福建省泉州地區漢族人群TCF7L2 rs11196205基因多態性與T2DM的相關性研究

駱時木,葉宇宸,歐陽航,蔣燕成,張志珊（福建醫科大學附屬泉州第一醫院檢驗科,福建泉州 362000）

糖尿病(diabetes mellitus, DM)是目前嚴重威脅人類健康的主要慢性病，同時也是危害大眾健康的主要疾病，預計2035年患有2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）的人群將達到5.92 億[1]。轉錄因子7 類似物2（transcription factor 7 like 2，TCF7L2）基因位于人類第10 號染色體長臂25 區3帶上，全長215.9bq，具有17 個外顯子，編碼著一個高遷移率的轉錄因子TCF7L2(又名TCF-4）。該轉錄因子主要表達于人的胰島β 細胞和脂肪組織中，是Wnt 信號通路的重要組成部分，在β 細胞的功能調節中起中心作用[5]，影響脂代謝、胰島素分泌和胰島素抵抗[6]。研究顯示TCF7L2 基因與T2DM 相關[2-4]。北京LUO 等[7]做的東亞人群Meta分析證實TCF7L2 基因的rs7903146，rs11196205，rs12255372 以及rs290487 位點與T2DM 均顯著相關。但 關 于TCF7L2 rs11196205基因多態性與T2DM 的相關性的研究說法不一。本次研究旨在分析福建泉州地區漢族人群TCF7L2 rs11196205 多態性與T2DM 的相關性，以期為T2DM 的個體化診斷與治療提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象 本次的研究對象為福建醫科大學附屬泉州第一醫院臨床患者和健康體檢人群，共300例。其中健康對照組100 例中男性53 例，女性47 例，平均年齡53.35±10.96 歲；T2DM 組200 例中男性121 例，女性79 例，平均年齡57.73±11.76 歲。其診斷標準參照1999年世界衛生組織的糖尿病診斷標準和1999年10月我國糖尿病學會的中國人群糖尿病診斷標準。年齡入選對象主要為來自福建泉州地區的漢族人群，無血緣關系。排除肝臟疾病、腎病綜合征、甲狀腺或腎上腺疾病等影響血脂代謝疾病，且近1 個月內未使用降脂藥物。

1.2 儀器與試劑 HbAlc 檢測試劑盒，HA8180 糖基化血紅蛋白儀（日本愛科來公司）；生化測定試劑盒，AU5800 全自動生化儀（美國貝克曼公司）；全血DNA 提取試劑盒（美國Qiagen 公司）；引物合成和Taq 聚合酶[TaKaRa 寶生物工程（北京）有限公司]；PCR 擴增儀（德國Eppendorf 公司）；Gel Doc XK 凝膠成像儀（美國BIO-RAD 公司）。

1.3 方法 所有研究對象均禁食12 ～14 h 后，于次日清晨采肘靜脈血2 管。一管用EDTA-K3抗凝，采用高效液相色譜法檢測HbAlc 后，全血DNA 提取試劑盒進行 DNA 樣本的提取。BioTeke 濃度檢測儀檢測其DNA 濃度及純度，在NCBI 數據庫上下載目標SNP 位點上下500bp 的基因序列。采用引物設計軟件Primer premier5.0 設計下列引物：F：5’-TATTGTTGGGTCTTTAGATTGTC-3，R：5’-ATTTCGTTTGCCTGTTTTGA-3’。對DNA 樣品進行PCR 擴增，用3%的瓊脂糖凝膠檢測擴增產物。北京六合華大基因科技有限公司進行測序，Chromas 軟件分析測序結果。另一管促凝，完全凝固后2h 內以3 000 r/min 離心5min 分離血清，采用全自動生化分析儀測定血清中GLU，TC，TG，HDL-C，LDL-C，ApoA 和ApoB 等7 項生化指標水平。

1.4 統計學分析 采用SPSS18.0 軟件進行分析，所有計量資料用均數±標準差（±s）表示。對于符合正態分布的計量資料兩樣本的比較采用獨立樣本t 檢驗。計數資料采用四格表或R×C 表的卡方檢驗。基因頻率采用基因計數法計算。等位基因確認符合Hardy-Weinberg 平衡。 基因型和等位基因頻率的比較采用卡方（χ2）檢驗。以P ＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 TCF7L2 rs11196205基因測序 PCR擴增后TCF7L2 rs11196205 基因片段為407 bp，將其DNA測序結果與Gene Bank 參考序列對比。結果顯示rs11196205 位點存在兩種：GG 基因型和GC 基因型，未發現CC 基因型，見圖1。

圖1 TCF7L2 基因 rs11196205 位點

2.2 TCF7L2 rs11196205基因多態性與T2DM 的關聯分析 對照組、T2DM 組人群TCF7L2 基因rs11196205 位點多態性分布情況均符合 Hardy-Weinberg 平衡（P ＞0.05）。所研究的基因型頻數和預期的基因型頻數相符合，具有群體代表性（對 照 組χ2=0.222, P=0.637；T2DM 組χ2=0.023,P=0.879）。

T2DM 組GC 型基因分布頻率（3.0%）低于正常對照組（9.0%），差異有統計學意義（χ2=5.053，P=0.025）。T2DM 組C等位基因頻率（1.5%）低于正常對照組（4.5%），差異有統計學意義（χ2=4.923，P=0.027），見表1。TCF7L2基因rs11196205 基因型分布頻率在正常對照組和T2DM 組之間差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 TCF7L2 基因rs11196205 基因分布頻率[n(%)]

2.3 TCF7L2 rs11196205 不同基因型糖化血紅蛋白與生化指標水平對比 見表2。對照組與T2DM 組GG 和GC 不同基因型HbAlc 與8 種生化指標水平的結果比較，其中對照組GC 基因型HbAlc 水平低于GG 基因型，差異有統計學意義（P=0.031）。其余生化指標在不同基因型間的分布差異無統計學意義（P＞0.05）。同時，T2DM 組中GG 和GC 不同基因型間HbAlc 與生化指標水平差異均無統計學意義（P ＞0.05）。

表2 TCF7L2 基因rs11196205 不同基因型生化指標比較

2.4 T2DM 危險因素的二分類Logistic 回歸分析 見表3。將全部研究對象作為整體進行二分類Logistic 回歸分析，是否有2 型糖尿病（否為0，有為1）作為因變量（Y），其他指標作為自變量（X）。分析結果如下：BMI，HbAlc，GLU 是本研究對象中發生T2DM 的獨立危險因素，而rs11196205 基因型不是發生T2DM 的獨立危險因素。

表3 T2DM 危險因素 Logistic 回歸分析

3 討論

多項研究表明T2DM 的發病機理與遺傳、肥胖、胰島β 細胞功能紊亂[8]、炎癥[9]、氧化應激、腸道因素等多因素有關。在眾多因素中，遺傳在T2DM發生發展中起著重要作用。近年來，與T2DM 相關的基因多態性的研究成為熱點，其中TCF7L2 基因的研究最多。

本次研究以福建泉州地區漢族人群為研究對象，應用PCR 基因測序技術，對對照組和T2DM組TCF7L2 rs11196205 基因多態性分布進行分析。TCF7L2 基因rs11196205 位點共檢測到15 個GC 雜合型突變，突變率為5%(15/300)，C 等位基因頻率為2.5%（15/600）。張潔等[10]研究福建地區漢族人群rs11196205 位點C 等位基因頻率為1.4%，和我們的結果接近。

研究結果顯示T2DM 組GC 基因型及C 等位基因的分布頻率均低于對照組，提示GG 和GC 基因型在不同組間的分布存在顯著差異，且C 等位基因有可能降低T2DM 的患病風險。鐘愛麗[11]研究表明rs11196205 基因型與延邊地區漢族T2DM發病有較強相關性，與我們的結果一致。并推測C位點可能是T2DM 和高血壓的保護因子，可通過影響胰島素水平，抑制肥胖等途徑降低罹患T2DM和高血壓風險。張江峰等[12]研究發現該位點與重慶地區漢族人群T2DM 發病相關，但考慮到rs11196205 位點風險等位基因在中國人群中屬低頻分布，故其在中國人群T2DM 的發病過程中可能不起顯著作用。而國外GRAVAND 等[13]研究則認為伊朗西南部人群TCF7L2 rs11196205 多態性與T2DM 風險無關。

除了遺傳因素，T2DM 的發生發展還與其他多種因素相關。本研究Logistic 回歸結果顯示，BMI，HbAlc，GLU 是T2DM 的獨立危險因素，而rs11196205 基因型并不是發生T2DM 的獨立危險因素，需要其它因素的協同作用。

HUERTAS-VAZQUEZ 等[14]人研究 TCF7L2 基因 rs7903146，rs12255372 多態性對血脂水平的影響。結果顯示rs7903146，rs12255372 多態性可引起墨西哥及芬蘭人群血清三酰甘油水平的升高。國內趙曉宇等[15]報道在中國北方人群中 TCF7L2 rs11196218 AG 與血脂異常相關。朱暉等[16]發現安徽地區漢族人群rs11196205 和T2MD 相關，且基因多態性與糖代謝相關。本研究結果顯示正常對照組rs11196205 位點GC 基因型的HbAlc 水平低于GG 基因型，差異有統計學意義。因此我們推測TCF7L2 rs11196205 C 等位基因可能通過下調血糖降低T2DM 的患病風險。當然，考慮到本研究入組的標本量較少，可能存在抽樣誤差，我們將進一步擴大樣本進行分析。