急性心力衰竭患者血清microRNA-1水平及與心功能和預后的關系

陳婉斐，陳晨

[1.臺州市中心醫院（臺州學院附屬醫院）心內科，浙江 臺州 318000；2.臺州市立醫院心內科，浙江 臺州 318000]

心力衰竭為心功能減退綜合征，是心臟疾病發展的終末階段。近年來隨著人口的不斷老齡化，心力衰竭的發生率和死亡率逐年升高，臨床轉歸不理想。心力衰竭發病機制復雜，研究發現心力衰竭的發生、發展與一些基因的表達和功能異常關系密切。microRNA（miRNA）為非編碼單鏈RNA，長度為22個核苷酸，在動植物基因翻譯和轉錄調控中發揮重要作用，可調節胚胎發育、細胞增殖和凋亡等多個病理生理過程，并在外周血中存在，在心血管疾病的發生、發展中具有重要價值[1-2]。microRNA-1（miR-1）主要在心肌和骨骼肌組織中表達，在肌肉生成、發育及重塑中發揮重要的調控作用，參與心臟正常功能的維持，參與心肌肥大、心肌梗死及心力衰竭等心臟疾病的發生發展過程[3]。何芮等[4]研究發現，輸注miR-1 可改善異丙腎上腺素誘導的小鼠心力衰竭。目前關于miR-1 在心力衰竭中的作用主要集中在動物實驗和細胞研究[5]，在心力衰竭血清中的表達及意義尚需進一步研究，本文對心力衰竭患者血清miR-1水平進行研究，探討其與心功能和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2018年12月在臺州市中心醫院就診的急性心力衰竭患者120例作為心力衰竭組，同期健康體檢者120例作為對照組。心力衰竭患者根據嚴重程度分為I級21例，Ⅱ級30例，Ⅲ級32例，Ⅳ級37例；根據1年內預后情況分為預后良好組77例，預后不良組43例包括再次發生心力衰竭28例和死亡15例）。預后良好組男性39例，女性38例；年齡（65.02±6.13）歲；基礎疾?。喊昴ば孕呐K病24例，缺血性心臟病21例，高血壓性心臟病17，擴張型心臟病15例。預后不良組男性22例，女性21例；年齡（64.52±5.78）歲；基礎疾?。喊昴ば孕呐K病13例，缺血性心臟病11例，高血壓性心臟病11例，擴張型心臟病9例。預后良好組與預后不良組患者年齡、性別及基礎疾病比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究通過醫院倫理委員會批準。心力衰竭組與對照組年齡、性別、體重指數、血壓、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較 （n=120）

1.1.1 心力衰竭診斷標準心力衰竭診斷標準參照中華醫學會心血管病學分會心力衰竭學組的《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》[6]。

1.1.2 心力衰竭嚴重程度分級肢體溫暖、肺部干凈為I級；肢體溫暖、肺部濕啰音為Ⅱ級；肢體冷、肺部干凈為Ⅲ級；肢體冷、肺部啰音為Ⅳ級[7]。

1.1.3 納入標準①心力衰竭患者紐約心臟病協會（New York Heart Association,NYHA）分級≥Ⅱ級；②對照組患者體檢身體健康；③兩組年齡＞18歲；④資料完整，患者簽署知情同意書。

1.1.4 排除標準①合并其他心血管疾??；②嚴重肝腎功能異常；③惡性腫瘤；④自身免疫系統疾??；⑤精神病史。

1.2 方法

1.2.1 逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）測定血清miR-1心力衰竭患者于入院第2天清晨、對照組于體檢當日清晨采集外周靜脈血5 ml，室溫下2 500 r/min 離心10 min，分離血清。向血清中加入Trizol 試劑，室溫放置20 min，4℃、2 000 r/min 離心15 min，吸取上清液，18 000 r/min離心10 min，吸取上清液，提取總RNA。PCR 反應條件：95℃預變性8 min，95℃變性15 s，58℃退火60 s，35℃延伸10 s，共40個循環，以2-ΔΔCt法計算miR-1相對表達量。miR-1 引物及逆轉錄試劑盒購自上海英杰公司。

1.2.2 心功能測定采用IE33 彩色多普勒心臟超聲診斷儀（購自荷蘭飛利浦公司）測定患者左心房內徑左心房內徑（left atrial dimension,LAD）、左心室舒張末期內徑（left ventricular end-diastolic dimension,LVDd），計算左心室射血分數（left ventricular ejection fraction,LVEF）。

1.3 隨訪

心力衰竭患者治療后隨訪1年，定期門診隨訪，由專門護士詳細登記隨訪過程中病情變化。再次發生心力衰竭或死亡為預后不良。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 20.0 統計軟件。計量資料以均數±標準差 （±s）表示，比較用t檢驗或方差分析，進一步的兩兩比較用LSD-t檢驗，影響因素的分析用多因素Logistic回歸模型，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清miR-1和心功能指標比較

心力衰竭組與對照組血清miR-1和LVEF、LAD及LVEd比較，經t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），心力衰竭組血清miR-1和LVEF 低于對照組；而LAD、LVEd 水平高于對照組。見表2。

表2 兩組血清miR-1和心功能指標比較 （n=120，±s）

表2 兩組血清miR-1和心功能指標比較 （n=120，±s）

組別 miR-1 LVEF/% LAD/mm LVEd/mm對照組 1.00±0.05 65.87±5.64 31.02±10.35 44.26±5.38心力衰竭組 0.46±0.04 42.61±5.42 47.25±11.43 57.34±5.49 t值 92.383 32.574 11.530 18.641 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 不同嚴重程度分級的心力衰竭患者血清miR-1相對表達量比較

I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級心力衰竭患者血清miR-1相對表達量分別為（0.61±0.04）、（0.53±0.05）、（0.42±0.06）和（0.31±0.05），經方差分析，差異有統計學意義（F=187.257，P=0.000），且進一步兩兩比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。不同嚴重程度分級的心力衰竭患者隨心力衰竭嚴重程度的增加，血清miR-1 降低。

2.3 不同預后的心力衰竭患者血清miR-1比較

預后良好組與預后不良組患者血清miR-1相對表達量分別為（0.55±0.04）和（0.31±0.06），經t檢驗，差異有統計學意義（t=26.219，P=0.000），預后不良組低于預后良好組。

2.4 心力衰竭患者血清miR-1與心功能指標的相關性分析

心力衰竭患者血清miR-1與LVEF 呈正相關（P＜0.05）；與LAD、LVEd 呈負相關（P＜0.05）。見表3。

2.5 心力衰竭患者預后影響因素的Logistic回歸分析

以預后為因變量，miR-1、LVEF、LAD及LVEd為自變量，進行一般多因素Logistic回歸分析，檢驗水準為0.05，以各變量的實際值賦值。結果顯示miR-1、LVEF、LAD及LVEd為心力衰竭預后的影響因素（P＜0.05）。見表4。

表3 心力衰竭患者心功能指標與血清miR-1水平的相關性

表4 心力衰竭患者預后影響因素的Logistic回歸分析參數

3 討論

心力衰竭是由心臟收縮和舒張功能發生障礙引起的心臟循環障礙，包括急性和慢性心力衰竭。其中急性心力衰竭是由于急性心肌負荷增加，心肌負荷過重導致心臟排出量驟減，循環阻力增加，肺充血導致肺淤血、肺水腫，并且伴有組織灌注不足所引起的一種臨床綜合征。目前對急性心力衰竭的診斷比較完善，但對心力衰竭患者的療效評價及預后狀況評估主要采用心臟彩超，但心臟彩超檢查效果不完善，存在一定局限性。miRNA 在靶基因降解和調控轉錄后基因表達方面發揮重要的調節作用，參與基因活動各個層面的調節，在胚胎發育、細胞增殖、細胞死亡、細胞凋亡及脂肪代謝等生命過程中發揮重要作用[8]。miRNA的表達具有高度組織特異性和細胞特異性，在心臟中大量表達的有miR-24、miR-126、miR-133及miR-1 等多種miRNA[9]。近來研究發現，多種miRNA參與心肌肥厚、心肌缺血、心律失常、心肌病及心力衰竭等多種心臟疾病的病理生理過程[10-11]。

miRNA 在血清中穩定表達，研究發現miR-1 在急性心肌梗死的早期診斷中具有重要價值[12-13]。本研究發現，心力衰竭患者血清miR-1 降低，在心力衰竭心肌組織中miR-1表達下調。miR-1為肌肉和心臟特異性miRNA，為心臟中含量比較豐富的miRNA，miR-1高表達對生長相關基因的表達具有抑制作用[14-15]，其表達下調可通過調控心肌肥大相關基因水平上調，從而介導心肌肥大的發生[16]。心力衰竭時miR-1表達下調，靶基因肌細胞增強因子-2和鈣調蛋白表達增強，鈣調蛋白為心肌肥大信號的重要介質，其可活化鈣神經素，導致轉錄因子激活T細胞核因子，導致其活化，從而導致心肌肥大的產生[17]。故分析心力衰竭時心肌組織miR-1表達下調，通過多種途徑介導心力衰竭的發生；因心力衰竭時心肌組織中miR-1表達下調，其釋放入血的miR-1 也降低，故心力衰竭患者血清miR-1 降低。

本研究發現心功能NYHA分級越高血清miR-1越低；預后不良組患者血清miR-1 低于預后良好組；血清miR-1與LVEF 呈正相關，與LAD、LVEd 呈負相關；多因素Logistic回歸分析顯示miR-1為心力衰竭預后的獨立影響因素。心功能NYHA分級為按照誘發心力衰竭癥狀的活動程度對心功能受損狀況進行的分級，其級別越高，表明心功能受損程度越重。LVEF 可從容積方面反映心室的射血功能，為判斷心臟功能的主要指標之一，其值越低表明心功能越差。LAD、LVEd 也為心功能的常用指標，其值越高表明心功能越差。故本研究結果表明miR-1 在反映心功能方面具有一定價值，其值越低在一定程度上可反映心功能越差；miR-1為心力衰竭不良預后的獨立影響因素，其值越低心力衰竭的預后越差。

綜上所述，急性心力衰竭患者血清miR-1 降低，檢測血清miR-1 對評估患者心功能和預后具有一定的參考價值。