YAP/TAZ在結腸癌中的臨床研究

黃 歡，揭志剛，胡 饒

（1.南昌大學醫學院研究生部，江西 南昌 330006；2.南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006；3.聯勤保障部隊908醫院，江西 南昌 330006）

結腸癌是一種常見的惡性腫瘤，近10余年來結腸癌發病率和死亡率持續升高，已位居全世界惡性腫瘤第三位[1]。隨著醫療技術的發展，結腸癌的診療雖然取得了一定進步，但是臨床表明，癌細胞的增殖、侵襲轉移仍是影響患者生存率的重要因素。

目前國內外研究證實YAP蛋白在胃癌及肝癌組織中呈高表達，TAZ蛋白在乳腺癌、肺癌及胃癌組織中呈高表達[2]，證明YAP/TAZ蛋白對胃癌、肺癌、乳腺癌以及肝癌的發生、發展呈促進作用。本次針對結腸癌的研究不但檢測了YAP/TAZ蛋白的表達，以證明其對結腸癌發生、發展呈促進作用，還檢測了癌癥干細胞中的CD44/CD24蛋白以及基質金屬蛋白酶家族中的MMP9/MMP2蛋白的表達，初步探討其作用機制，為結腸癌的臨床治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月～2019年12月聯勤保障部隊908醫院收治的30例行結腸癌根治術患者的病理組織標本，包括癌組織及癌旁組織（距離癌組織邊緣＞2 CM，HE 染色法未見癌細胞），免疫組織化學技術檢測病理標本中的YAP/TAZ，CD44/CD24、MMP9/MMP2蛋白的表達情況，收集結腸癌組織和癌旁組織中各蛋白的表達數據，并做統計學分析。

1.2 研究步驟

1.2.1 石蠟包埋

基本步驟包括：脫水、透明、浸蠟、包埋。

1.2.2 切片

病理組織經石蠟包埋后，視其大小，切除邊緣多余的部分，再開始切片。切片的厚度一般在4～6 μm，具體根據實驗要求而定。將載玻片進行編號，置入60℃恒溫箱內烤15～30分鐘，在30～40℃環境下放置過夜。

1.2.3 免疫組化染色

包括脫蠟、抗原修復、阻斷內源性過氧化物酶、正常血清封閉、孵育一抗、孵育二抗、DAB 顯色、復染細胞核、脫水透明封片等步驟。

在光學顯微鏡下進行觀察，并拍照。

1.3 統計學方法

使用軟件SPSS 20.0進行數據分析，使用卡方檢驗，對比得出P值＜0.05具有統計學意義。

2 結 果（見表1）

表1 各蛋白表達水平（%）

3 討 論

Hippo通路最早發現于黑腹果蠅，起初認為只在器官的形成發育、細胞更新等正常的生理過程中發揮作用，但根據國內外越來越多的研究證據表明，YAP和TAZ蛋白在哺乳動物中屬于同源蛋白，兩者結構有很大的相似性，同為Hippo信號通路下游效應分子，除了在上述的正常生理過程中發揮作用以外，在惡性腫瘤的發生、發展的過程中同樣扮演著重要的角色。研究發現Hippo通路作為調控細胞更新的關鍵樞紐，其核心是一個激酶級聯反應，在正常生理過程中，Hippo通路處于激活狀態時，會磷酸化YAP/TAZ蛋白，從而保持細胞的自我更新與凋亡之間的平衡，當Hippo通路失活時，去磷酸化的YAP/TAZ蛋白會打破這個平衡，促進細胞的過度增殖及抗凋亡，從而導致惡性腫瘤的發生[4],目前已知的，YAP/TAZ蛋白在乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤中呈過表達[5], 促進及加強了癌細胞的增殖、侵襲、轉移等能力[5]。

近些年來，癌癥干細胞學說是國內外研究的熱點。癌癥干細胞（CSC）與正常干細胞有著相同的特點，可以實現自我更新、進行不對稱細胞分化，從而可以誘導癌細胞抗凋亡、加速分化增殖等，目前已證實癌癥干細胞能出現在許多類型的癌癥[6]，其中也包括結腸癌，其最常見的標志物是CD44、CD24[7]。

基質金屬蛋白酶家族是一個大家族，因其需要通過鈣、鋅等金屬離子的輔助才能發揮作用而得名，MMPs家族成員的結構相似，都具有很強的細胞外基質、基底膜破壞功能[8]，可以幫助癌癥細胞突破對正常細胞進行侵襲的組織學屏障，促進惡性腫瘤的發生、發展[9]。MMP9/MMP2作為家族中的重要兩位成員，根據目前國內外相關研究表明MMP9/MMP2蛋白的表達對多數惡性腫瘤的發生、發展呈促進作用[10]。

綜上所述，Hippo 信號通路下YAP/TAZ蛋白在結腸癌的發生、發展過程中起著明顯的促進作用，其作用機制可能是通過調控癌癥干細胞中的CD44/CD24蛋白及基質金屬蛋白酶家族中的MMP9/MMP2 蛋白的表達來實現的。