MRN復合體在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義*

林丹，王代友

（廣西醫科大學附屬口腔醫院 1.綜合一門診，2.口腔額面外科，廣西 南寧 530021）

口腔癌是一種常見的惡性腫瘤，其發病率約占全身惡性腫瘤的3%。口腔鱗狀細胞癌 （oral squamous cell carcinoma，OSCC） 占口腔癌的90%，其病死率排世界癌癥病死率的第6位[1]，早發現、早診斷、早治療是提高OSCC 患者療效最有效的手段。目前針對OSCC的診治，通過采用基因組學、蛋白質組學等分子生物學技術篩選出了大量生物標志物，已經有上市的以生物標志物的為靶點的靶向治療藥物，以及潛在作為治療靶點的生物標志物研究方興未艾[2]。

MRN復合體包括MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白質，其在DNA 復制、細胞周期調控、DNA 損傷信號感應、維持基因組穩定等過程中有關鍵的作用。近來研究證實：MRN復合體與腫瘤的惡性生物學行為有關[3]，可能參與腫瘤的發生、發展，甚至與放射治療的反應性有關[4]。作為OSCC 潛在生物標志物，目前研究主要集中在抑制MRN 對腫瘤細胞放射敏感性的影響上[5]。但MRN復合體的MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白質在OSCC 中的表達未見系統報道。本實驗主要研究MRN復合體各亞基單位與OSCC 臨床病理特征的關系，進而為OSCC的治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年1月—2017年6月廣西醫科大學附屬口腔醫院住院治療的OSCC 患者50例為觀察組。所有患者行手術治療，并經常規病理切片確診，術前未接受放化療。獲取患者臨床資料，包括年齡、性別、民族、家族病史、治療用藥情況、病理分級和轉移情況。其中，男性28例，女性22例；年齡38～67歲，平均 （58.8±6.7） 歲；另選擇50例同期本院口腔疾病患者作為對照組，其組織來源于術中距離腫瘤邊緣＞2 cm的口腔黏膜組織，以及因良性疾病 （口腔扁平苔蘚、口腔白斑病、口腔潰瘍、盤狀紅斑） 行病理檢查的口腔黏膜組織。其中，男性26例，女性24例；平均年齡 （57.4±7.5） 歲。兩組的性別構成比、年齡比較，差異無統計學意義 （P＞0.05）。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有受試對象簽署知情同意書。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學SP法檢測組織中MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白的表達。嚴格按照試劑盒配套說明書進行操作，經脫蠟-修復(兔抗人MRE11、RAD50、NBS1 多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司），陰性對照使用PBS緩沖液。結果判定采用雙評分半定量法評價[6]，分為著色強度評分 （0分：未著色，1分：淡黃色，2分：棕黃色，3分：棕褐色）和染色評分[400倍顯微鏡下隨機選取5個視野，記數陽性細胞所占比例 （陽性率）。1分：≤25%，2分：＞25%～50%，3分：＞50%～75%，4分：＞75%～100%]，最終評分取著色強度評分×染色評分，≥6分為陽性，＜6分為陰性。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 22.0 統計軟件，計量資料以均數±標準差 （±s）表示，比較用t檢驗；計數資料以例 （%）表示，比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MRE11、RAD50及NBS1免疫組織化學染色結果

MRE11、RAD50和NBS1陽性表達呈棕黃色，主要位于胞核內，部分位于胞漿，在正常黏膜組織中呈弱陽性反應。見圖1。

2.2 兩組MRE11、RAD50及NBS1表達比較

兩組MRE11、RAD50及NBS1陽性表達率比較，差異有統計學意義 （P＜0.05），觀察組MRE11、RAD50陽性表達率低于對照組；觀察組NBS1陽性表達率高于對照組。見表1。

2.3 MRE11、RAD50和NBS1的表達與OSCC患者臨床病理特征的關系

圖1 MRE11、RAD50、NBS1在組織中的表達 （SP法×400）

表1 兩組患者MRE11、RAD50及NBS1陽性表達率的比較 [n=50，例 （%） ]

觀察組NBS1的陽性表達率在不同OSCC的組織分型、有無淋巴結轉移和臨床分期中比較，差異有統計學意義 （P＜0.05）。NBS1在低分化組 （76.2%） 、中分化組 （64.7%） 的陽性表達率高于高分化組 （25.0%） （P＜0.05） ；NBS1在有淋巴結轉移患者的陽性表達率高于無淋巴結轉移患者 （P＜0.05）。NBS1在Ⅲ、Ⅳ期 （81.8%） 的患者的陽性表達率高于I、Ⅱ期患者 （42.9%） （P＜0.05）。MRE11和RAD50的陽性表達率在性別、年齡、分化程度、臨床分期、腫瘤大小及淋巴結轉移間比較，差異無統計學意義 （P＞0.05）。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征間MRE11、RAD50和NBS1的陽性表達率比較例 （%）

續表2

3 討論

有研究表明NBS1蛋白水平的降低和升高均可引起癌變[7]。在腫瘤患者中，NBS1的70 kD C端片段的數量與癌癥發生相關，與70 kD NBS1表達水平高的患者比較，70 kD NBS1表達水平低的患者C端片段的數量增加，并且類淋巴母細胞系易發展成癌細胞[8]。一項研究篩選29例非小細胞肺癌，13例肝細胞癌和18例非小細胞肺癌及10個食管癌樣品，顯示NBS1的表達與相應的正常組織比較升高[9]。NBS1在某些類型腫瘤中的過度表達是晚期惡性腫瘤預后差的標志物。在高NBS1表達患者標本中觀察到細胞質染色隨著NBS1 水平的升高而加深[10]。本研究在OSCC 中檢測到NBS1陽性表達率高于對照組，也提示NBS1 可能與腫瘤的發生有關。且發現NBS1的陽性表達率與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移和分化程度有關，表明NBS1的表達可能與較差的臨床預后有關。

與NBS1相反，RAD50過表達導致腫瘤細胞壞死和凋亡。研究結果顯示，有RAD50基因表達的腫瘤血管更少，因此RAD50被認為是抑制腫瘤生長的重要靶點[11]。而MRE11在腫瘤細胞中的表達研究較少，但與RAD50類似，MRE11在腫瘤中 （卵巢癌） 的表達較正常組織減少[12]。本研究發現，在OSCC 中RAD50與MRE11陽性表達率低于對照組，提示RAD50與MRE11可能對OSCC的發生起抑制作用。但本研究未發現RAD50與MRE11表達與腫瘤臨床分期及分化程度等臨床特征有關。

綜上所述，MRE11、RAD50和NBS1表達在OSCC組織中存在異常。NBS1與OSCC分化程度、淋巴結轉移和臨床分期有關。