結核感染T細胞斑點試驗、腺苷脫氨酶及腫瘤壞死因子α檢測在中老年人結核性胸膜炎診斷中的應用價值

王慧 向波 羅煒

(1廣州醫科大學附屬第一醫院檢驗科，廣東 廣州 510120；2廣州呼吸健康研究院 呼吸疾病國家重點實驗室 廣州醫科大學附屬第一醫院呼吸科)

結核病是一種傳染性疾病，包含肺外結核與肺結核。結核性胸膜炎屬于肺外結核，病因復雜，常見的有淋巴引流障礙、胸膜受感染病原體侵入、感染病原體由血液與淋巴侵入胸膜等〔1〕。臨床對于結核性胸膜炎的診斷方法有很多種〔2〕，如病理活檢、抗酸染色與分枝桿菌培養等，其中病理活檢屬于有創檢查，分枝抗菌培養存在易漏檢、敏感度低、耗時長等缺點，均不易在臨床推廣及使用。

近二三十年來，在世界范圍內結核病的發病率和死亡率明顯下降，但近年來中老年人肺結核的發病和死亡卻下降很少〔3〕，與年輕人相比相對增高。中老年人群由于年齡、免疫力、基礎疾病等原因，更易感染結核病或者是陳舊病灶復發；特別是因疾病入院的中老年人，院內感染的概率會更高，同時有可能加重原發疾病的病情。因此，如能及時發現結核患者及潛在患者，及時采取相應治療或隔離措施，將對非結核中老年患者起到保護作用，也能使得結核患者得到及時治療。

本文探究結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)、腺苷脫氨酶(ADA)及腫瘤壞死因子(TNF)-α聯合檢測在中老年人結核性胸膜炎診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2018年8月廣州醫科大學附屬第一醫院100例中老年結核性胸膜炎患者為研究組，選取同期100例非結核性胸膜炎患者為參照組。研究組男、女患者分別為57例與43例；年齡55～82歲，平均(68.62±12.54)歲。參照組男、女患者分別為55例與45例；年齡55～82歲，平均年齡為(67.78±12.32)歲。納入標準〔4〕：①結核性胸膜炎患者：資料齊全；以《臨床診療指南：結核病分冊》為診斷標準；胸腔積液可見結核分枝桿菌；病理活檢可見干酪性肉芽腫；影像學診斷具備結核性胸膜炎特征；臨床特點與結核性胸膜炎相符合；②非結核性胸膜炎患者：資料齊全；非結核性胸膜炎疾病。排除標準：惡性腫瘤；精神障礙；不配合研究者。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2T-SPOT.TB試驗 新鮮采集患者抗凝血標本，用淋巴細胞分離液進行分離及富集純化T淋巴細胞，使用RPMI1640培養液將細胞濃度調整為2.5×109個/L；取出T-SPOT.TB試劑盒(生產廠家為英國Oxford Immunotec 公司)，該96孔板上已預先包被有γ干擾素單抗，每個標本分設陰性對照孔(加入50 μl培養液)、A抗原孔〔加入50 μl早期分泌靶向抗原(ESAT)-6〕、B抗原孔〔加入50 μl培養分泌蛋白(CFP)-10抗原〕、陽性對照孔(加入50 μl植物血凝素)，同時各孔內分別加入已調整好細胞濃度的細胞液100 μl，于37℃ 5%CO2培養箱中培育過夜，進行酶聯免疫斑點反應后對顯色斑點進行計數。

1.3ADA檢測 取10 ml的玻璃管，收集5 ml胸腔積液，行離心操作，取上清液待測。采用貝克曼AU5800生化分析儀進行檢測，ADA試劑盒的生產廠家為浙江東甌診斷產品有限公司。

1.4TNF-α檢測 取10 ml的玻璃管，收集5 ml胸腔積液，行離心操作，取上清液待測。TNF-α的檢測采用鏈霉親和素生物素-酶聯免疫吸附試驗，試劑盒為美國R&D公司出品，按試劑說明書進行操作。

1.5觀察指標 對比兩組患者T-SPOT.TB、ADA、TNF-α單獨檢測陽性率，T-SPOT.TB、ADA、TNF-α特異性、敏感度、陽性預測值、陰性預測值、診斷準確度及約登指數；T-SPOT.TB、ADA、TNF-α聯合進行檢測的各項指標結果，進行診斷性能分析。

1.6統計學方法 采用SPSS19.0軟件行χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組T-SPOT.TB、ADA、TNF-α單獨檢測陽性率 研究組T-SPOT.TB、ADA、TNF-α單獨陽性率明顯高于參照組(P<0.05)。見表1。

2.2T-SPOT.TB、ADA、TNF-α聯合檢測的陽性率比較 研究組聯合檢測陽性率均顯著高于參照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組T-SPOT.TB、ADA、TNF-α檢測陽性率〔n(%),n=100〕

2.3T-SPOT.TB、ADA、TNF-α單獨檢測的診斷效能評價 ADA檢測特異性明顯高于T-SPOT.TB(P<0.05)。T-SPOT.TB敏感度明顯高于ADA及 TNF-α(P<0.05)。見表2。

2.4T-SPOT.TB、ADA、TNF-α聯合檢測的診斷效能評價 三項同時聯合檢測時的敏感性高于其他二項聯合檢測，與ADA+TNF-α的聯檢模式相比，差異有統計學意義(P<0.05)；但與T-SPOT.TB+ADA及T-SPOT+TNF-α的聯檢模式相比差異無統計學意義(P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA+TNF-α聯合檢測敏感性高于各單項檢測指標，差異有統計學意義(P<0.05)，但需要注意在提高診斷敏感性的同時，降低了檢測特異性。見表2。

表2 T-SPOT.TB、ADA、TNF-α檢測的診斷效能評價

3 討 論

結核性腦膜炎、粟粒性肺結核及其他肺外結核病在中老年人均不罕見，中老年人肺結核患者相對增多可能有以下幾個原因：①隨著年齡的增長，中老年人抵抗力減低，加以中老年人常同時患有多種疾病或營養不良，使機體抵抗力更趨下降；此外，有些中老年患者在治療中使用了皮質激素也使機體免疫功能降低。②中老年人并存病多，肺結核癥狀常被掩蓋，易忽略而漏診，成為傳染源。③多年來對結核病的防治，重點放在兒童和青壯年人，對中老年人重視不夠。鑒于以上情況，中老年人如體內原有陳舊結核病灶則可能重新活動，或者做為易感人群容易被感染。中老年人肺結核臨床表現多無特殊癥狀，導致診斷不及時。因此如果能采用相應的檢測手段，及時發現患者或潛在患者，才能及時進行相應治療。

T-SPOT.TB診斷所運用的技術為酶聯免疫斑點技術，是對效應T淋巴細胞數量進行測定，結核性胸膜炎患者由于受到結核分枝桿菌的特異性抗原的刺激，從而造成效應T淋巴細胞釋放干擾素(IFN)-γ〔5，6〕。研究表明，T-SPOT.TB診斷具有較高的敏感度，可在臨床中推廣使用，有學者曾對非結核性胸膜炎與結核性胸膜炎患者分別進行T-SPOT.TB檢驗，李銳成等〔7〕和王曉娟等〔8〕報道結果顯示，結核性胸膜炎患者中靈敏度分別約為84%及85%，特異性分別約為61%及71%，提示T-SPOT.TB檢驗可用于結核性胸膜炎的診斷，且具有較高的靈敏度與特異性。本研究結果表明外周血T-SPOT.TB診斷為結核性胸膜炎診斷手段之一，與上述研究結果基本一致。

ADA屬于分布于體液與人體組織的一種常見酶，由T淋巴細胞所產生，其活性受到淋巴細胞的分化與激活影響〔9〕，當機體感染結核分枝桿菌時，其細胞免疫將發生變化，而ADA活性為細胞免疫功能的反映指標，其變化可用于多種免疫功能影響疾病的診斷。結核性胸膜炎患者的細胞在刺激下，其胸腔積液的淋巴細胞增多，伴隨ADA水平升高〔10〕。因此，ADA水平可用于結核性胸膜炎的診斷中。本研究結果表明ADA在結核性胸膜炎的診斷中具有較高的特異性與敏感度，診斷價值高。

TNF-α是由活化巨噬細胞、T淋巴細胞、自然殺傷(NK)細胞所產生，屬于無特異性毒性細胞因子，具有腫瘤細胞殺傷作用。當人體感染結核分枝桿菌時，結合腫瘤細胞特定受體，移動至細胞內，靶細胞溶酶體將其攝取后，溶酶體的自身穩定性出現降低，釋放各種酶，出現細胞溶解〔11〕，結核桿菌感染的機體局部表現為TNF-α水平升高，且與結核分枝桿菌的數量呈正相關。因此，TNF-α水平可用于結核性胸膜炎的診斷中。本研究結果表明TNF-α在結核性胸膜炎的診斷中具有較高的特異性與敏感度，診斷價值高。

綜上所述，T-SPOT.TB、ADA、TNF-α均可用于中老年人結核性胸膜炎的檢查，均具有較高的特異性與敏感度，其中T-SPOT.TB檢測敏感性優于其他兩個檢測指標，ADA檢測特異性優于其他兩個檢測指標；聯合檢測可以提高陽性診斷率，有助于中老年人結核性胸膜炎患者的診斷，及時進行相應治療。其中，T-SPOT.TB由于標本獲得簡單，只需采血8～10 ml即可進行檢測，檢測敏感性、特異性高，對檢測潛伏性結核及結核感染有重要意義，可以作為中老年人入院的篩查項目。