DNA定量分析系統(tǒng)在宮頸病變中的應(yīng)用

梁海紅 王文普 沈瑩 張愛(ài)麗 張凱 張丹

摘要：目的? 探討細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)在宮頸癌及癌前病變?cè)\斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法? 選擇2019年7月～2020年4月在天津港口醫(yī)院門診就診并進(jìn)行檢查的1226例患者為研究對(duì)象，將其中采用DNA定量分析技術(shù)（包括DNA倍體分析和液基細(xì)胞學(xué)TCT技術(shù)）檢測(cè)的704例設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，行單一液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的522例設(shè)為對(duì)照組。以宮頸活檢病理結(jié)果為診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)兩組檢出陽(yáng)性率及實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)兩種方法的敏感性和特異性進(jìn)行比較。結(jié)果? 實(shí)驗(yàn)組共檢出陽(yáng)性患者129例（18.32%），活檢陽(yáng)性患者57例（58.16%）;對(duì)照組檢出陽(yáng)性患者72例（13.79%），活檢陽(yáng)性患者30例（41.67%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)DNA倍體分析以可見DNA倍體異常細(xì)胞，TCT檢查以LSIL及以上病變，病理診斷結(jié)果CINⅡ級(jí)及以上宮頸病變?yōu)樵u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)DNA倍體分析、TCT及兩種方法聯(lián)合應(yīng)用在篩查中的診斷敏感性和特異性分別為78.05%、70.18%和60.98%、89.47%和87.80%、91.22%。DNA倍體分析診斷敏感性高于TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;實(shí)驗(yàn)組內(nèi)兩種方法聯(lián)合應(yīng)用的診斷敏感性高于單獨(dú)應(yīng)用TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)對(duì)宮頸癌及癌前病變有較高的診斷敏感性，適合常規(guī)篩查及大規(guī)模普查。

關(guān)鍵詞：DNA倍體分析;液基細(xì)胞學(xué);癌前病變

中圖分類號(hào)：R737.33? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.15.052

文章編號(hào)：1006-1959（2020）15-0164-03

Abstract：Objective? To explore the application value of cellular DNA quantitative analysis system in the diagnosis of cervical cancer and precancerous lesions.Methods? A total of 1，226 patients who were examined in the outpatient clinic of Tianjin Port Hospital from July 2019 to April 2020 were selected as the research subjects， and DNA quantitative analysis techniques （including DNA ploidy analysis and liquid-based cytology TCT technology） were used for detection. Of 704 cases were set as the experimental group， and 522 cases with single liquid-based cytology were set as the control group. Using the pathological results of cervical biopsy as the diagnostic criteria， the positive rates of the two groups and the sensitivity and specificity of the two methods in the experimental group were compared.Results? A total of 129 positive patients （18.32%） were detected in the experimental group， 57 cases （58.16%） were positive for biopsy; 72 cases （13.79%） were positive for the control group， and 30 cases （41.67%） were positive for biopsy，the difference was statistically significant （P<0.05）. In the experimental group， DNA ploidy analysis was performed to detect abnormal DNA ploidy cells. TCT examination used LSIL and above lesions， and pathological diagnosis results were CIN grade II and above cervical lesions. DNA ploidy analysis， TCT and the combination of the two methods were used in screening the diagnostic sensitivity and specificity during the check were 78.05%， 70.18%， 60.98%， 89.47%， 87.80%， 91.22%， respectively. The diagnostic sensitivity of DNA ploidy analysis was higher than that of TCT，the difference was statistically significant （P<0.05）; the diagnostic sensitivity of the combination of the two methods in the experimental group was higher than that of TCT alone，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion? The cellular DNA quantitative analysis system has high diagnostic sensitivity for cervical cancer and precancerous lesions， and is suitable for routine screening and large-scale general investigation.

Key words：DNA ploidy analysis;Liquid-based cytology;Precancerous lesions

宮頸癌（cervical cancer）是婦科常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居全球第4位，2018年全球新增宮頸癌病例57.0萬(wàn)例，死亡31.1萬(wàn)例，分別占所有女性癌癥發(fā)病和死亡的6.6%和7.5%，宮頸癌標(biāo)化發(fā)病率為13.1/10萬(wàn)[1]。近年來(lái)，宮頸癌的發(fā)病率不斷上升，且診斷年齡越來(lái)越小[2]。WHO建議在世界范圍內(nèi)開展子宮頸癌篩查，通過(guò)簡(jiǎn)便無(wú)創(chuàng)的檢查技術(shù)進(jìn)行大規(guī)模的人群篩查，使許多宮頸癌及癌前病變得到早期防治[3]。本研究通過(guò)與單一液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行比較，探討細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)在宮頸癌及癌前病變檢測(cè)中的診斷價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2019年7月～2020年4月在天津港口醫(yī)院婦科門診就診并進(jìn)行宮頸細(xì)胞學(xué)檢查的婦女1226例為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)組704例，年齡26～67歲，平均年齡45歲;對(duì)照組522例，年齡28～78歲，平均年齡48歲。

1.2材料? 標(biāo)本收集瓶、宮頸刷、細(xì)胞固定劑、DNA染色劑、巴氏染液及DNA自動(dòng)檢測(cè)分析儀均由武漢蘭丁醫(yī)學(xué)高科技有限公司提供。

1.3方法? 實(shí)驗(yàn)組采用DNA定量分析，對(duì)照組采用單一液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。

1.3.1宮頸脫落細(xì)胞的采集? 窺陰器暴露宮頸，由專業(yè)婦科醫(yī)生用宮頸刷尖端伸入宮頸管內(nèi)，順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，取出宮頸刷，將刷頭迅速浸泡在樣本收集瓶的固定液中，擰緊瓶蓋，搖動(dòng)數(shù)次，然后貼上寫有病人信息的標(biāo)簽，送到病理科制片。

1.3.2制片? 實(shí)驗(yàn)組用DNA制片機(jī)制成薄層細(xì)胞學(xué)片2張，一張玻片行巴氏染色做TCT診斷及一張DNA Feulgen染色做DNA倍體分析。對(duì)照組應(yīng)用液基細(xì)胞制片系統(tǒng)制成薄層細(xì)胞學(xué)片1張，行巴氏染色做常規(guī)TCT診斷。所有巴氏染色片經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生閱片。

1.3.3活檢? 實(shí)驗(yàn)組中以檢出DNA異倍體或TCT陽(yáng)性的患者行陰道鏡檢查并取可疑病變活檢;對(duì)照組中以液基細(xì)胞學(xué)檢出陽(yáng)性患者行陰道鏡檢查并取可疑病變活檢。活檢病理切片由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師做出診斷。以活檢結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算兩組內(nèi)檢測(cè)陽(yáng)性率和實(shí)驗(yàn)組內(nèi)兩種方法的敏感性和特異性，并進(jìn)行比較分析。

1.4判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 DNA倍體分析? 經(jīng)Feulgen染色后的玻片由全自動(dòng)細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描處理。DNA倍體異常細(xì)胞指DNA含量在5C以上的細(xì)胞用N表示。①未見DNA倍體異常細(xì)胞：N=0;②少量DNA倍體異常細(xì)胞：N為0～3;③可見DNA倍體異常細(xì)胞：N為3～15;④可見大量DNA倍體異常細(xì)胞：N≥15;②～④為DNA倍體分析陽(yáng)性。

1.4.2 TCT檢查? 液基細(xì)胞學(xué)（TCT）診斷：根據(jù)2014年修訂的第3版TBS系統(tǒng)[4]進(jìn)行分級(jí)：①未見上皮內(nèi)病變和惡性病變（NILM）;②不能明確診斷的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-US）;③非典型鱗狀上皮細(xì)胞不除外高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（ASC-H）;④低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）;⑤高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）或原位癌（CIS）;⑥鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。②～⑥為TCT陽(yáng)性。

1.4.3宮頸活檢病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)? 病理學(xué)檢查結(jié)果分為：①良性;②宮頸鱗狀上皮上皮內(nèi)病變（CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ）;③宮頸癌。②③為宮頸活檢陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 應(yīng)用軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%。特異度=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%。

2結(jié)果

2.1兩組檢測(cè)的陽(yáng)性率比較? 實(shí)驗(yàn)組共檢出陽(yáng)性患者129例（18.32%），對(duì)照組檢出陽(yáng)性患者72例（13.79%）。兩組陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=4.48，P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組中98例行陰道鏡下活檢，檢出陽(yáng)性57例（58.16%），其中CINⅠ 16例，CINⅡ 24例，CINⅢ 16例，宮頸癌1例;對(duì)照組篩查陽(yáng)性者進(jìn)行陰道鏡活檢，檢出陽(yáng)性患者30例（41.67%），其中CINⅠ 7例，CINⅡ 8例，CINⅢ 14例，宮頸癌1例。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=4.52，P<0.05）。

2.2實(shí)驗(yàn)組內(nèi)DNA倍體分析與TCT檢測(cè)結(jié)果比較? 在98例活檢病例中，檢測(cè)出41例CINⅡ級(jí)及以上宮頸病變，將DNA倍體異常細(xì)胞數(shù)（N≥3）定為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，DNA倍體分析篩查CINⅡ及以上宮頸病變的診斷敏感性為78.05%，診斷特異性為70.18%。將LSIL及以上病變作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)TCT篩查CINⅡ級(jí)及以上宮頸病變的診斷敏感性為60.98%，診斷特異性為89.47%，見表1。

2.3實(shí)驗(yàn)組內(nèi)兩種方法聯(lián)合應(yīng)用與宮頸組織病理學(xué)診斷的關(guān)系? 將DNA倍體異常細(xì)胞數(shù)（N≥3）定為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，TCT將LSIL及以上病變作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，兩者聯(lián)合篩查CINⅡ及以上宮頸病變的診斷敏感性為87.80%，診斷特異性為91.22%。DNA倍體分析聯(lián)合應(yīng)用TCT與單獨(dú)應(yīng)用TCT檢測(cè)診斷敏感性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=9.09，P<0.05）;診斷特異性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;實(shí)驗(yàn)組內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用兩種方法診斷敏感性高于單獨(dú)應(yīng)用TCT檢測(cè)方法，見表2。

3討論

腫瘤的早期診斷與細(xì)胞學(xué)診斷技術(shù)密不可分。目前，宮頸癌及癌前病變的診斷方法主要靠細(xì)胞學(xué)診斷，包括傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)、液基細(xì)胞學(xué)和DNA倍體分析。傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)法篩查法由于受取材方法、涂片制作方法、染色方法及閱片水平等因素影響，導(dǎo)致其具有較高的假陰性率。液基超薄細(xì)胞學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)，使得細(xì)胞制片具有固定及時(shí)、細(xì)胞形態(tài)保存完好、數(shù)量適中、涂片薄且均勻、背景干凈等優(yōu)點(diǎn)，提高了閱片的陽(yáng)性率[5]，但這兩種方法均需有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生參與，且敏感度低。細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)可對(duì)涂片內(nèi)的所有細(xì)胞進(jìn)行定量分析檢測(cè)，客觀、準(zhǔn)確，能發(fā)現(xiàn)肉眼所不能觀察到的細(xì)微改變，顯著提高診斷的陽(yáng)性率，對(duì)宮頸癌的早診早治有至關(guān)重要的作用[6]。本研究中實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率高于對(duì)照組，且經(jīng)陰道鏡活檢進(jìn)一步確診，實(shí)驗(yàn)組活檢陽(yáng)性率高于對(duì)照組，可能與本研究對(duì)象為門診患者，多有癥狀有關(guān)。