醋酸氯己定原位緩釋凝膠的處方優選

董仁超，劉邦國

牙周炎是發病率高、危害性大、累及牙周支持組織的炎癥性、破壞性疾病，若得不到及時有效治療，不僅造成牙齒牙周的局部損害，還會引起或加重心腦血管疾病、糖尿病、肝炎、腎炎等身體其他重要器官和組織的病變。相比于口服抗生素全身性用藥，牙周袋局部給予緩釋藥物治療效果較好［1-5］，但是這類制劑多為國外制品，國內雖有但是效果差，筆者以不易產生耐藥性且抗菌譜廣的醋酸氯己定作為模型藥物，研制原位凝膠緩釋制劑處方優選，該制劑經兔牙周袋上緣無痛注入牙周袋，遇牙齦液會凝固形成凝膠態藥物儲庫，在牙周袋內長時間緩慢釋放藥物。實驗結果表明，該處方為理想的優選處方，報告如下。

1 材料與儀器

N-甲基吡咯烷酮（NMP，上海埃比化學試劑有限公司，批號：20131023）；醋酸氯己定（麥克林試劑有限公司，CAS 號：56-95-1）；單油酸甘油酯（GMO，濟南東潤精化科技有限公司）；乙基纖維素（EC，N100，國藥集團化學試劑有限公司）；醋酸氯己定原位凝膠（自制）；空白原位凝膠（自制）；蒸餾水（解放軍第971醫院藥劑科自制）。

紫外分光光度計（UV-757型，上海精密科學有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海申賢恒溫設備廠）；電子分析天平（FA1604型，上海衡平儀器儀表廠）；數顯水浴恒溫振蕩器（WHY-2型，常州普天儀器制造有限公司）；超聲清洗儀（SY2200-T型，上海聲源超聲波儀器設備有限公司）；離心機（LD5-2A型，北京醫用離心機廠）。

2 方法與結果

2.1原位凝膠體外釋放度測定方法的建立

2.1.1 供試液的制備 取醋酸氯己定原位凝膠50 mg，精密稱定，注入EP管中，加入4 ml釋放介質（蒸餾水），密閉，放入水浴恒溫振蕩器（37℃，振蕩頻率 55 次/min）中，分別于 4 h、8 h、10 h、12 h 將 EP管中釋放液取出，同時補加相應量的釋放介質，放回水浴恒溫振蕩器中。將取出的釋放介質以蒸餾水稀釋至適當濃度，即得。

2.1.2 對照品溶液的制備 取醋酸氯己定對照品10 mg，精密稱定，于燒杯中，加適量蒸餾水溶解，轉移至50 ml容量瓶中，用蒸餾水定容；精密量取2.0 ml于50 ml容量瓶中，以蒸餾水定容。

2.1.3 空白基質對照液的制備 精密稱取不含醋酸氯己定的空白原位凝膠0.050 g，按照“2.1.1”項下方法制備空白基質對照液。

2.1.4 測定波長的選擇 在200～400 nm波長下，以紫外可見分光光度儀分別以蒸餾水為對照測定空白基質對照液、供試液的紫外光譜圖。結果分別見圖 1、2。

圖1 空白基質對照液紫外光譜圖

圖2 供試液紫外光譜圖

由圖1、圖2可知，供試液中醋酸氯己定最大吸收波長為260 nm，空白基質對照液在260 nm處無吸收，故以釋放介質蒸餾水為空白對照測定釋放液中醋酸氯己定含量。

2.1.5 標準曲線 取10 mg醋酸氯己定對照品，精密稱定，于燒杯中，加入適量蒸餾水溶解并轉移到50 ml容量瓶中，用蒸餾水定容。分別移取0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 ml于 50 ml容量瓶中， 加水定容， 配成濃度為3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.2、8.0 μg/ml的溶液，在374.5 nm處測定其吸光度A。以濃度C（μg/ml）對吸收度A進行線性回歸。回歸方程：A=0.0818C+0.0096，r=0.9999。故醋酸氯己定在 3.2～8.0 μg/ml濃度范圍符合Beer定律，吸收度與濃度呈良好的線性關系。見表1、圖3。

圖3 醋酸氯己定對照品標準曲線

2.1.6 精密度試驗 取對照品溶液，在374.5 nm處測定吸光度，結果RSD=0.19%（n=5），表明精密度良好。

2.1.7 穩定性試驗 取“2.1.5”項下供試液，測定其中醋酸氯己定含量，以第一次測量值為0時值，每隔2 h依次測定。由表2可知供試液中醋酸氯己定在12 h內是穩定的。

2.1.8 加樣回收率試驗 制備不含藥的空白原位凝膠，照“2.1.3”項下方法進行釋放度試驗，獲得12 h釋放液即為空白基質對照液。分別精密量取“2.1.2”項下醋酸氯己定對照品溶液，3份不同量，于量瓶中，加入空白基質對照液稀釋并定容至刻度，過濾，棄去初濾液，留存續濾液。分別精密量取續濾液適量于量瓶中，用蒸餾水稀釋并定容至刻度，測定吸收度，計算回收率分別為101.2%、100.8%、99.6%；RSD（n=5）分別為 1.7%、0.85%、0.63%；回收率平均值為100.5%。方法準確度良好。

2.1.9 釋放度測定 按“2.1.1及2.1.3”項下方法進行釋放度測定并制備供試液，測定供試液中藥物濃度，計算釋放度。

2.2原位凝膠的制備取乙基纖維素、N-甲基吡咯烷酮、單油酸甘油酯適量，加熱使乙基纖維素溶解，冷卻至室溫后緩緩加入醋酸氯己定粉末，邊加邊攪拌，待攪拌均勻后加熱使其溶解即得。

2.3原位凝膠處方單因素考察

2.3.1 乙基纖維素對體外釋放的影響 將處方中單油酸甘油酯、藥物的濃度固定為0.2%、5%，設定乙基纖維素的系列濃度為19%、20%、21%。按照原位凝膠的制備方法，制備3批樣品，按照“2.1.1”項下方法考察所制凝膠的體外釋放情況。由圖4可知，乙基纖維素的濃度越高，原位凝膠中藥物釋放的越慢，反之，釋放的越快。

圖4見封三。

2.3.2 單油酸甘油酯對體外釋放的影響 將處方中乙基纖維素、藥物的濃度固定為20%、5%，設定單油酸甘油酯的系列濃度為0.2%、0.3%、0.4%。按照原位凝膠的制備方法，制備3批樣品，考察所制凝膠的體外釋放情況。由圖5可知，單油酸甘油酯濃度增大能延長原位凝膠中藥物釋放時間，反之，單油酸甘油酯濃度減小能縮短原位凝膠中藥物釋放時間。

表1 標準曲線數據表

表2 穩定性實驗結果

圖5見封三。

2.3.3 藥物濃度對體外釋放的影響 將處方中乙基纖維素、單油酸甘油酯劑的濃度固定為20%、0.2%，設定藥物的系列濃度為4%、5%、6%。按照原位凝膠的制備方法，制備3批樣品，考察所制凝膠的體外釋放情況。由圖6可知，藥物的濃度越低，原位凝膠中藥物釋放的越快，反之，釋放的越慢。

圖6見封三。

圖4 乙基纖維素的濃度對體外釋放的影響

圖5 單油酸甘油脂濃度對體外釋放的影響

圖6 藥物的濃度對體外釋放的影響

圖7 3批最優處方原位凝膠的累積釋放度

2.4正交實驗優選處方通過單一因素試驗結果，選擇乙基纖維素的（A）、單油酸甘油酯（B）、藥物（C）為考察因素，設定因素水平表（表3）。

表3 正交試驗因素-水平表

以醋酸氯己定原位緩釋凝膠累積釋放時間為考察指標，采用L9（34）正交表安排實驗，試驗設計及試驗結果 見表4。

表4 正交試驗設計表及結果

由直觀分析結果可知，各因素下各水平的實驗結果的極差分別為 A=0.407、B=0.687、C=1.160，由極差大小可知C因素的極差最大，其余次之，故各因素對考察指標影響大小次序為C＞B＞A；另外通過比較各因素下各水平的指標總和可知：A、B、C的第三水平均較好，從而得出各因素的最優水平組合：A3B3C3即單油酸甘油酯0.4%，乙基纖維素 21%，藥物 6%。以 SPSS 11.5統計軟件對實驗結果進行方差分析，結果上述3因素的P值均＜0.05，表明A、B、C三因素對試驗結果均有顯著性影響。

2.5處方與工藝的重復性考察按照最優處方和“2.2.1”項下的制備方法，制備三批醋酸氯己定原位凝膠，按照“2.2.5”項下方法測定其釋放度和累積釋放率，對處方和工藝的重現性進行考察。試驗結果見表 5，圖 7。

表5 3批最優處方原位凝膠的累積釋藥率（n=3）

圖7見封三。

由圖7可知，醋酸氯己定原位凝膠的處方和工藝的重現性良好。

3 討論

注射用原位凝膠用于治療牙周炎的優勢在于其具有較好的流動性，可以通過特制的注射器直接注射于牙周袋內，且具有較好的粘附性，直接以不規則的固態形式粘附于牙周袋內，增加了患者的順應性。

該實驗在制備醋酸氯己定原位凝膠時有兩種不同的方法加速溶解：一種是先用高溫使乙基纖維素、單油酸甘油酯和NMP溶解再降溫并加入藥物使其溶解；第二種是用處方中一部分NMP溶解乙基纖維素和單油酸甘油酯，同時另一部分溶解藥物，再將兩者混合。從時間角度來看后者制備效率較高，但是制備的樣品數量過少時宜采用第一種方法，以避免以第二種方法制備時中間品轉移帶來的損失和誤差。

在進行原位凝膠體外釋放度考察時，盡可能使不同樣品注入釋放液后形成的原位凝膠的形狀保持一致，以防止原位凝膠形狀及與釋放液的接觸面積不同引起釋放度的差異，準確考察出選定因素對釋放度的影響。

釋放度是緩控釋制劑的重要質量指標，決定著給藥間隔和給藥時間。原位凝膠注入兔牙周袋后，其中的有機溶劑NMP流出，牙齦液進入凝膠體，聚合物遇水沉淀形成固態藥物儲庫，其中的藥物緩慢釋放出來。有機溶劑NMP流出的同時帶出一部分藥物-突釋部分。

從上述原位凝膠的形成過程看，影響藥物釋放的因素有，有機溶劑的組成和性質、有機溶劑與輔料和藥物的相互作用、輔料的性質、形成的原位凝膠的孔隙率、微孔的彎曲程度等微觀結構。通過控制上述因素就能控制制劑的釋放度，從而得到理想的原位凝膠制劑。該實驗只對上述部分因素進行了考察，包含釋放機制的研究有待下一步進行。