多指標權重分析法結合正交試驗優選醋南五味子的工藝研究

孫 浩，羅 川，胡 雨

(1.合肥華潤神鹿藥業有限公司， 安徽 合肥 231202；2.安徽華潤金蟾藥業股份有限公司，安徽 淮北 235000 )

南五味子為華中五味子SchisandrasphenantheraRehd.et Wils. 的干燥成熟果實。味微酸，收斂固澀，益氣生津，補腎寧心。[1]南五味子的主要化學成分有木脂素、多糖、揮發油[2]等成分。其主要功能為收斂固澀，益氣生津，補腎寧心。[1]五味子酯甲是五味子木脂素的主要單體成分之一，具有較強的抗氧化功能及護肝活性[3～4]。南五味子臨床生用用于斂肺止咳，斂汗；醋炙以后，能增強其溫補作用。臨床常用醋五味子，一般采用醋蒸法進行加工炮制。[5]2015版《中國藥典》對醋南五味子炮制工藝的描述較簡單，缺少可控的工藝參數，導致醋南五味子的質量不一?，F在，關于醋南五味子炮制工藝研究的文獻[6～7]，多以五味子酯甲、多糖或總木脂素成分等為評價指標，缺少對醋南五味子外觀性狀的描述評價。而本研究以外觀性狀、標準湯劑出膏率及五味子酯甲為指標，采用L9(34)正交實驗設計，考察醋用量，蒸制時間，悶潤時間3個因素，優選醋南五味子的炮制工藝，以期可以為醋南五味子的標準化及產業化生產提供參考依據。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀Thermo Scientific Ultimate 3000色譜系統，包括四元梯度輸液泵(LPG-3400SDN型)、自動進樣器(WPS-3000SL)、色譜柱溫箱(TCC-3000SD)、二極管陣列紫外檢測器(DAD-3000)、Chromeleon 7 色譜管理系統；色譜柱(Kromasil 100-5 C18 ,5 μm,4.6×250 nm)、KQ-500E型超聲清洗儀、AT系列溶劑過濾器(0.22 μm)、DFY-300搖擺式粉碎機(林大機械有限公司)。

1.2 試劑

五味子酯甲(批號：111529-201706)、乙腈(色譜級)、甲醇(色譜級)、四氫呋喃(國藥集團化學試劑有限公司)、南五味子(批號：18042511)；本研究用的南五味子飲片購自協和成藥業飲片有限公司，經鑒定為：南五味子是華中五味子SchisandrasphenantheraRehd.et Wils. 的干燥成熟果實。

2 方法

2.1 五味子酯甲的含量測定

2.1.1 液相色譜條件 色譜柱(Kromasil 100-5 C18 ,5 μm,4.6×250 nm)，流動相：四氫呋喃-水(38:62)，檢測波長：254 nm；流速為 1.0 mL·min-1，柱溫：25℃，進樣量為 20 μL。理論塔板數以五味子酯甲峰計算應≥3000，色譜峰對稱性較好[1]。見圖1。

2.1.2 對照品溶液的制備 取五味子酯甲對照品2.015 mg，精密稱定，置于50 mL的容量瓶中，加甲醇配制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。[8]

2.1.3 樣品溶液的制備 取樣品粉末(過3#篩)約0.5 g，精密稱定，置白色具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補重，搖勻，過濾，取續濾液，即得[1]。

2.2 標準湯劑出膏率的測定

2.2.1 標湯制備參數考察 基于《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》(征求意見稿)制定醋南五味子標準湯劑實驗方案。[9]按照醋南五味子的藥性、功能主治及用藥部位(果實類)選擇煎煮參數，對加水量(倍數)的要求“煎煮開始時的用水量一般以浸過藥面2～5 cm為宜”進行考察，確定了醋南五味子標準湯劑加水量及煎煮參數，具體參數見表1。為遵循傳統煎煮方法，采用可實現煎煮火候的控制(“武火”煮沸，“文火”保持微沸至規定要求)的一種煎煮設備，選擇多功能液體加熱器(500W)煎藥砂鍋為研究的煎煮器具。

表1 醋南五味子標準湯劑參數

2.2.2 不同工藝醋南五味子標準湯劑的制備 取正交試驗表(表3)中各工藝醋南五味子樣品約100 g，置砂鍋中，加入800 mL純化水浸泡30 min，采用多功能液體加熱器(500 W)煎煮器具先武火煮沸，再文火煎煮30 min，400目濾布趁熱過濾，濾液至冰箱中迅速冷卻至室溫；藥渣再加600 mL純化水，武火煮沸后，再文火煎煮25 min，400目濾布趁熱過濾，濾液至冰箱中迅速冷卻至室溫，合并兩次濾液，稱取濾液重量[10]。

2.2.3出膏率測定 取合并水煎液約50 g，精密稱定，放于已恒定重量的蒸發皿中，置于水浴鍋上蒸干，放在105 ℃烘箱內干燥3 h，移至干燥器中，冷卻30 min，稱重，計算水煎液含固量，并根據水煎液總重量和飲片重量換算出膏率。出膏率=固體重( g) × 水煎液總重量(g) /[取樣量(g) × 飲片重量( g)]×100%

2.3 正交試驗

2.3.1 醋南五味子工藝的正交試驗設計 在單因素考察及有關參考文獻[5～7,11]的基礎上，利用L9(34) 正交設計，考察醋用量(A)、蒸制時間(B)、悶潤時間(C) 3個因素，以外觀性狀、標準湯劑出膏率及五味子酯甲為指標，優選醋南五味子的炮制工藝。各因素水平見表2。

表2 正交設計因素水平

2.3.2 外觀性狀的評分標準 2015版《中國藥典》及2005版《安徽省中藥飲片炮制規范》醋南五味子性狀項下描述：醋南五味子形如南五味子，表面棕黑色，油潤，稍有光澤。微有醋香氣[1,12]。本研究按照正交設計制備醋南五味子，參照2015版藥典及炮制規范確定評分：棕黑色，微有醋香氣，計10分；棕黑色，無醋香氣，計8分；黑色，微有醋香氣，計6分；黑色，無醋香氣，計4分。

2.3.3 綜合評分標準 為了更準確地反映醋南五味子炮制工藝中各因素對其質量的影響。本試驗以外觀性狀、標準湯劑出膏率及五味子酯甲為評價指標，用綜合評分法來評定[13]。五味子酯甲是南五味子飲片中的主要有效成分，也是2015版《中國藥典》規定的指標性成分，所以其權重系數擬定為0.6；外觀性狀的質量評價是傳統意義上中藥飲片的質量標準，是影響中藥飲片質量的重要因素，所以將其作為指標之一[13～14]；再者，中藥飲片一般是通過水煎煮服用，主要用其水溶性部位，故將標準湯劑出膏率作為醋南五味子工藝優選的評價指標之一是合理可行的，外觀性狀和標準湯劑出膏率的權重系數均定為0.2。外觀性狀的評分=(性狀的評分/ 9個樣品里最高性狀的評分)×2；五味子酯甲含量的加權評分=(五味子酯甲含量/ 9個樣品里五味子酯甲的最高含量) ×6；出膏率含量的加權評分=(出膏率含量/ 9個樣品里出膏率的最高含量) ×2。綜合的評分=外觀性狀的加權評分+五味子酯甲的加權評分+出膏率的加權評分[13]。實驗安排及實驗結果見下表3，方差分析詳見下表4。

表3 醋南五味子工藝的L9 (34) 正交試驗結果及分析

表4 綜合評分方差分析

由直觀分析可知，三個因素對醋南五味子炮制加工工藝的影響由大到小順序為 B >A > C。方差分析表明因素B對炮制工藝具有顯著性影響，A，C 因素對炮制工藝則無顯著性影響。[15]所以從直觀分析及方差分析結果綜合可知醋南五味子的最優加工炮制工藝為 A1B1C2，即取凈南五味子2 kg，加入20%的醋拌勻，悶潤1 h，置于蒸制容器中蒸制7 h，取出，60 ℃干燥即可，制備得醋南五味子樣品呈棕黑色，微有醋香氣。

2.4 驗證性試驗

取凈南五味子2 kg，按優選的工藝制備醋南五味子樣品3份，觀察飲片外觀性狀和測定出膏率及五味子酯甲含量，驗證結果見表5。

表5 驗證試驗結果

結果表明，采用該優選工藝制備的醋南五味子性狀、標準湯劑出膏率及五味子酯甲含量均較穩定，表明該炮制工藝較穩定、可控。即醋南五味子炮制的最優工藝為：取凈南五味子適量，加入20%的醋拌勻，悶潤1 h，置于蒸制容器中蒸制7 h，取出，60℃干燥即可[16～17]。

3 討論

醋南五味子蒸至表面棕黑色，油潤，稍有光澤，微有醋香氣時，其五味子酯甲含量較高，質量相對較佳，與醋南五味子傳統的外觀性狀表述相一致，表明外觀性狀是中藥材及中藥飲片質量評價的重要指標之一，是單一化學成分及有效部位不能取代的評價標準[14]。

孫靜等[5]以五味子酯甲含量為指標，優選出醋南五味子最佳炮制條件為加入30%醋，拌勻悶潤2 h，蒸制3 h，干燥即得。宋小妹等[6]篩選出醋南五味子最佳炮制工藝為加醋30%，悶潤1 h，蒸制3 h。孫華芳等[7]以總木脂素的含量為評價指標，優選出醋南五味子的最優加工工藝為加入20% 米醋，拌勻后，悶潤1 h，蒸制4 h，干燥即得。上述文獻優選所得工藝各不相同，該文以醋南五味子外觀性狀、標準湯劑的出膏率及指標性成分五味子酯甲等多指標代替單一指標來考察醋南五味子的炮制加工工藝，其結果更具科學性和適用性。

該試驗以外觀性狀、標準湯劑出膏率及五味子酯甲為綜合優選評價指標，采用多指標權重分析法結合正交試驗優選出的醋南五味子的炮制工藝穩定，重現性良好，可為醋南五味子的工業化生產提供一定的技術參考。此外，僅從外觀性狀、標準湯劑出膏率和化學成分角度來優選醋南五味子的炮制工藝，尚且不足。以后，還應引入藥動學及藥效學指標優選工藝，以便工藝更客觀實用。