復合輔料炮制何首烏對二苯乙烯苷和游離蒽醌的影響

李潤虹 甘國興,2 龍國斌,2 朱衛星,2 周國彥 張永鉅

1.廣東省清遠市中醫院藥學部，廣東 清遠 511500；2.清遠市中醫院廣東省鮮藥民族醫藥工程技術研究中心，廣東 清遠 511500

何首烏為蓼科植物何首烏 (PolygonummultiflorumThunb.)的干燥塊根，生品具有解毒、消癰、潤腸通便的功效，炮制品具有補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨的功效[1]。歷代醫籍和本草中記載何首烏的炮制輔料有黑豆、酒、醋、米泔水、熟地汁、黑豆生姜汁、甘草汁等[2-3]。查閱歷代藥典和全國15個省市炮制規范，其中記載的何首烏炮制輔料為黑豆和黃酒[3]，2015年版《中國藥典》中何首烏炮制輔料只有黑豆，為何藥典淘汰了其他輔料只留單一的黑豆？不同輔料對何首烏藥效成分有何影響目前尚未明確。本實驗分別選用生姜汁、甘草汁、熟地汁、米泔水和黑豆汁等組成復合輔料，按照2015年版《中國藥典》中制何首烏的炮制方法制備何首烏，比較復合輔料所炮制的何首烏中二苯乙烯苷和游離蒽醌的含量，闡明復合輔料對何首烏中藥效成分的影響，為選擇何首烏炮制輔料提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 何首烏原藥材(五年生)購于廣東省肇慶市德慶縣，經清遠市中醫院朱衛星主任中藥師鑒定為蓼科植物何首烏(PolygonummultiflorumThunb.)的塊根。

1.1.2 試劑 二苯乙烯苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110844-201713)，大黃素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110756-201512)，大黃素甲醚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110758-201817)，乙腈、甲醇為色譜純(德國默克公司)，乙醇為分析純(廣州化學試劑廠，批號：2019030118)，甲醇為分析純(廣州化學試劑廠，批號：2019010124)，超純水。

1.1.3 儀器 2695-2489高效液相色譜儀(Waters公司)；依利特-Supersil色譜柱：ODS 25μm，4.6 mm×150 mm，柱號：E2913576；十萬分之一分析天平XS205(METTLER TOLRDO梅特勒-托利多公司)；DHG-9023A電熱恒溫谷風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)；XMTD-7000電熱恒溫水浴鍋(北京永光明醫療儀器有限公司)。

1.2 炮制方法

1.2.1 生何首烏片制備 取生鮮何首烏，除去雜質，洗凈，大小分檔，切厚片(1～2 cm)，備用。

1.2.2 黑豆汁制法[1]取黑豆250 g，加水適量，煮約4 h，熬汁約500 mL，豆渣再煮3 h，熬汁約125 mL，合并得黑豆汁約625 mL。(生鮮何首烏片500 g用黑豆汁125 mL)。

1.2.3 各何首烏炮制品的炮制方法 將生鮮何首烏片(各500 g)置帶蓋的燉盅中分別加入表1項下各復合輔料，拌勻，密閉，隔水共燉6 h，取出，60 ℃烘干，即得。

表1 不同復合輔料制備表

1.3 制何首烏水分測定 按照《中國藥典》2015版四部通則0832第二法，測定不同復合輔料制備的何首烏樣品的水分含量。

1.4 制何首烏二苯乙烯苷和游離蒽醌含量測定 按照《中國藥典》2015年版中制何首烏成分含量測定項下方法分別測定不同復合輔料制備的何首烏樣品中二苯乙烯苷、游離蒽醌(以大黃素和大黃素甲醚計)的含量。

2 結果

2.1 不同復合輔料制備的何首烏樣品的水分含量 不同復合輔料制備的何首烏樣品的水分含量在10.48%～11.50%之間，水分含量均未超過12%，符合《中國藥典》2015年版的要求。結果見表2。

表2 不同復合輔料制備的何首烏樣品的水分含量表

2.2 不同復合輔料制備的何首烏樣品中二苯乙烯苷含量的比較 不同復合輔料制備的何首烏樣品中，黑豆汁生姜汁制何首烏的二苯乙烯苷含量最高，黑豆汁米泔水制何首烏的二苯乙烯苷含量最低。不同復合輔料制備的何首烏樣品中二苯乙烯苷含量從高到低依次為黑豆汁生姜汁何首烏>黑豆汁制何首烏(對照)>黑豆汁熟地汁制何首烏>黑豆汁甘草汁制何首烏>黑豆汁米泔水制何首烏，結果見表3；各何首烏炮制品的二苯乙烯苷色譜圖如圖1所示。

圖1 各何首烏炮制品二苯乙烯苷和對照品色譜圖

表3 不同復合輔料制備的何首烏樣品中二苯乙烯苷含量的比較

2.3 不同復合輔料制備的制何首烏中游離蒽醌含量的比較 不同復合輔料制備的制何首烏中，黑豆汁生姜汁制何首烏的游離蒽醌含量最高，黑豆汁制何首烏(對照)的游離蒽醌含量最低。復合輔料制備的制何首烏中游離蒽醌含量從高到低依次為黑豆汁生姜汁何首烏>黑豆汁米泔水制何首烏≈黑豆汁甘草汁制何首烏>黑豆汁熟地汁制何首烏>黑豆汁制何首烏(對照)，結果見表4；各何首烏炮制品的游離蒽醌色譜圖如圖2所示。

表4 不同復合輔料制備的何首烏樣品中游離蒽醌含量的比較

圖2 各何首烏炮制品游離蒽醌和對照品色譜圖

3 討論

何首烏是一種常用的中藥材，目前,最新研究已從其中分離出二苯乙烯苷類、蒽醌類、黃酮類、磷脂類、苯丙素類等133種成分[4-5]；現代藥理研究認為[6-8]，二苯乙烯苷是何首烏保肝護肝的重要有效成分,結合蒽醌則具有瀉下作用；生何首烏經炮制后，二苯乙烯苷含量升高，保肝護肝作用增強，結合蒽醌含量則降低，轉變為游離蒽醌，導致瀉下作用減弱，故何首烏經炮制后可改變藥性、降低滑腸致瀉的副作用。2015年版《中國藥典》規定，制何首烏(黑豆汁制)按干燥品計算二苯乙烯苷含量不得低于0.7%；游離蒽醌以大黃素和大黃素甲醚的總量計，不得少于0.10%[1]。由本研究結果顯示，各何首烏炮制品中二苯乙烯苷含量均高于2015年版《中國藥典》制何首烏的含量要求，游離蒽醌含量則未達到2015年版《中國藥典》的要求。有研究表明，用鮮品直接加工炮制所得的樣品中二苯乙烯苷的含量要高于傳統加工炮制的，而游離蒽醌的含量則是鮮品直接炮制的明顯低于傳統加工炮制的[9-10]。

本研究中，用黑豆汁生姜汁所制得的何首烏中二苯乙烯苷和游離蒽醌的含量是最高的，分別是6.19%和0.04%，而用黑豆汁米泔水、黑豆汁甘草汁和黑豆汁熟地汁等復合輔料所制得的何首烏炮制品中二苯乙烯苷的含量均比單一的黑豆汁(對照)所制得的何首烏炮制品中二苯乙烯苷含量要低，游離蒽醌的含量則相反；說明用單一輔料炮制和用復合輔料炮制對何首烏有效成分的影響也不同，且不同輔料具有不同的藥理作用[11-13]；黑豆具有活血、利水、解毒、滋補等作用，用黑豆汁炮制后的何首烏能增強補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨的作用，同時能消除滑腸致瀉的副作用；生姜能發表散寒、止嘔開痰和解毒；米泔水有清熱、止煩渴、利小便、涼血、解毒等功效；甘草有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的作用；熟地具有滋陰補血、益精填髓的功效；用黑豆汁與米泔水、生姜汁、甘草汁、熟地汁組合成復合輔料炮制何首烏，對藥效成分的影響不同。劉亞蕾等[14]通過研究發現，米泔水能吸附何首烏中難溶于水的物質，用米泔水炮制何首烏的減毒效果最好，可以促進毒性成分降低或轉化以達到炮制減毒且保存藥效或增效目的；生姜汁制則可緩和藥物毒副作用、降逆止嘔[15],同時具有引藥歸經、協同增效等作用；用甘草汁炮制中藥可減毒或改變藥性[16]；熟地汁炮制藥材則有增強補益的作用[11-13]。

本研究結果顯示，所有輔料對何首烏二苯乙烯苷和游離蒽醌含量都有一定的影響，在實際應用中，可根據臨床需要，選擇合適的炮制輔料，以達到減毒增效的目的，同時，需要不斷傳承和挖掘傳統中藥炮制技術的寶貴經驗，采用現代科學技術揭示何首烏炮制的科學原理和機制，增加炮制輔料的質量標準，從而建立何首烏炮制質量評控方法和標準。