6 5＜0.0 5 H M G B 1 P C N A

3 討論

放射性131I治療分化型甲狀腺癌的臨床效果已經得到廣泛認可，且其不良反應發生率低，對患者器官無嚴重損傷，具有廣泛的應用前景。但是目前關于131I治療后體內生物大分子表達水平變化及對細胞內信號轉導通路的影響報道較少。本研究在分析131I治療老年分化型甲狀腺癌患者效果及對ERK通路蛋白的調控作用時發現131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者血清中白細胞數和血小板數降低而紅細胞數、淋巴細胞數、ALT、AST、BUN、ALP及SERCA2a水平無明顯變化；血清中ERK信號通路蛋白BAX、p53、p73蛋白水平均升高而Ras、Raf、MEK、ERK1/2、Bcl‐2、HMGB1 及 PCNA 蛋白水平均降低。因此，131I治療老年分化型甲狀腺癌患者效果與其調控患者體內ERK信號通路有關，且不影響患者的肝腎功能。

細胞外信號向細胞內轉導是外部刺激影響細胞生理生化反應的主要方式，其主要是由一系列的信號轉導通路介導的。ERK信號轉導通路是腫瘤細胞功能維系的關鍵信號轉導通路[7‐8]。血管生成增多是惡性腫瘤的重要標志，而絲裂原活化蛋白激酶/細胞外調節蛋白激酶信號通路與腫瘤血管新生過程密切相關[9]，且PI3K/AKT及MEK/ERK信號轉導通路在腫瘤血管內皮細胞遷移中發揮著積極的作用[10]。以往的研究發現雙丁酰環腺苷酸抑制甲狀腺癌細胞株FTC‐133增殖過程與其調控細胞內ERK信號轉導通路有關[11]，且雌激素受體α與細胞外信號調節蛋白激酶和血管內皮生長因子在甲狀腺癌的發生、發展、轉移及細胞凋亡過程中發揮著廣泛的作用[12]。同時，MAPK/ERK和PI3K/AKT信號通路的基因變異與甲狀腺癌的發生發展過程密切相關，且可以作為藥物干預治療甲狀腺癌的靶點[13]。本研究發現131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者血清中ERK信號通路蛋白Ras、Raf、MEK及ERK1/2表達水平降低，提示131I治療與引起甲狀腺癌患者ERK信號轉導通路的恢復有關。

增殖細胞核抗原PCNA也與甲狀腺組織的病理過程緊密聯系，也是甲狀腺癌患者臨床治療效果及預后的標志物[14‐15]。以往的研究發現，甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺乳頭狀增生的鑒別診斷中PC‐NA水平是一項重要指標[16]，且甲狀腺炎合并甲狀腺惡性腫瘤患者體內PCNA蛋白的表達水平也明顯增高[17]。以往的研究發現，甲狀腺乳頭狀癌中hMLH1、hMSH2和PCNA的表達水平是患者臨床分期的重要標志物，也與患者的預后密切相關[18‐19]。活血消癭方對結節性甲狀腺腫模型大鼠甲狀腺細胞增殖和凋亡的調控作用也主要通過其影響細胞內PCNA蛋白的表達實現[20]，而甲狀腺癌組織中p27和增殖細胞核抗原的表達水平是甲狀腺癌臨床分期的重要標志物，且二者表達呈明顯的正相關[21]。本研究發現131I治療后老年分化型甲狀腺癌患者血清中PCNA蛋白水平降低，提示131I治療也與引起甲狀腺癌患者PCNA蛋白的恢復有關。

因此，131I治療老年分化型甲狀腺癌患者效果與其調控患者體內ERK信號通路有關，且不影響患者的肝腎功能。