HPLC-MS/MS法同時測定水中聯苯肼酯和乙螨唑殘留量

□ 魏杰 謝源 楊浪 黃玉貴（通信作者） 貴州健安德科技有限公司

□ 廖朝選（通信作者） 貴州省分析測試研究院

聯苯肼酯（bifenazate）和乙螨唑（etoxazole）分別屬于聯苯肼類及2,4-二苯基噁唑衍生物類選擇性殺螨[1-2]，對螨類均有優異的活性，常被混配或搭配輪換應用于柑橘全爪螨等害螨的防治[3-4]。由于兩種農藥在田間的大量應用，經雨水沖刷、土壤淋溶等進入水體，可能造成殘留風險。因此，建立同時測定兩種農藥的檢測方法十分必要。當前，對于兩種農藥的檢測分析，已有高效液相色譜法的相關研究報道[2，5]，但由于其在水中的殘留量較低，導致該方法無法滿足快速或痕量檢測的要求。液相色譜-串聯質譜聯用法是農藥痕量分析的主要方法，張月等、王蒙岑等[1，6]分別使用相關方法對木瓜中聯苯肼酯和柑橘與土壤中乙螨唑的殘留量進行分析。針對聯苯肼酯和乙螨唑的同時分析，潘靜等[7]建立了40%聯苯肼酯?乙螨唑懸浮劑的高效液相色譜分析方法。但是，并未見到采用液相色譜-串聯質譜法同時分析兩種農藥在水中殘留的相關報道。農藥進入水體可能產生水生態暴露風險，該風險程度與殘留量有關。因此，本試驗以甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）為流動相所建立的快速、簡單、準確的液相色譜-串聯質譜法可用于兩種農藥在水中的殘留分析。

表1 MRM離子采集參數

1 試驗部分

1.1 儀器與試材

液相色譜-串聯質譜聯用儀：Agilent 1290-6470A，美國安捷倫科技有限公司；色譜柱：Eclipse Plus-C18 50×2.1mm，1.8μm；電子天平：XSE105DU，梅特勒-托利多儀器（中國）有限公司，0.0001g；離心機：LD5-10低速離心機。

聯苯肼酯標準品：質量分數ω=97.5%，Dr.Ehrenstorfer；乙螨唑標準品：質量分數ω=99%，Dr.Ehrenstorfer；甲醇：色譜純，默克股份有限公司；甲酸：HPLC級，天津市科密歐化學試劑有限公司；去離子水：經美國Milli-Q純水機制備，電阻率為18.2MΩ/cm。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的制備

稱取0.0103g聯苯肼酯標準品和0.0102g乙螨唑標準品置于稱量瓶中，用甲醇少量多次溶解后，將其分別定量轉入100mL容量瓶中，定容至刻度線，搖勻后得到100.4mg/L（聯苯肼酯）和101.0mg/L（乙螨唑）的標準儲備液。然后，分別量取3.0mL聯苯肼酯標準儲備液和1.0mL乙螨唑標準儲備液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋為聯苯肼酯和乙螨唑分別為3.0、1.0mg/L的混合標準儲備液。之后，吸取不同體積的混合標準儲備液，用甲醇依次制備聯苯肼酯濃度為3.0、6.0、15.0、30.0、75.0、150.0μg/L，乙螨唑濃度為 1.0、2.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/L的混合標準溶液，待測。

1.2.2 加標樣液制備

以曝氣生態水為基質，分別向其中添加混合標準溶液，制備得到聯苯肼酯（乙螨唑）濃度為3.0（1.0）、15.0（5.0）μg/L的加標樣液。取加標樣液10mL，以4000r/min離心5min后經0.25μm濾膜過濾，待測。

1.2.3 儀器操作條件

1.2.3.1 HPLC操作條件

進樣體積：2μL； 流 速：0.3mL/min； 柱 溫：25℃；保留時間：聯苯肼酯0.56min、乙螨唑1.01min。

1.2.3.2 MSD操作條件

離子源：AJSESI源，正離子模式；離子源參數：干燥氣，N2；干燥氣溫度，250℃；干燥氣流速，5L/min；鞘氣：N2；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：11L/min；霧化器壓力（Nebulizer）：45psi；噴嘴電壓：500V；毛細管電壓（Capillary）：3500V。監測模式：MRM，MRM離子采集參數如表1所示。

1.3 樣品測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩定，且相鄰2次標樣溶液的峰面積相對變化＜1.5%后對樣品進行測定。

2 結果與討論

2.1 方法選擇性

將空白基質樣品、混合標準溶液（聯苯肼酯3.0μg/L、乙螨唑1.0μg/L）分別進行測定分析，在儀器最高靈敏度下空白樣品無可見干擾；聯苯肼酯和乙螨唑可實現同時監測，標準樣品的保留時間分別為0.56、1.01min，通過提取特征離子后，無互相干擾現象。兩種農藥的標準樣品色譜圖見圖1。

2.2 線性相關性與檢出限、定量限

將制備的系列標準溶液在設定的分析方法下進行測定，以聯苯肼酯或乙螨唑的質量濃度為橫坐標（x），響應的峰面積為縱坐標（y）進行線性擬合，得到聯苯肼酯和乙螨唑的標準曲線（見圖2）。結果表明，兩種農藥在一定質量濃度范圍內，即聯苯肼酯3.0～150.0μg/L、乙螨唑1.0～150.0μg/L具有良好的線性關系。回歸方程為聯苯肼酯y=-37.9573+57.7016x，r2=0.9999；乙螨唑y=397.562x+204.957，r2=0.9997。通過信/噪比（S/N）=3，確定聯苯肼酯和乙螨唑的檢出限為7.9×10-5、1.2×10-5mg/L； 通 過 信 /噪 比（S/N）=10，確定聯苯肼酯和乙螨唑的定量限為2.6×10-4、3.9×10-5mg/L。聯苯肼酯和乙螨唑的標準曲線見圖2。

圖1 聯苯肼酯（a）和乙螨唑（b）的標準色譜圖

2.3 方法的回收率

取水樣加標樣品分別按上述色譜操作條件進行測定，計算回收率，確定方法的準確度，結果見表2。當聯苯肼酯的添加濃度為3.0μg或15.0μg時，回收率在98.67%～103.33%，平均回收率為101.56%，變異系數為1.78%；當乙螨唑的添加濃度為1.0μg或5.0μg時，回收率在97.50%～104.40%，平均回收率為100.28%，變異系數為2.65%。由此可知，該方法準確度良好。

3 結論

本文使用高效液相色譜-串聯質譜建立了同時測定聯苯肼酯和乙螨唑的分析方法。在甲醇-0.1%甲酸水溶液（V/V=90︰10）作為流動相下，聯苯肼酯、乙螨唑分別在 3.0～150.0μg/L和 1.0～50.0μg/L范圍內具有良好的線性關系，說明該方法的準確度良好，操作簡單、快速，可同時分析水中聯苯肼酯和乙螨唑的殘留量。

表2 回收率測定

圖2 聯苯肼酯和乙螨唑的標準曲線