控制性超促排卵黃體期患者血清孕酮、雌二醇及白細胞介素-1β水平對胚胎著床的影響*

陳宥藝,段海霞,安 靜,趙 靜△

1.西安市第四醫院生殖醫學中心(西安710004);2.西北婦女兒童醫院生殖婦科(西安710003)

在體外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的諸多影響因素中，胚胎著床是影響妊娠成功的主要限速步驟[1]。現階段，IVF-ET在促排卵、卵子采集、受精、胚胎培養等方面均取得了較大的進展，然而臨床著床率仍處于較低水平，子宮內膜容受性是影響胚胎著床的關鍵因素[2]。著床的關鍵在于同時具有著床能力的胚胎以及接受胚胎能力的子宮內膜，如何改善子宮內膜容受性已經成為生殖領域研究的焦點之一[3]。超促排卵在促使多卵泡發育，為IVF-ET提供更多可移植胚胎的同時，影響黃體期激素的分泌，導致黃體功能不足，同時使雌、孕激素分泌失衡，影響子宮內膜容受性，從而對胚胎著床存在一定影響[4]。孕酮(Progesterone，P)由卵巢黃體細胞分泌，可促進子宮內膜向分泌期轉化，并抑制子宮收縮，有利于胚胎植入。雌二醇(Estradiol，E2)是類固醇類激素，是諸多雌激素中生物活性較強的一種，可使肌層增厚、增加血運，但過高的雌激素會造成胚胎植入窗口期提前關閉，從而影響子宮內膜容受性。白細胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是與生殖領域較近的細胞因子，生物學活性廣泛，對多種器官中細胞的生長、發育、分化有促進作用，是胚胎著床與發育不可缺少的細胞因子[5]。本研究選取本院80例IVF-ET患者的臨床資料，回顧性分析超促排卵后黃體期P、E2及IL-1β水平，旨在判斷不同的激素水平對胚胎著床的影響，為臨床IVF-ET提供參考。

對象與方法

1 研究對象 選擇本院2018年1月至2019年5月80例IVF-ET患者，年齡23～40歲，平均(32.06±5.71)歲；促排周期數1～4次，平均(2.10±0.42)次；不孕因素：輸卵管因素52例，男方精子因素28例。病例納入標準：不孕原因為輸卵管因素或男方輕度少弱精子癥，經子宮輸卵管造影或腔鏡檢查及男方精液相關檢查證實；于本院接受IVF-ET治療；年齡23～40歲，基礎FSH<10 U/L，基礎竇卵泡數(AFC)>5個；進行身體健康評估，未合并有基礎疾病；經醫院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意。排除標準：子宮畸形或宮腔內占位性病變；多囊卵巢綜合征或重度子宮內膜異位癥；不明原因不孕；合并自身免疫性疾病；合并血栓病史；近3個月內使用過影響血清P、E2及IL-1β水平的藥物；夫婦雙方任意一方染色體異常；臨床資料不全。

2 治療方案 于前次月經第21天開始注射促性腺素釋放激素激動劑(Gn-RH-a)達必佳0.1 mg/d共10 d后，繼續給予4 d達必佳0.05 mg/d，次日通過陰道超聲監測(內膜<5 mm，無功能性囊腫)，激素水平達標(FSH 5 U/L，E2<50 pg/ml，LH<5 U/L)的患者給予促性腺激素(Gn)以促排卵，每日注射果納芬，依照卵泡發育狀態調整劑量，于卵泡中晚期酌情加用人絕經期促性腺激素(HMG)。當有2～3個卵泡直徑達17～18 mm左右時，停用 Gn，注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)，劑量為6000～10000 IU，34～36 h后經陰道超聲引導下無菌取卵，取卵后4～6 h進行體外受精，選擇優質胚胎，于取卵第3天后移植，肌注黃體酮(40 mg/d)進行黃體支持，移植后第7天監測P、E2及IL-1β水平，移植后第14 天檢測血清β-HCG水平，陽性者繼續黃體支持，于移植后28 d通過超聲檢查發現孕囊即為臨床妊娠，根據是否妊娠分為妊娠組與非妊娠組。

3 血清指標檢測 于移植后第7天采集靜脈血4 ml，3000 r/min條件下離心15 min，取血清待測。IL-1β檢測采用酶聯免疫吸附雙抗夾心法( ELRSA)，儀器為雷杜酶標儀，試劑來源于深圳市炬英生物科技有限公司，批內變異、批間變異均< 10%。血清P、E2含量采用化學發光法測定，試劑盒來源于美國Beckman公司，批內變異、批間變異均< 10%。

4 正常受精與優質胚胎評價標準 胚胎評價標準分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級[6]。①Ⅰ級：卵裂球形態規則、大小均勻、透明帶完整、折射性良好、細胞質均勻，無顆粒現象，碎片在0%～5%之間；②Ⅱ級：細胞形態稍有不規則，大小稍有不均勻，胞質中存在少量顆粒現象，碎片在10%～20%之間；③Ⅲ級：細胞形態明顯不規則，大小明顯不均勻，胞質顆粒現象，碎片在21%～50%之間；④Ⅳ級：細胞大小嚴重不均勻，胞質嚴重顆粒現象，碎片>50%。Ⅰ、Ⅱ級胚胎具有良好的著床能力，為優質胚胎，優質胚胎率=優質胚胎數/受精數× 100%。受精率=受精數/成熟卵數× 100%。

結 果

1 妊娠組與非妊娠組獲卵數、受精率、優質胚胎率比較 妊娠組獲卵數、受精率、優質胚胎率均高于非妊娠組(P<0.05)，見表1。

表1 妊娠組與非妊娠組獲卵數、受精卵、優質胚胎率比較

2 妊娠組與非妊娠組血清P、E2及IL-1β水平比較 妊娠組血清P、IL-1β含量以及P/E2比值高于非妊娠組(P<0.05)；妊娠組E2含量低于非妊娠組(P<0.05)。見表2。

表2 妊娠組與非妊娠組血清P、E2及IL-1β水平比較

3 黃體期血清P/E2值與胚胎著床的關系 黃體期血清P/E2值為300～400時妊娠率達到62.50%高于P/E2值<300時的妊娠率27.27%，高于P/E2值≥400時的妊娠率33.33%(P<0.05)，見表3。

表3 黃體期血清P/E2值與胚胎著床的關系

4 黃體期血清IL-1β含量與胚胎著床的關系 黃體期血清IL-1β含量≥80 pg/ml患者妊娠率達到64.52%，高于<80 pg/ml患者的22.45%(P<0.05),見表4。

表4 黃體期血清IL-1β含量與胚胎著床的關系

5 影響著床結果的單因素分析 以80例患者血清P、E2及IL-1β平均值作為截點，將患者血清P、E2、IL-1β含量大于平均值的納入高水平，將含量小于平均值者納入低水平，不同BMI指數、盆腔炎、痛經、胚胎移植個數著床情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)；不同年齡、移植胚胎級別、血清P、E2、IL-1β含量著床情況比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 影響著床結果的單因素分析

6 影響著床結果的Logistic回歸分析 將上述因素差異有統計學意義項納入多因素Logistic回歸模型，以著床結果作為因變量，以上述差異有統計學意義項作為自變量，并進行賦值：年齡(20～30歲=0,30～40歲=1)、移植胚胎級別(Ⅰ級=0,Ⅱ級=1)、血清P/E2(300～400=0，高<300或≥400=1)、血清IL-1β含量(<80 pg/ml=0，≥80 pg/ml=1)，Logisitic回歸分析顯示年齡、移植胚胎級別、血清P/E2、IL-1β是著床成功的影響因素,見表6。

表6 影響著床結果的Logistic回歸分析

討 論

經12個月以上有正常性生活未避孕而未妊娠，即為不孕癥。據統計全世界不孕癥發生率達到生育年齡女性的15%～20%，我國不孕癥發生率也達到10%～15%[7]。近年來，隨著社會形態改變以及社會和人文環境的變化，不孕癥發病率也出現逐年升高的趨勢，成為嚴重影響育齡期夫婦身心健康的重要問題之一[8]。目前國內外醫療狀態下，不孕癥的主要治療方法以輔助生殖技術為主，而在各類輔助生殖技術中，IVF-ET技術最常用[9]。受多種因素的影響，IVF-ET成功率處于30%～60%之間，著床成功率較低，成為困擾生殖專家的難題[10]。

IL-1β為激素樣肽類物質，具免疫調節活性，可在炎癥反應中遠距分泌作用于靶細胞[11]。近年來研究表明IL-1β和生殖之間關系密切，可促進卵泡發育成熟、誘發排卵、參與受精、促進胚胎發育、參與胚胎著床[12]。本研究中妊娠組黃體期IL-1β水平高于非妊娠組，IL-1β是著床成功的影響因素，當黃體期IL-1β水平超過80 pg/ml時，妊娠率較高。Leonardi等[13]研究結果顯示當IL-1α和IL-1β水平分別> 60 pg/ml、> 80 pg/ml時，預示胚胎種植能力增強，本研究結果與其一致。IL-1β促進卵細胞成熟、提高胚胎質量、提高著床率。

子宮內膜的容受性是胚胎著床成功的關鍵因素，而子宮內膜是雌、孕激素發揮作用最直接的靶器官。超促排卵周期中黃體期患者血清E2、P、P/E2值明顯增高。黃曉敏等[14]研究結果表明E2水平過高或P相對不足導致P/E2失調時，子宮內膜容受性受到影響，易導致胚胎著床失敗。吳瓊等[15]在雌激素研究中發現，小劑量E2可增強子宮內膜胚胎信息傳遞，但當劑量過大時，可抑制子宮內膜活化。本研究中妊娠組血清P含量高于非妊娠組，E2含量低于非妊娠組，P/E2比值是影響著床的獨立因素，與其研究結果一致，當P/E2值在300～400時，妊娠率最高，提示E2、P兩者協同作用，影響胚胎著床。

綜上所述，超排卵后黃體期血清P/E2比值為300～400，IL-1β水平高于80 pg/ml時著床成功的可能性更高，臨床上可根據患者血清指標給予黃體酮調節激素水平，增加著床成功率。