抗核抗體和抗核抗體譜檢測結果分析

夏曉旭 徐思琪*

自身免疫性疾病（AID）是指機體對自身器官、組織、細胞的抗原發生免疫反應，導致自身機體損害而引起的疾病。AID患者血液中存在不同針對自身抗原成分的抗體，即自身抗體，其中最常見的也最重要的自身抗體為抗核抗體（ANA）。ANA是一組將自身真核細胞的各成分作為靶抗原的抗體，主要存在于血清中。ANA譜和ANA同時檢測，或用于ANA陽性標本的檢測，具有重要的補充診斷價值。本文回顧性分析690例懷疑自身抗體陽性患者，同時進行ANA和ANA譜檢測，分析兩者的相關性及其在臨床疾病中的特征。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2018年1月至5月本院檢查ANA和ANA譜的門診及住院標本690例，其中男180例，年齡35～92歲，平均年齡65.89歲；女510例，年齡5～88歲，平均年齡57.08歲。臨床診斷為系統性紅斑狼瘡（SLE）11例，干燥綜合征37例，結締組織病20例，雷諾綜合癥10例，間質性肺病15例，硬皮病7例，類風濕性關節炎62例，狼瘡性腎炎3例，關節病121例，肺部感染155例，痛風29例，血小板減少40例，慢性腎炎45例，風濕病45例，其他疾病（如肌炎、白細胞異常等）90例。所有標本采用患者空腹靜脈血，離心后分離血清進行后續實驗。

1.2 方法 （1）抗核抗體檢測：①操作流程：試劑來源于德國歐蒙（EUROIMMUN）公司抗核抗體IgG檢測試劑盒（間接免疫熒光法），貨號FC 1510-1010-1，采用間接免疫熒光法檢測。每個反應區含有兩種抗原基質片：猴肝組織和Hep-2細胞。用PBS緩沖液以1∶100稀釋血清，取25μl稀釋好的樣本加入生物載片，溫育30min，PBS緩沖液沖洗、浸泡5min，取20μl FITC標記二抗加入生物載片，溫育30min，PBS緩沖液沖洗、浸泡5min，最后用封片介質封片。采用Olympus顯微鏡觀察熒光結果。對1∶100稀釋標本熒光強度顯示為中等或強陽性的標本進一步行1∶1000稀釋，重復上述操作步驟后觀察熒光結果。②抗體滴度判斷：由經過專業培訓的檢驗技師觀察基質片熒光強度，依照試劑說明書對抗體滴度進行判斷，所有熒光基質片結果得到另一位經專業培訓的主管技師復核。根據歐蒙公司抗核抗體IgG檢測試劑盒（間接免疫熒光法）產品說明書有關抗體滴度的判斷，可根據不同稀釋度血清所產生的熒光強度進行判斷，具體如下：若1∶100稀釋后熒光陰性，報告ANA“陰性”；1∶100稀釋后熒光強度弱陽性，1∶1000稀釋后熒光陰性，報告ANA“1∶100陽性”；1∶100稀釋后熒光中等，1∶1000稀釋后熒光陰性，可推斷報告為ANA“1∶320陽性”；1∶100稀釋后熒光強，1∶1000稀釋后熒光弱陽性，報告ANA“1∶1000陽性”。（2）抗核抗體譜檢測：①操作流程：試劑來源于深圳亞輝龍生物科技股份有限公司的抗核抗體譜檢測試劑盒，采用免疫印跡法檢測。按照試劑盒說明書進行操作，孵育液封閉5min，加入稀釋的血清，孵育30min，血清中若含有特異性抗體則會與膜上的抗原結合，經洗滌，加入HRP-IgG孵育30min，洗滌后加入底物液孵育10min，顯色后加入終止液。②結果判斷：根據條帶顯色位置判斷血清中存在的相應抗體。

1.3 觀察指標 根據ANA和ANA譜檢測結果，分析ANA滴度在不同疾病中的分布特征、ANA譜檢測的特異性抗體與疾病的相關性、不同特異性抗體與ANA滴度是否存在一定的關聯及不同疾病ANA陽性率和特異性抗體的檢出情況。

1.4 統計學方法 正態性檢驗采用單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ANA滴度在不同疾病中的分布 690例懷疑自身抗體陽性的臨床標本中，ANA陽性標本為494例，陽性率71.6%。其中ANA滴度為1∶100陽性標本186例，陽性率27.0%；ANA滴度為1∶320陽性標本90例，陽性率13%；ANA滴度為1∶1000陽性標本218例，陽性率31.6%。見表1。

表1 ANA滴度在部分疾病中的分布［n（%）］

2.2 ANA譜檢測特異性自身抗體情況 ANA譜檢測特異性自身抗體陽性標本共245例，占總標本數35.5%，其中ANA陽性且ANA譜陽性的標本為235例，占ANA陽性標本數的47.6%；ANA陽性而ANA譜陰性的標本259例，占ANA陽性標本數的52.4%；ANA陰性而ANA譜陽性的標本10例，占總標本數1.4%，主要為抗Ro-52抗體；在ANA譜陽性的標本中多數能檢測到抗SSA、Ro-52抗體，其存在無疾病特異性；抗SSB抗體的出現常伴隨抗SSA抗體；抗Nucleosome、抗dsDNA抗體僅存在于系統性紅斑狼瘡患者的血清中；硬皮病、雷諾綜合癥患者血清中僅檢測到抗Cenp B抗體；未能檢測到抗PCNA、抗PM-Scl抗體。見表2。

表2 ANA譜檢測特異性自身抗體情況及其主要存在的疾病

2.3 ANA滴度與ANA譜的相關性 690例懷疑自身抗體陽性的臨床標本中，ANA陰性標本196例，其中10例標本ANA譜陽性，主要抗體為抗Ro-52；ANA陽性標本為494例，其中ANA譜陽性標本235例，主要抗體為抗SSA、抗Ro-52。抗核小體、抗dsDNA、抗組蛋白、抗Sm、抗U1-nRNP抗體陽性標本ANA滴度均較高，多為1∶320或1∶1000；抗Cenp B、抗SSB、抗AMA-M2抗體陽性標本ANA滴度主要也集中在較高水平；抗SSA、抗Ro-52、抗Scl-70、抗Jo-1抗體陽性標本可存在于各種滴度的ANA陽性標本中，無明顯ANA滴度分布特征。見表3。

表3 ANA滴度與特異性自身抗體的相關性［n（%）］

2.4 不同疾病中ANA和ANA譜檢測分析 系統性紅斑狼瘡、干燥綜合征、結締組織病、硬皮病等自身免疫性疾病ANA陽性率高；抗核小體抗體、抗dsDNA抗體、抗Sm抗體具有較強的疾病特異性；抗SSA抗體、抗Ro-52抗體可存在于多種疾病，無特異性。見表4。

表4 不同疾病中ANA陽性率和特異性抗體分布特征（%）

3 討論

當機體免疫自穩功能發生紊亂或外來抗原與自身成分間存在交叉反應等原因時，易刺激機體產生針對自身抗原的抗體（即自身抗體），這些自身抗體會攻擊機體自身的器官、組織、細胞而導致機體損害甚至疾病發生。自身抗體可存在于自身免疫性疾病患者體內，如系統性紅斑狼瘡；亦可存在于其他繼發性免疫反應患者體內，如肺部感染；同時，微量自身抗體也能存在于一些正常人血液中，如抗甲狀腺球蛋白抗體。

自身抗體尤其是抗核抗體的檢測對自身免疫性疾病的診斷、預后評估有重要作用［1］，對某些繼發性免疫反應的病情判斷亦有著不可忽視的作用。血清學檢測ANA已成為臨床免疫學檢驗的一項重要內容。間接免疫熒光法檢測ANA是較公認的“金標準”［2-3］，但由于其針對細胞內總抗體進行檢測，具有敏感性高而疾病特異性相對較差的特點，間接免疫熒光法檢測ANA陽性患者還需進行免疫印跡法檢測ANA譜特異性抗體，以協助臨床診斷。

本資料顯示，690例懷疑自身抗體陽性的標本中，ANA陽性標本494例，SLE、結締組織病、干燥綜合征等自身免疫性疾病ANA滴度多＞1∶100，這與試劑說明書中提及的“ANA滴度1∶320提示患有某種風濕病”相符；肺部感染、慢性腎炎、關節病、痛風等疾病ANA陽性率在45%～60%左右，滴度分布無明顯規律；其他如白細胞異常、糖尿病、橋本甲狀腺炎等疾病ANA陽性率較低。本資料中ANA陽性率總體較高，可能原因是該陽性率指在ANA陽性疑似患者中的概率，而非在普通人群中的概率。

ANA譜特異性抗體陽性標本為245例，其中ANA陰性而ANA譜陽性標本10例，ANA陽性且ANA譜陽性標本235例，兩種方法并不完全一致，不可代替，這與多位學者的報道一致［4-5］。由于間接免疫熒光法檢測ANA存在基質片部分抗原分布不均、含量較低的情況，可能導致ANA陰性而ANA譜特異性抗體檢測陽性情況出現。因此，中國醫師協會風濕免疫科醫師分會自身抗體檢測專業委員會于2018年出臺《抗核抗體檢測的臨床應用專家共識》［6］，指出“臨床檢測中存在IIF-ANA陽性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結果陰性，甚至IIF-ANA陰性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結果陽性的情況。因此，當臨床高度疑診AID時，不論ANA總抗體檢測結果如何，均需對靶抗原的特異性自身抗體進行檢測。”

抗核小體、抗dsDNA、抗Sm、抗U1-nRNP抗體陽性多見于SLE，且標本ANA滴度均較高；雷諾綜合癥和硬皮病患者抗Cenp B抗體陽性，干燥綜合征患者可見抗SSA和抗SSB抗體同時陽性，ANA滴度也多偏高，這與作者對特異性自身抗體的認識相符［7］。有些疾病如結腸炎、胰腺炎、糖尿病、肝功能異常等ANA陽性，但ANA譜陰性，可能原因在其會產生除ANA外的其他自身抗體，但由于目前診斷試劑的特異性不夠強，可能會發生交叉反應，而導致ANA陽性，另一個原因在于，患者本身即ANA陽性，需要進一步檢查明確病因。

ANA和ANA譜陽性可出現在各種的疾病中，兩種方法不能替代，ANA譜特異性抗體檢測對ANA檢測陽性的標本具有補充診斷作用，同時檢測ANA和ANA譜能更好的為臨床診斷和評估預后提供幫助。一種疾病可出現多種特異性自身抗體陽性，一種抗體也能出現在多種疾病中，因此當ANA或ANA譜報告陽性時，臨床醫師還需結合患者其他檢查和臨床表現進行綜合評估。