丹參酮抗紫外線損傷的保護(hù)作用的研究

林鶯

（四川省科學(xué)城醫(yī)院 藥劑科，四川 綿陽）

0 引言

丹參為唇形科植物丹參（Salviamiltiorrhiza Bge）的干燥根及根莖，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、涼血消癰、清心除煩的作用。丹參中有效成分主要是丹參酮，然而對丹參酮的研究目前只局限于其擴(kuò)張血管、活血、抗炎等方面，我們曾在一些文獻(xiàn)中看到過有關(guān)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)丹參酮具有一定的體外抗氧化作用[1]，以及丹參配伍人參有抗氧化作用，但是其單獨(dú)使用在體內(nèi)的抗氧化活性怎樣亦或使用時抗氧化作用是其本身所致還是激發(fā)細(xì)胞使機(jī)體產(chǎn)生有抗氧化活性物質(zhì)不得而知，紫外線會使機(jī)體產(chǎn)生氧自由基，而過量的氧自由基會傷害機(jī)體[2]。本研究是針對丹參酮對體內(nèi)肝臟谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）活力及NO 含量的影響，從而探索其清除氧自由基的程度，以期為臨床開發(fā)有效且副作用少的抗紫外線藥物提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

SPF 級BALB/c 小鼠（成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司）30只，年齡12～16 周，體質(zhì)量（20±2）g，隨機(jī)分為Ⅰ組為正常對照組（生理鹽水對照組）、Ⅱ組為模型對照組、Ⅲ組為維生素C（5 mg/mL）組，Ⅳ～Ⅵ組為3 個劑量丹參酮組（2.5、5、10 mg/mL），每組5 只。

1.2 主要試劑與儀器

98%丹參酮ⅡA 提取物（西安開來生物工程有限公司，批號：K176845）；VC（分析純）（批號：2017041301，成都麥卡希化工有限公司）；薇婷脫毛膏；谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）試劑盒；一氧化氮（NO）試劑盒等。

儀器：紫外分光光度計、低溫離心機(jī)、0.22 μm 孔徑濾器、紫外燈等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取小鼠肝臟0.5 g 用生理鹽水洗凈、濾紙拭干，再用量筒取相當(dāng)于肝臟9 倍的生理鹽水與肝臟制成組織勻漿，再離心取上清液進(jìn)行各種測定。

1.3.1 肝臟谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）活力的測定

按照谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）試劑盒的要求進(jìn)行操作：①酶促反應(yīng)（試劑：應(yīng)用液提前在37 ℃預(yù)溫）：取肝臟勻漿的上清液0.2 mL 加入GSH-PX 試劑盒中試劑混勻反應(yīng)后離心10 min 取上清液1 mL 作顯色反應(yīng)；②顯色反應(yīng)：酶促反應(yīng)后1 mL 的上清液加入試劑混勻反應(yīng)，在室溫靜置15 min 后，在波長412 nm，1 cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測定各管吸光度值；③計算各組小鼠肝臟中GSH-PX 的活力。

1.3.2 肝臟中NO 濃度的測定（硝酸還原酶法）

按照NO 試劑盒要求進(jìn)行操作：取肝臟勻漿的上清液0.5 mL 加入試劑盒中試劑混勻反應(yīng)后，在室溫靜置10 min后，在波長550 nm，0.5 cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測定各管吸光度值。

2 結(jié)果

2.1 丹參酮對紫外線照射小鼠肝臟谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）的影響

結(jié)果顯示由于紫外線的照射（模型組）使小鼠肝臟中GSH-PX 的活力比不照射紫外線（對照組）的小鼠顯著降低，而服用了丹參酮的小鼠在紫外線照射后肝臟中的GSH-PX有明顯增加且隨著丹參酮的濃度的增加而增加，見表1。

2.2 丹參酮對紫外線照射小鼠肝臟中一氧化氮（NO）濃度的影響

結(jié)果顯示由于紫外線的照射（模型組）使小鼠肝臟中NO的濃度比不照射紫外線（對照組）的小鼠顯著降低，而服用了丹參酮的小鼠在紫外線照射后肝臟中的NO 濃度有明顯增加且高濃度優(yōu)于低濃度，見表2。

表1 丹參酮對各組紫外線照射小鼠肝臟GSH-PX 的影響（±s）

表1 丹參酮對各組紫外線照射小鼠肝臟GSH-PX 的影響（±s）

注：與生理鹽水組對照：*P＜0.05，有顯著差異，與模型組對照：**P＜0.05，有顯著差異。

組別 GSH-PX生理鹽水（NS）組 41.40±4.31模型對照組 11.12±4.28*維生素C（5 mg/mL）組 29.81±5.43丹參酮（2.5 mg/mL）組 23.55±7.11**丹參酮（5 mg/mL）組 32.34±3.87**丹參酮（10 mg/mL）組 39.63±2.81**

表2 丹參酮對各組紫外線照射小鼠肝臟中NO 的影響（±s）

表2 丹參酮對各組紫外線照射小鼠肝臟中NO 的影響（±s）

注：與生理鹽水組對照：*P＜0.05，有顯著差異，與模型組對照：**P＜0.05，有顯著差異。

組別 NO生理鹽水（NS）組 8.49±1.93模型對照組 3.90±0.50*維生素C（5 mg/mL）組 5.50±0.82丹參酮（2.5 mg/mL）組 5.12±1.08**丹參酮（5 mg/mL）組 6.21±0.90**丹參酮（10 mg/mL）組 7.29±1.13**

3 討論

紫外線對生物體有傷害，其原因是紫外線會使機(jī)體產(chǎn)生氧自由基，氧自由基攻擊細(xì)胞膜、線粒體膜中的不飽和脂肪酸造成脂質(zhì)過氧化物增強(qiáng)，這些物質(zhì)又可分解為更多的自由基，引起自由基的連鎖反應(yīng)，這樣膜結(jié)構(gòu)的完整性受到破壞[3]，引起機(jī)體的一系列反應(yīng)：①削弱細(xì)胞的抵抗力，使身體易受細(xì)菌和病菌感染；②產(chǎn)生破壞細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)，形成致癌物質(zhì)；③阻礙細(xì)胞的正常發(fā)展，干擾其復(fù)原功能，使細(xì)胞更新率低于枯萎率；④破壞體內(nèi)的遺傳基因（DNA）組織，擾亂細(xì)胞的運(yùn)作及再生功能，造成基因突變，演變成癌癥；⑤破壞細(xì)胞內(nèi)的線粒體，造成氧化性疲勞；⑥破壞細(xì)胞膜，干擾細(xì)胞的新陳代謝，使細(xì)胞膜喪失保護(hù)細(xì)胞的功能；⑦破壞蛋白質(zhì)，破壞體內(nèi)的酶，導(dǎo)致炎癥和衰老；⑧破壞脂肪，使脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致動脈粥樣硬化，發(fā)生心腦血管疾病等[4]。所以為了抗輻射，達(dá)到保護(hù)特殊崗位工作人員的目的，則必須要重視氧自由基的清除[5-7]。所以，來尋找一些具有抗氧化活性的天然產(chǎn)物是很有必要的[8]。

本研究結(jié)果表明，丹參中丹參酮能夠提高小鼠肝臟中谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量，甘肽過氧化酶（GSH-PX）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它能催化GSH 變?yōu)镚SSG，使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不收過氧化物的干擾和損害，達(dá)到保護(hù)機(jī)體的作用。此研究還顯示丹參酮抗氧化活性有劑量效應(yīng)即丹參酮抗氧化活性隨著其濃度的增加而增加。有文獻(xiàn)[9-10]報道丹參酮在體外利用AP-TEMED 產(chǎn)生O2-自由基，無酶體系存在，依靠藥物成分抑制自由基的產(chǎn)生或促進(jìn)自由基的清除，這說明丹參酮在體內(nèi)外均有抗氧化活性（直接化學(xué)反應(yīng)和通過激活酶促反應(yīng)達(dá)到清除氧自由基目的）。故可將其用于抗紫外線損傷的治療。