血漿miR-144-5p水平在動(dòng)脈粥樣硬化診斷中的臨床意義

畢靜 白曉雪 劉方方

(1湖北省陽(yáng)新縣人民醫(yī)院心內(nèi)科，湖北 陽(yáng)新 435200;2吉林大學(xué)第一醫(yī)院干部病房;3吉林市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種慢性進(jìn)行性疾病，特征在于脂質(zhì)和纖維成分的積累和沉積及導(dǎo)致病變發(fā)展的炎癥反應(yīng)〔1〕。高脂血癥、高血糖癥、高血壓和炎癥引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后，大中型動(dòng)脈的內(nèi)膜內(nèi)會(huì)發(fā)生病變。AS病變發(fā)展的最早臨床標(biāo)志是充滿脂質(zhì)的巨噬細(xì)胞(稱為泡沫細(xì)胞)聚集，形成“脂肪條紋”。微小RNA(miRNA)是哺乳動(dòng)物內(nèi)源性高度保守的短鏈非編碼RNA，與炎癥、腫瘤、干細(xì)胞分化等多種生命進(jìn)程有著密切的聯(lián)系，正在成為多種疾病重要的臨床生物標(biāo)志物和治療的靶標(biāo)〔2〕。本研究探討血漿miR-144-5p在AS診斷中臨床意義。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 吉林市中心醫(yī)院募集2015～2019年84例無(wú)癥狀A(yù)S患者和72名健康對(duì)照者，均無(wú)吸煙史。根據(jù)歐洲高血壓學(xué)會(huì)和歐洲心臟病學(xué)會(huì)的動(dòng)脈高血壓管理工作組發(fā)布的2007年動(dòng)脈高血壓管理指南診斷無(wú)癥狀A(yù)S。排除心血管和腦血管疾病、糖尿病、腫瘤、風(fēng)濕免疫性疾病、急性感染疾病或藥物治療史。所有受試者血漿總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和C反應(yīng)蛋白(CRP)由吉林市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科提供，另抽取空腹靜脈血5 ml，離心后留取血漿。

1.2主要試劑和儀器 qRT-PCR儀(Biorad，美國(guó))，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和sybrgreen mix(全式金，中國(guó))。

1.3血漿miRNA提取 新鮮抽取抗凝血經(jīng)短暫離心后，取400 μl血漿加入200 μl三氯甲烷，在室溫下孵育10 min。樣品以14 000 r/min離心15 min，分離出上層水相，并加入500 μl異丙醇，然后在室溫下孵育15 min。溫育后，將樣品再次離心以沉淀總RNA。將沉淀完全干燥并溶于無(wú)RNA酶的純水中。使用Nanodrop測(cè)量RNA濃度后保存于-80℃待用。

1.4qRT-PCR檢測(cè)血漿miR-144-5p水平 使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)樣品中的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物加入引物、SYBR mix、脫氧核糖核酸(dNTP)和水進(jìn)行qPCR。使用U6作為定量miR-144-5p水平的內(nèi)參，通過(guò)公式2-ΔΔCT確定相對(duì)miRNA表達(dá)水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS15.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1一般資料 兩組年齡和性別構(gòu)成上無(wú)明顯差異，體重指數(shù)(BMI)、總膽固醇、三酰甘油、HDL-C、LDL-C、心率和血壓無(wú)顯著差異(均P>0.05)。與對(duì)照組相比，AS組CRP水平顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料

2.2血漿miR-144-5p水平 與對(duì)照組(1.12±0.37)相比，AS組血漿中miR-144-5p表達(dá)(3.24±0.51)明顯增高(P<0.001)。

2.3血漿miR-144-5p水平與血脂和CRP的相關(guān)性 AS患者血漿miR-144-5p水平與外周血中總膽固醇、三酰甘油、HDL-C和LDL-C水平無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，但與CRP呈正相關(guān)(r=0.625，P<0.01)。

2.4miR-144-5p用于AS診斷的敏感性和特異性 受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)為0.82，可作為診斷AS風(fēng)險(xiǎn)的潛在生物標(biāo)記。miR-144-5p檢測(cè)AS的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和優(yōu)勢(shì)比分別為78.6%，83.2%，74.0%，84.3%和11.7%。

3 討 論

miRNA在許多生理和病理生理過(guò)程中廣泛發(fā)揮功能，例如胚胎發(fā)育、干細(xì)胞分化、炎癥和腫瘤〔3〕。研究表明，miRNA可以用作包括AS在內(nèi)的各種人類疾病的診斷標(biāo)記〔2〕。既往發(fā)現(xiàn)，miR-144-3p可以作為疾病中的有效生物標(biāo)志物。例如，Satoh等人報(bào)道稱，與健康人相比，阿爾茨海默氏病患者血液樣本中miR-144-5p和其他26種miRNA的表達(dá)失調(diào)，這可能與神經(jīng)元突觸功能有關(guān)〔4〕。與健康對(duì)照組相比，抑郁/焦慮癥患者的血漿miR-144-5p水平顯著降低，并且與抑郁評(píng)分呈負(fù)相關(guān)〔5〕。在各種類型的腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了異常的miR-144-5p表達(dá)〔6～8〕。本研究表明，miR-144-5p在AS的發(fā)病機(jī)制中可能起著非常重要的作用。

AS被認(rèn)為是由炎癥反應(yīng)驅(qū)動(dòng)的多因素疾病，炎癥反應(yīng)在急性AS血栓形成事件的發(fā)生中也起到了重要的促進(jìn)作用〔9〕。CRP是一種急性期蛋白，其在血清中的濃度反映了機(jī)體的系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)。既往研究發(fā)現(xiàn)，CRP水平與心血管疾病密切相關(guān)，并可作為預(yù)測(cè)心肌梗死和腦卒中的可靠標(biāo)志物〔10〕。CRP可能會(huì)促進(jìn)AS斑塊的進(jìn)展和(或)不穩(wěn)定〔11〕。本研究表明miR-144-5p可以用來(lái)反映AS患者系統(tǒng)性炎癥的嚴(yán)重程度，可以作為監(jiān)測(cè)AS病情變化或進(jìn)展的潛在性標(biāo)志物。