血清ASM與GPx水平檢測與類風濕性關節炎膝關節病變的相關性研究

王 娟,馬飛艷, 樊 萍

(1.陜西省森工醫院檢驗科,西安 710300; 2.咸陽市婦幼保健院檢驗科,陜西咸陽 712000;3.咸陽市第一人民醫院檢驗科,陜西咸陽 712000)

類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis,RA) 是一種以關節滑囊組織增生及炎性細胞浸潤為特征的慢性自身免疫性疾病。研究發現，RA 病因比較復雜，如果早期診斷治療能緩解病情，降低致殘率[1]。近年來的研究表明，酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)和谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GPx)可能與RA 的發生發展有關[2-3]。本研究通過分析58 例RA 膝關節病變患者血清ASM 和GPx 水平的變化，旨在評價兩指標在RA 中的應用價值,并為RA 的診斷和治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2016年3月～2019年3月于咸陽市第一人民醫院、陜西省森工醫院和咸陽市婦幼保健院就診的58 例RA 膝關節病變患者作為研究對象。RA 確診均符合2010年中國風濕病學會修定的RA 診斷標準[4]。依據疾病活動評分28 (disease activity score 28,DAS28)將RA 患者分為緩解期組和活動期組。緩解期組納入25 例患者,男性8 例,女性17 例,平均年齡53.50±12.47 歲。活動期組納入33 例患者,男性11 例,女性22 例,平均年齡54.12±11.67 歲。排除標準：并發關節退行性病變、糖尿病、血友病、白血病及銀屑病等其他可引起關節病變的自身免疫性疾病患者。選擇30 例同期體檢健康者作為對照組,男性10 例,女性20 例,平均年齡52.33±11.39 歲。各組研究對象的年齡及性別比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。本研究經咸陽市第一人民醫院、陜西省森工醫院和咸陽市婦幼保健院醫學倫理委員會批準,并得到所有研究對象的知情同意。

1.2 試劑與儀器 ASM 試劑盒購于上海北滬生物科技有限公司，GPx 試劑由北京方程生物科技有限公司提供，抗環瓜氨酸抗體(anti-cyclic peptidecontaining citrulline,Anti-CCP)試劑由上海美康生物股份有限公司提供。類風濕因子(rheumatoid factor,RF)試劑由廣州科方生物技術股份有限公司提供。RF 與Anti-CCP 水平采用日立7600 全自動生化分析儀檢測，膝關節超聲檢查采用飛利浦IU22 型彩色多普勒超聲診斷儀,探頭頻率為12～18 MHz。

1.3 方法 采用酶聯免疫吸附法檢測血清ASM和GPx 水平，Anti-CCP 與RF 水平檢測采用乳膠增強免疫比濁法。應用超聲檢查評價RA 患者膝關節的病理變化，陽性判斷標準：Anti-CCP＞45 U/ml, RF＞15 IU/ml。

1.3.1 標本采集：所有研究對象于清晨空腹狀態被抽取靜脈血5ml，室溫靜置30min 后3 000r/min 離心10min，分離血清，于-80℃保存備用。

1.3.2 超聲檢查：檢查者取仰臥位，屈膝，充分暴露膝關節。應用超聲診斷儀在肌肉骨骼模式下測量髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度。

1.3.3 DAS28 評分[5]： 以28 個關節的疾病活動狀況進行計分,包括雙手掌指關節(10 個)，雙手近端指間關節(10 個)，雙腕關節(2 個)，雙肘關節(2個)，雙肩關節(2 個)，雙膝關節(2 個)。依據壓痛關節數、腫脹關節數及紅細胞沉降率計算DAS28評分。DAS28 ≤2.6 分的患者被納入緩解期組，DAS28＞2.6 分的患者被納入活動期組。

1.4 統計學分析 研究資料采用SPSS22.0 統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差表示。所有資料均呈正態分布。ASM，GPx，Anti-CCP 和RF 水平以及年齡、髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度的組間比較采用單因素方差分析。以上資料多組間的兩兩比較采用SNK-q 檢驗分析，性別的組間比較采用卡方檢驗，相關性分析采用Pearson 法。P ＜ 0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RA 患者血清RF 和Anti-CCP 水平分析 見表1。緩解期組和活動期組的RF 和Anti-CCP 水平與對照組比較明顯增高，活動期組的RF 和Anti-CCP水平與緩解期組比較明顯增高，差異均有統計學意義(P＜0.01)。

2.2 RA 患者超聲檢查分析 見表2。緩解期組和活動期組的髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度與對照組比較明顯增高，活動期組的髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度與緩解期組比較明顯增高，差異均 有統計學意義(P＜0.01)。

表1 RA 患者血清RF,Anti-CCP 水平 (±s)

表1 RA 患者血清RF,Anti-CCP 水平 (±s)

檢測指標 對照組(n=30) 緩解期組(n=25) 活動期組(n=33) F P RF(IU/ml) 6.39±2.16 48.23±5.37 113.89±13.56 64.33 0.000 Anti-CCP(U/ml) 12.23±2.73 83.58±16.72 154.63±27.91 53.21 0.000

表2 RA 患者超聲檢查分析(±s，cm)

表2 RA 患者超聲檢查分析(±s，cm)

檢測指標 對照組(n=30) 緩解期組(n=25) 活動期組(n=33) F P髕上囊滑膜厚度 0.11±0.02 0.30±0.07 0.53±0.13 99.15 0.000髕上囊積液深度 0.21±0.03 0.42±0.08 0.65±0.11 85.23 0.000

2.3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析 見表3。緩解期組和活動期組的GPx 水平與對照組比較顯著降低，活動期組的GPx 水平與緩解期組比較顯著降低，緩解期組和活動期組的ASM 水平與對照組比較顯著增高，活動期組ASM 水平與緩解期組比較顯著增高，差異均有統計學意義(P＜0.01)。

表3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析(±s)

表3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析(±s)

檢測指標 對照組(n=30) 緩解期組(n=25) 活動期組(n=33) F P ASM(nmol/L) 21.35±6.61 72.30±13.49 123.67±19.26 79.15 0.000 GPx(U/mL) 93.26±13.07 65.13±11.29 41.07±8.65 68.23 0.000

2.4 Pearson 線性相關分析 緩解期組和活動期組的GPx 水平分別與RF，Anti-CCP 水平、髕上囊滑膜厚度及髕上囊積液深度呈負相關性(r緩解期組=?0.832,?0.829,?0.813,?0.809，均P＜0.01；r活動期組=?0.851，?0.836，?0.827，?0.815， 均P＜0.01)。緩解期組和活動期組的ASM 水平分別與RF 和Anti-CCP 水平、髕上囊滑膜厚度及髕上囊積液深度有正相關性(r緩解期組=0.820，0.811，0.789，0.793，均P ＜0.0 1)，(r活動期組= 0.837，0.825，0.807，0.817，均P＜0.01)。

3 討論

研究發現，RA 的發病機制可能與機體的氧化應激反應有關。抗氧化能力減弱，會造成機體產生過量的氧自由基，進而破壞軟骨細胞，導致滑膜與骨質受損[3]。相關研究表明高頻超聲檢查能夠反映RA 患者關節的病理變化[6]。本研究結果顯示RA患者膝關節髕上囊滑膜厚度及髕上囊積液深度明顯高于對照組，其中活動期組增高更顯著。進一步的分析顯示RA 患者血清RF 和Anti-CCP 水平的變化趨勢與超聲檢查的結果相符。提示超聲檢查兩參數及RF，Anti-CCP 可作為RA 患者病情監測的常用指標。研究表明，GPx 可清除人體內過多的氧自由基。GPx 水平增高，會導致機體氧化應激反應增強[7]。ZHAO 等[3]建立小鼠RA 模型研究GPx 與RA 的相關性，研究顯示，小鼠血清GPx 水平顯著降低。應用鵝絨堿加氨基葡萄糖治療后血清GPx 水平明顯增高。DATALAY 等[8]的研究顯示RA 患者血液中性粒細胞中GPx 的活性明顯降低。應用甲氨蝶呤治療后GPx 水平明顯增高。本研究的分析結果顯示，GPx 水平與RF，Anti-CCP 水平、髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度呈負相關性。提示GPx 可能與RA 的病情進展有關。進一步研究顯示，RA 患者血清GPx 水平明顯降低，其中活動期組降低更顯著。提示GPx 可能與RA 的病理過程有關，且GPx 水平越低，RA 患者的疾病活動性越嚴重。

相關研究顯示，在小鼠單核巨噬細胞誘導的炎性反應中，ASM 的蛋白表達明顯增高。然而，在給予ASM 的抑制劑丙咪嗪治療后，ASM 的蛋白表達被顯著抑制[9]。BECKMANN 等[10]對小鼠關節炎實驗模型的研究顯示，抑制ASM 活性可減輕關節腫脹，降低關節腔內促炎細胞因子的水平。CHUNG 等[2]研究發現，RA 患者血清ASM 的活性顯著增高，接受特異性腫瘤壞死因子-α 阻斷治療后，患者血清ASM 活性顯著降低。提示ASM可能通過促進機體的炎性反應參與RA 的病理過程。本研究結果顯示RA 患者血清ASM 水平分別與RF，Anti-CCP 水平、髕上囊滑膜厚度和髕上囊積液深度呈正相關性。進一步研究顯示RA 患者血清ASM 水平明顯增高，其中活動期組增高更顯著。表明ASM 可能與RA 的病變進展有關，ASM 水平增高對RA 的病變進展有促進作用。

綜上所述，ASM 和GPx 與RA 的發生發展密切相關。檢測血清ASM 和GPx 水平可評價RA 的病情進展并為RA 的診治提供依據。