清熱化毒丸含量測定的研究

于遠洋，周 凌，康 凱，姜范成，胡景蓮

（大連市檢驗檢測認證技術服務中心，遼寧 大連 116021）

清熱化毒丸是由連翹,青黛等16味藥材組成的復方制劑。收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第二冊，具有消火化毒、消腫止痛之功效，臨床上可用于治療小兒身熱煩躁，咽喉腫痛等，原質量標準僅為顯微鑒別及鹽酸小檗堿、靛藍及靛玉紅的TLC定性鑒別，不夠全面。基于2015版《中國藥典》要求[1]，本實驗通過HPLC法測定連翹酯苷A、黃芩苷含量，為全面控制該制劑質量提供依據。

1 材 料

Waters 2695型高效液相色譜儀；Sartorius LE244S、BP211D②型(賽多利斯)電子天平；雙頻數控超聲波清洗器。藥材購自亳州市中正中藥材飲片有限公司，經大連市藥品檢驗所胡景蓮主任中藥師鑒定，為2015版《中國藥典》規定品種。黃芩苷、連翹酯苷A對照品購自中檢院。甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑為分析純；水為超純水。清熱化毒丸（某（遼寧）制藥有限責任公司；某股份有限公司制藥廠；本溪某制藥有限責任公司；吉林某制藥股份有限責任公司，丸重3 g）。

2 含量測定

2.1 連翹酯苷A HPLC定量測定[2]

2.1.1 色譜條件：Waters Symmetry C18色譜柱（4.6 mm x250 mm,5 μm）；乙腈-0.4%冰醋酸溶液(14：86)為流動相；檢測波長為330 nm。進樣量10 μl

2.1.2 對照品溶液制備：取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液。供試品溶液制備，取本品0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液。

2.1.3 方法學考察：按上述條件測定，以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程分別為：Y=14939.7233X-38736.1299 r=0.9998，結果表明，連翹酯苷A在0.0477～1.909 μg范圍內線性關系良好。精密度符合要求，峰面積RSD（n=6）為1.2%；方法重復性良好，含有量RSD（n=6）為0.13%；供試品溶液24小時內穩定性良好，峰面積RSD（n=6）為0.7%；平均加樣回收率為100.3%，RSD（n=6）為2.5%；分別用另外三種不同品牌色譜柱Agilent Extend-C18、Agilent Eclipse Plus-C18、Thermo BDS Hypersil-C18測定，分離效果良好，耐用性符合要求；方法專屬性強，圖1顯示陰性無干擾。

圖1 連翹酯苷A HPLC色譜圖

2.2 黃芩苷HPLC定量測定

2.2.1 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)為流動相；檢測波長：280 nm。色譜柱：Agilent Eclipse Plus-C18（4.6×250 mm 5μm）。進樣量10 μl。

2.2.2 對照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液。供試品溶液制備 取本品0.5 g，精密稱定，精密加入70%乙醇50 ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補充減失的重量，濾過，取續濾液。

2.2.3 方法學考察：按上述條件測定，以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，Y=37208.1137X+25386.7184 r=0.9999，結果表明，黃芩苷在0.0472～1.888 μg范圍內線性關系良好。精密度符合要求，峰面積RSD（n=6）為0.8%；方法重復性良好，含有量RSD（n=6）為0.3%；供試品溶液在24小時內穩定性良好，峰面積RSD（n=6）為0.7%；平均加樣回收率為96.9%，RSD（n=6）為0.5%；用另三種不同品牌色譜柱Agilent Extend-C18、Thermo GOLD aQ-C18、Waters Symmetry C18測定，分離效果良好，耐用性符合要求；方法專屬性強，圖2顯示陰性無干擾。

圖2 黃芩苷HPLC色譜圖

2.3 含量測定數據

按供試品溶液制法，對9批樣品進行測定，以《中國藥典》為依據，按干燥品折算，本品中連翹酯苷A理論含量約為0.12 mg/g，實測含量遠高于理論值。按樣品實測結果平均值70%制定限度，每1 g含連翹以連翹酯苷A計，不得少于1.5 mg；黃芩苷理論含量約為1.94 mg/g，由實測結果可見，樣品均達到理論值。考慮工業生產中的損失，以實測結果平均值70%制定限度，每1 g含黃芩以黃芩苷計，不得少于1.7 mg。

3 討 論

中藥質量標準的規范化是現代中藥發展的瓶頸之一[3]，我國現行中成藥標準中藥味的鑒別數量較少，并且含有量測定指標較少。本實驗通過HPLC法測定連翹酯苷A、黃芩苷含量，方法簡便、可靠、準確，可建議用于清熱化毒丸的質量控制。