誘導痰細胞分類在嗜酸細胞性支氣管炎診斷和治療中的應用

王 斌 胡明冬，2 徐 靜 張 椿 陳華萍 王關嵩 徐 智 李 琦

目前，我國慢性咳嗽的常見病因主要有咳嗽變異性哮喘、嗜酸粒細胞性支氣管炎(eosinohilic bmnchitis, EB)、上氣道咳嗽綜合征、胃食管反流性咳嗽和變應性咳嗽[1-2]，其中在一項多中心、前瞻性的研究中顯示慢性咳嗽中EB患病率為17.2%，僅次于咳嗽變異性哮喘和上氣道咳嗽綜合征[3]。EB于1989年由Gibson等第一次報道，其主要臨床表現為慢性刺激性干咳或咳少許黏性痰，無氣道高反應性，肺功能和峰流速變異率均正常，僅以誘導痰嗜酸性粒細胞增多為臨床特征，EB患者對吸入糖皮質激素(ICS)療效較好[4]。可見，在EB的診斷中，誘導痰細胞學分類是一項至關重要檢測方法。因此，本文利用誘導痰細胞分類檢測技術分析了慢性咳嗽中EB的患病率，并探索該檢查在EB治療過程的監測作用，報道如下。

資料與方法

一、研究對象

收集2018年3月至2018年12月陸軍(第三)軍醫大學第二附屬醫院呼吸科門診慢性咳嗽患者239例，年齡(46.36±13.13)歲，男性142例(59.4%)，女性97例(40.6%)。依據EB診斷標準，分為非EB組和EB組。觀察兩組患者誘導痰中細胞分類情況；進一步分析EB組治療8周后誘導痰中細胞分類改變情況。納入標準：慢性咳嗽患者依據2018版《咳嗽的診斷與治療指南》[5]：咳嗽時間≥8周，X線胸片、 CT影像均正常的門診患者；EB患者診斷標準：①無氣道高反應性，肺功能檢查、PEF日平均變異率正常；②痰細胞學檢查嗜酸粒細胞比例大于2.5%；③排除其他嗜酸性粒細胞增多的疾病；④ 吸入或口服糖皮質激素治療有效。排除標準：①合并其他肺部疾病及惡性腫瘤的患者；②就診前一個月服用過激素的患者。

二、研究方法

1. 痰誘導： 痰誘導參照中華醫學會呼吸病學分會推薦的方法進行[6]：利用3～5%的高滲鹽水對患者進行高頻霧化誘導咳痰。

2. 細胞分類

細胞分類處理：①待患者誘導咳痰后，挑取粘稠或有痰栓的部分于4 ml的EP管內進行稱量，然后加入0.1%DTT于4 ml刻度線；②將盛有痰液的EP放置于37 ℃的水浴鍋內進行消化，期間不間斷搖勻EP；③待痰液完全消化后，吸取10 μl痰細胞懸液充池于牛鮑計數板內，靜止3～5 min，鏡下計算計數板四個角內16個大方格中細胞的平均值；④將剩余細胞懸液進行離心，2 000 r/min，5 min，離心后直接涂片；⑤將涂片烤干后進行瑞氏-姬姆薩染色3 min，沖洗染液后烤干涂片；⑥油鏡下計數各類200個白細胞，并計算各類白細胞百分比。細胞分類值參考前期的研究結果[7]，以嗜酸細胞百分比大于1%，中性粒細胞百分比大于65%為升高。

3. EB患者治療： 按照咳嗽指南，吸入ICS二丙酸倍氯米松(每次250 μg)或等效劑量的吸入激素，2次/日，連續治療8周以上，對夜間咳嗽癥狀嚴重者，聯用口服潑尼松，每天20 mg，持續3～5 d[5]。

三、統計學處理

結 果

一、患者基本情況

收集239例慢性咳嗽中，有121例以嗜酸細胞百分比升高(EOS%>1%)，超過正常值范圍，占50.6%。其次，239例慢性咳嗽患者中，診斷為的EB患者(EB組)23例，占9.3%，其中男性14例，女性9例，年齡(46.84±13.13)歲；非EB患者(非EB組)216例，占90.7%，其中男性128例，女性88例，年齡(47.12±15.23)歲。兩組患者在性別比例、年齡均無統計學差異(P>0.05)。

二、EB組與非EB組患者誘導痰細胞分類比較

分析非EB組與EB組誘導痰細胞分類結果，發現非EB組嗜酸細胞百分比為4.56%，較正常值升高；EB組嗜酸細胞百分比為13.85%，較非EB組有顯著增多(P<0.05)，兩組間細胞總數、中性粒細胞、淋巴細胞、單核巨噬細胞均在正常范圍之內，差異均無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 非EB組與EB患者誘導痰細胞分類比較

三、EB患者治療前后誘導痰中細胞分類變化

為進一步探索誘導痰細胞分類在EB治療過程中的作用，本文觀察了23例EB患者治療8周后誘導痰中細胞分類變化情況，結果顯示，經治療后，患者誘導痰中嗜酸細胞百分比由13.85%顯著降低為2.52%(P<0.05)；中性粒細胞、淋巴細胞、單核巨噬細胞經治療后有一定的增加，但變化無顯著差異(P>0.05)，見表2。從直觀圖中亦可觀察到治療后鏡下EB患者誘導痰中胞漿紅色的嗜酸細胞顯著的增多，治療后嗜酸細胞顯著的減少，見圖1。

表2 EB患者治療前后誘導痰中細胞分類變化

圖1 EB患者治療前后誘導痰細胞變化；注：EOS：嗜酸細胞；NEU：中性粒細胞；MAC：單核巨噬細胞

討 論

EB是引起慢性咳嗽的重要原因，其發病與患者吸入變應原以及職業暴露密切相關，其氣道炎癥類型與哮喘相似，為一種嗜酸細胞性炎癥[8-10]。但其與哮喘存在不同之處，由于EB患者的氣道炎癥僅局限于中心氣道黏膜層，其分泌的炎性介質對黏膜下層的平滑肌的作用較弱，故EB患者不出現氣道高反應[11-12]。目前EB的診斷主要依據誘導痰細胞分類檢查，國外采用Gibson的研究結果，即誘導痰嗜酸細胞>3%作為EB診斷標準，在我國據2018版咳嗽基層診療指南， 以痰嗜酸粒細胞比例≥2.5%為診斷標準，本文以國內指南為判斷標準。本文結果發現50.6%慢性咳嗽患者誘導痰中嗜酸細胞性比例升高，9.3%患者被診斷為EB，這與既往文獻報道EB患者占發病率占慢性咳嗽的10%～20%結果相一致，提示在慢性咳嗽的診治須提高對EB的認識，同時也表明誘導痰細胞分類檢查在EB診斷中的發揮重要作用[13]。

誘導痰細胞檢查作為被公認診斷EB的標準，其診斷的靈敏度和特異性均較高。在羅煒等[14]研究中發現，EB患者痰中嗜酸細胞陽離子蛋白(ECP)有顯著增加，表明ECP亦可作為診斷EB的依據，但是其操作繁瑣，且檢測過程受人為干擾因素較多，目前在臨床開展較少。此外，呼出一氧化氮(FeNO)也可反應氣道嗜酸性炎癥，檢測方法簡便、快速[15-18]。前期研究也證實其與誘導痰中嗜酸細胞呈正相關(相關系數為0.701)。資料顯示FeNO診斷EB敏感性較低，僅有63%[19-21]。在Desai等[22]的研究中還發現在未用ICS治療的EB患者中FeNO與痰中嗜酸粒細胞呈正相關，但經ICS治療二者相關性顯著減弱，進一步明確了誘導痰細胞檢查在EB診治中的地位。

2018版咳嗽診療指南明確EB的治療方案，本研究分析的EB患者經8周治療后，發現患者誘導痰中嗜酸細胞顯著減少，由治療前13.85%降低為2.52%，表明誘導痰細胞檢查是EB的治療過程有較好的監測指標[23-25]。誘導痰細胞檢查技術具有無創、安全、快速、重復性好等優點，其與支氣管肺泡灌洗液、ECP、FeNO的檢測結果亦基本一致，且較血液中嗜酸性粒細胞更能準確、靈敏、直觀地反應炎癥改變情況[26-27]。因此，誘導痰細胞檢查技術可廣泛應用于臨床，為EB的診療，以及慢性咳嗽的病因鑒別，甚至肺部疾病的診治提供指導。