哮喘患者病程嚴重程度與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、血漿硫化氫的相關性分析

黃茂 蔡莎莎 李小波 張添威

[摘要] 目的 探討哮喘患者病程嚴重程度與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、血漿硫化氫（H2S）的相關性。 方法 選取我院2017年4月～2019年3月收治的急性發作期哮喘患者70例作為研究組，根據疾病診斷指南進行分度，輕度、中度和重度患者分別18、23、29例，選取同期進行體檢的健康人70例作為對照組，所有受試對象均進行誘導痰計數，計算嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比，并抽取血液測定血漿H2S水平，比較對照組和研究組以及研究組不同嚴重程度患者的誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平，對三個指標進行相關性分析。 結果 研究組患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組;隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低;哮喘患者血漿H2S與誘導痰嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比之間呈負相關;血漿H2S水平和疾病嚴重程度呈負相關，誘導痰嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比和疾病嚴重程度呈正相關。以上差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 哮喘患者誘導痰嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比升高，血漿H2S水平降低，隨著病程的逐漸加重，哮喘患者嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比會逐漸升高，血漿H2S水平將逐漸降低。

[關鍵詞] 哮喘;嗜酸性粒細胞;中性粒細胞;血漿硫化氫

[中圖分類號] R562? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）19-0010-04

Analysis on the correlation between severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide in the patients with asthma

HUANG Mao1? ?CAI Shasha2? ?LI Xiaobo1? ?ZHANG Tianwei1

1.Department of Respiratory and Critical Care Medicine， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between the severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide（H2S） in the patients with asthma. Methods 70 patients with acute attack of asthma who were admitted to our hospital from April 2017 to March 2019 were selected as study group. According to the disease diagnosis guide， the patients were divided into mild， moderate， and severe conditions， with 18， 23， and 29 patients， respectively. 70 healthy people who were selected for physical examination at the same time were selected as the control group. All subjects were given induced sputum counts to calculate the ratios of eosinophils and neutrophils， and the blood was collected to measure plasma H2S levels. The ratios of induced sputum eosinophils and neutrophils and plasma H2S levels were compared between the control group and between patients with different disease severity in the study group. Correlation analysis was performed on the three indices. Results The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the study group was significantly higher than that in the control group， and the plasma H2S level was significantly lower than that in the control group; as the degree of disease worsened， the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma was gradually increased， while the level of plasma H2S was gradually decreased;there was a negative correlation between plasma H2S level and the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma; there was a negative correlation between plasma H2S level and disease severity. There was a positive correlation between the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum and disease severity（P<0.05 for all）. Conclusion The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma is increased， and plasma H2S level is decreased. As the course of disease worsens， the ratio of eosinophils and neutrophils in the patients with asthma will gradually increase， and plasma H2S level will gradually decrease.

[Key words] Asthma; Eosinophils; Neutrophils; Plasma H2S

支氣管哮喘，即哮喘，是臨床中常見的慢性氣道炎癥疾病，有多種細胞參與，包括嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、巨噬細胞、肥大細胞等，其中，嗜酸性粒細胞和中性粒細胞的增加會導致患者氣道微血管通透性增加，進一步刺激上皮細胞釋放炎性因子，加重炎癥反應，同時會使得炎性細胞的募集進一步增加[1-3]。硫化氫（H2S）是體內含硫氨基酸代謝產生的氣體產物，近年來發現，其作為氣體信號分子，具有明顯的抑制炎癥作用，同時研究發現，通過外源性的H2S刺激能夠減輕哮喘患者的炎癥反應[4-5]。目前，關于血漿H2S和哮喘患者的各項炎癥指標的研究較多，但并未有明確研究對哮喘患者病程嚴重程度與炎性細胞、H2S之間的相關性進行探究，本研究旨在通過分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三項指標，對哮喘患者病程嚴重程度與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、H2S之間的相關性進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年4月～2019年3月收治的急性發作期哮喘患者70例作為研究組，根據《支氣管哮喘防治指南（2016年版）》[6]中的分度標準，將研究組患者按照急性發作期病情不同程度分為輕度、中度和重度，分別18、23、29例。納入標準：（1）患者符合《支氣管哮喘防治指南（2016年版）》關于急性發作期的診斷標準，且根據患者氣短情況、精神狀態、呼吸頻率等癥狀體征，將患者進行分度;（2）臨床資料完整的患者;（3）簽署研究知情同意書的患者。排除標準：（1）心、腎、肝、血液等系統存在嚴重疾病的患者;（2）合并存在呼吸道感染或其他免疫系統疾病的患者;（3）隨訪困難或失訪的患者。同時，選取于我院進行體檢的健康人70例作為對照組，簽署研究知情同意書。對照組和研究組以及研究組不同分度患者之間的一般臨床資料比較，差異無統計學意義，具有可比性。見表1、2。

1.2 方法

1.2.1 誘導痰細胞計數? 以0.9%氯化鈉7 mL+10%氯化鈉3 mL配置高滲鹽水，使受試對象霧化吸入，咳出誘導痰，每組標本均涂片8張，自然干燥后使用甲醇固定，每張涂片經1 mL Giemsa稀釋染液染色，后沖洗，自然干燥后在高倍鏡下進行計數，每張涂片至少計數4個視野中400個有核細胞，并計算其中嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比。

1.2.2 血漿H2S水平檢測? 在入組后抽取受試對象晨起空腹靜脈血4.0 mL，使用肝素抗凝，以4000 r/min離心10 min，存于-20℃冰箱保存，后進行統一的檢測。采用不同濃度的硫氫化鈉繪制標準曲線，將反應液SAPBⅡ與標準血液樣本以1：1的比例充分混勻，使用紫外可見分光光度法測定血漿H2S水平。

1.3 觀察指標

（1）比較研究組和對照組之間誘導痰中嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平。（2）比較研究組中不同程度急性發作期患者之間誘導痰中嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平。（3）血漿H2S與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比之間的相關性分析，使用Pearson積矩相關分析。（4）對影響患者疾病嚴重程度的因素進行相關性分析，使用Pearson積矩相關分析。

1.4 統計學方法

采用SPSS25.0軟件對數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，兩組計量資料比較采用獨立樣本t檢驗，多組計量資料比較采用單因素方差分析。使用Pearson積矩相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組和對照組之間誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平比較

研究組患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組（P<0.05）。見表3。

2.2 研究組中不同程度急性發作期患者之間誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平比較

隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低（P<0.05）。見表4。

2.3 影響患者疾病嚴重程度因素的相關性分析

血漿H2S水平和疾病嚴重程度呈負相關，誘導痰嗜酸性粒細胞占比、中性粒細胞占比和疾病嚴重程度呈正相關（P<0.01）。見表5。

2.4 血漿H2S與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比之間的相關性分析

哮喘患者血漿H2S與誘導痰嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比之間呈負相關（P<0.05）。見表6。

3 討論

哮喘是一種多種細胞組分參與的氣道慢性疾病，其發病機制尚不清楚，臨床中多通過肺功能檢查等常規手段監測疾病進展情況，但此類指標對氣道炎性反應水平反映較差，無法及時對病情作出評估[7-8]。H2S是一類內源性的氣體信號分子，在肺組織內表達較多，能夠舒張氣管和血管平滑肌，參與多種病理生理表現[9-10]。目前，關于血漿H2S和哮喘患者的各項炎癥指標相關性的研究較多，但并未有明確研究對哮喘患者病程嚴重程度與炎性細胞、H2S之間的相關性進行探究，本研究旨在通過分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三項指標，對哮喘患者病程嚴重程度與嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、H2S之間的相關性進行分析。

研究結果顯示，研究組患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比顯著高于對照組，血漿H2S水平顯著低于對照組（P<0.05），且隨著疾病程度加重，哮喘患者誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比逐漸升高，而血漿H2S水平逐漸降低（P<0.05）。誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比及血漿H2S水平的變化趨勢和既往研究一致[11-12]。研究指出，H2S在炎癥反應中的作用是較為復雜的，作為炎癥抑制因子，H2S能夠抑制中性白細胞的聚集，減輕由于炎癥介質導致的肺水腫和肺毛細血管通透性增高，具有明顯的抑制炎癥反應的作用，同時通過較少丙二醛的生成，H2S具有一定的抗氧化作用，減輕機體氧化應激反應的發生[13-14]。本次研究中對H2S水平和誘導痰嗜酸性粒細胞和中性粒細胞占比進行了相關性分析，結果顯示，哮喘患者血漿H2S與誘導痰嗜酸性粒細胞、中性粒細胞占比之間呈負相關（r=-0.614、-0.873，P<0.05），與既往的研究結果一致[15-18]，同時也說明H2S在哮喘的發生發展中存在明顯的抗炎作用。同時結果顯示，血漿H2S水平和疾病嚴重程度呈負相關，誘導痰嗜酸性粒細胞占比、中性粒細胞占比和疾病嚴重程度呈正相關（P<0.05）。隨著哮喘的逐漸加重，中性粒細胞的募集明顯增加，這可能是由于H2S水平降低等多種因素導致的，進而使得各類促炎因子分泌不斷增加，加重氣道的炎癥反應，同時哮喘發作加重時，氣道內的胱硫醚-γ-裂解酶活性會明顯下降，進而導致H2S水平降低，發生上述反應[19-20]。因此，哮喘患者病程嚴重程度不僅受到H2S水平的影響，同時隨著病程的加重，H2S水平也會隨之發生改變，而嗜酸性粒細胞和中性粒細胞作為哮喘發作的標志性炎性細胞，會隨著病情的加重，占比逐漸升高，這可能和氣道重塑以及高反應性相關，同時H2S也對細胞活性有著重要的影響。

綜上所述，和正常人相比，哮喘患者誘導痰嗜酸性粒細胞占比、中性粒細胞占比升高，血漿H2S水平將降低，同時隨著疾病病程的逐漸加重，哮喘患者的嗜酸性粒細胞占比、中性粒細胞占比會逐漸升高，血漿H2S水平將逐漸降低，且三個指標間存在相關性。

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（收稿日期：2020-05-27）