嗜酸性粒細胞趨化因子-1 在肺癌合并哮喘患者氣道上皮細胞中的表達情況及對癥處理研究△

韓月玲，方宇，羅永剛，劉文慧

鄭州大學第一附屬醫院綜合ICU，鄭州4500520

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，最早起源于支氣管黏膜，多發生于40 歲以上的男性，發生率呈逐年上升趨勢[1-2]。最新的報道表明，肺癌最早是由支氣管哮喘引發而來的[3]。支氣管哮喘屬于慢性炎癥疾病，其發病由嗜酸性粒細胞、淋巴細胞等多種細胞參與，其中，嗜酸性粒細胞是最主要的效應細胞，尤其在肺功能損傷方面起著重要作用[4]。嗜酸性粒細胞趨化因子-1（eotaxin-1，Eot-1）的主要作用是激活嗜酸性粒細胞。目前，關于支氣管哮喘與肺癌之間關系的研究較少。前期研究發現Eot-1 能夠在一定程度上提高嗜酸性粒細胞的趨化程度，且其趨化程度與哮喘的嚴重程度有關[5]。另有研究發現，哮喘的嚴重程度可能與Eot-1 的基因多態性存在相關性[6]。肺癌合并支氣管哮喘患者常表現為胸部、背部出現疼痛或咯血等臨床癥狀，好發于老年，而老年患者的身體機能較弱，并發癥發生率較高，在一定程度上增加了治療難度。因此，對于此類患者，除了予以相關的治療措施外，必要的護理亦是關鍵。常規護理措施存在一定的局限性，其以“疾病”為中心，缺乏個性化，護理效果不太理想。本研究基于前期研究及其他研究成果，對患者采用基于常規護理的對癥處理措施，并予以針對性的呼吸道護理，具有一定的創新性，旨在為肺癌合并支氣管哮喘患者的臨床護理提供參考依據，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2018 年4 月至2019 年3 月于鄭州大學第一附屬醫院就診的252 例肺癌合并哮喘患者。納入標準：①診斷根據診斷性介入肺臟病學共識的相關標準[7]，即腫瘤直徑≥5 cm，或根據計算機斷層掃描（CT）檢查結果顯示，確診存在肺門縱隔淋巴結腫大；②未合并其他惡性腫瘤；③凝血功能正常。排除標準：①伴有精神類疾病；②伴有免疫系統、代謝性疾病。252 例肺癌合并哮喘患者中，重度哮喘和輕中度哮喘患者各126 例。輕中度哮喘患者中，男76 例，女50 例；年齡49～77 歲，平均（62.75±2.56）歲；腫瘤類型：鱗狀細胞癌46 例，腺癌48 例，腺鱗癌21 例，其他11 例；手術類型：肺葉切除術92 例，全肺切除術12 例，其他22 例。重度哮喘患者中，男79 例，女47 例；年齡50～78 歲，平均（62.39±2.38）歲；腫瘤類型：鱗狀細胞癌50 例，腺癌44 例，腺鱗癌19 例，其他13 例；手術類型：肺葉切除術89 例，全肺切除術16 例，其他21 例。兩組患者的性別、年齡、腫瘤類型和手術類型比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05），具有可比性。根據隨機數字表法將126 例肺癌合并重度哮喘患者分為觀察組和對照組，各63 例。對照組采用常規護理措施，觀察組在常規護理的基礎上予以有針對性的負性心理護理干預。本研究經過醫院醫學倫理委員會審批通過，所有患者均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 干預方法

對照組采取常規護理，護理內容包括體位、引流管和生命體征的護理。具體如下：①體位護理。當患者未清醒時，相關的護理人員幫助患者采取平臥位姿勢，密切觀察，待患者恢復意識后，檢測患者的血壓是否正常；當患者完全清醒后，相關護理人員囑患者采取半臥位姿勢，有利于患者呼吸和胸膜腔引流等。護理人員每隔3 個小時幫助患者更換臥位姿勢，避免由于長時間壓迫造成的血液不循環。②引流管護理。相關護理人員觀察手術過程中麻醉的方法以及患者的麻醉情況等，監測患者手術結束后的生命體征等需要注意的事項，詳細記錄手術情況及引流管、引流瓶的情況，保障其通暢。③密切觀察血容量情況。在手術過程中，若患者的出血量較大，則患者術后極易因循環血量不足而出現低血壓、心率快等情況，相關護理人員可通過調整輸液的速度避免上述情況的發生。④保持呼吸道通暢。在患者的意識尚未恢復時，護理人員可以采用吸引器將患者咽部的痰液、唾液等吸除，以避免嘔吐等癥狀發生。當患者恢復意識后，囑患者深呼吸，以利于呼吸道的暢通和排痰等，一定程度上可避免相關并發癥的發生。對于排痰較困難的患者，相關護理人員可輕拍其背部，也可采用布地奈德氣霧劑霧化吸入；另外，在排痰的過程中，注意密切觀察患者的面部、呼吸等是否正常。護理人員將濕化器以及近端的氣道溫度適當控制在32 ℃左右，溫度控制在40 ℃以下，注意將氣體的濕度合理控制在60%左右；另外，將氣囊壓控制在15 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）左右。⑤口腔護理。采用含有適量復方氯己定溶液的棉球依次擦洗患者的牙齒、上顎等位置，再予以適量的冰硼酸溶液，每天2 次。

觀察組在常規護理的基礎上，對出現不同程度負性心理的患者進行有針對性的心理護理干預。護理人員與患者耐心交流，向其解釋手術操作和疾病相關情況，并向患者介紹相關的成功案例，緩解其焦慮、緊張等負性情緒。

1.3 氣道上皮細胞的采集及培養

氣道上皮細胞的采集：通過氣管鏡下毛刷刷檢取患者的主氣道上皮組織，再將毛刷置于含有工作液的容器中，緩慢攪拌；再次在氣管鏡下，采用毛刷輕輕刷取患者病變位置處的氣道上皮細胞，然后取出毛刷，再次將毛刷置于含有工作液的容器中，輕輕攪拌，保存于-70 ℃的冰箱中。所有標本均采用蘇木精-伊紅溶液進行染色處理。氣道上皮細胞的培養：取直徑約為10 cm 的培養皿，定期更換培養基，密切觀察細胞的生長情況，當細胞的融合達到80%左右時，開始進行細胞接種。在開始進行實驗操作的前1 天，將氣道上皮細胞接種于含6 孔板的培養板中，注意每孔的細胞數目，細胞數目不超過4×105個。

1.4 檢測指標及判定標準

觀察并比較Eot-1 在肺癌合并不同程度哮喘患者氣道上皮細胞中的表達情況。輕度哮喘：患者每周均出現不同程度的喘息、氣急、胸悶和咳嗽等癥狀；中重度哮喘：患者每周均出現不同程度的喘息、氣急、胸悶和咳嗽等癥狀，同時常伴有呼吸困難、呼氣流量下降的表現。護理后第6 天，比較兩組患者的排痰量、痰液黏稠度、呼吸困難評分、急性生理學及慢性健康狀況評分系統Ⅱ（acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHEⅡ）評分及肺部感染的發生率。

1.4.1 檢測Eot-1 基因的表達 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測Eot-1 基因的表達情況。提取總RNA，嚴格按照實驗的具體操作要求進行PCR 擴增。反應條件：95 ℃10 min，1 個循環；95 ℃15 s，60 ℃60 s，40個循環。以β-actin 為內參，采用2-??Ct法計算相對表達量。引物序列：β-actin 的上游引物為5'-CTGTATTCCGTCTCCTTGGTTC-3'，下 游 引 物 為5'-CTGTATTCCTTGGTCCGTCTTC-3'，引物長度為126 bp；Eot-1 的上游引物為5'-CTGTATTCTTGCCGTCTCGTTC-3'，下游引物為5'-CTGTATCCTTGGTCGTTCTCTC-3'，引物長度為355 bp。

1.4.2 檢測Eot-1 蛋白的表達 采用酶聯免疫試劑盒（購自上海晶抗生物工程有限公司）檢測Eot-1 蛋白的表達，嚴格按照說明書的步驟操作。以Eot-1多克隆抗體包被酶標板，在酶標板的每孔中加入100 μl蛋白樣品，檢測抗體、四甲基聯苯二胺顯色液，分別在450 nm 和620 nm 的雙波長下檢測其吸光度值。每個樣本均設置2 個重復孔，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）作為陰性對照。

1.4.3 呼吸困難評分 采用世界衛生組織制定的生存質量測定簡式量表對呼吸困難進行評分[8]。采用10 分制，分值越高表明呼吸困難越嚴重。信度系數為0.865，效度系數為0.848。

1.4.4 痰液黏稠度 痰液的黏稠度主要分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度。Ⅰ度：痰液呈現泡沫樣，經過相關的吸痰處理后，玻璃接頭位置無明顯的痰液殘留；Ⅱ度：痰液較Ⅰ度的痰液濃稠，經過相關的吸痰處理后，玻璃接頭位置存在少量痰液；Ⅲ度：痰液較Ⅱ度的痰液濃稠，經過相關的吸痰處理后，玻璃接頭位置存在大量痰液。

1.5 統計學方法

采用SPSS 26.0 軟件對數據進行統計分析，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗。以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肺癌合并不同程度哮喘患者氣道上皮細胞中Eot-1 的表達情況

肺癌合并重度哮喘患者氣道上皮細胞中Eot-1蛋白和基因的的相對表達量分別為（16.78±1.23）、（0.74±0.23），分別明顯高于肺癌合并輕中度哮喘患者的（12.12±1.11）、（0.34±0.21），差異均有統計學意義（t=28.126、12.843，P﹤0.01）。

2.2 排痰情況的比較

護理前，對照組和觀察組患者的排痰量分別為（5.15±0.47）、（5.27±0.53），兩組比較，差異無統計學意義（P﹥0.05）。護理后第6天，觀察組患者的排痰量為（10.85±0.34）ml，對照組患者的排痰量為（8.23±0.53）ml，兩組患者的排痰量均多于本組護理前，差異均有統計學意義（t=77.992、31.345，P﹤0.05）；觀察組患者的排痰量明顯多于對照組患者，差異有統計學意義（t=33.026，P﹤0.01）。護理后第6天，觀察組患者Ⅰ度痰液黏稠度的發生率高于對照組，Ⅲ度痰液黏稠度的發生率低于對照組，差異均有統計學意義（P﹤0.05）；兩組患者Ⅱ度痰液黏稠度的發生率比較，差異無統計學意義（P﹥0.05）（表1）。

表1 兩組患者護理后第6 天痰液黏稠度的比較[n（%）]

2.3 呼吸困難、APACHEⅡ評分及肺部感染發生率的比較

護理后，兩組患者呼吸困難、APACHEⅡ評分均低于本組護理前，差異均有統計學意義（P﹤0.05）；護理后，觀察組患者的呼吸困難、APACHEⅡ評分均明顯低于對照組患者，差異均有統計學意義（t=20.980、18.487，P﹤0.01）（表2）。護理后，觀察組患者肺部感染的發生率為1.59%（1/63），明顯低于對照組的14.29%（9/63），差異有統計學意義（χ2=6.952，P﹤0.01）。

表2 兩組患者護理前后呼吸困難、APACHEⅡ評分的比較（±s）

表2 兩組患者護理前后呼吸困難、APACHEⅡ評分的比較（±s）

注：a與本組護理前比較，P<0.05；b與對照組護理后比較，P<0.01

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3 討論

目前，關于肺癌合并支氣管哮喘的發病機制尚需進一步研究。在哮喘患者發病的過程中，其氣道上皮細胞的慢性炎癥易導致細胞發育障礙等，從而可能進一步發展為相關的腫瘤細胞。研究發現，在住院期間的哮喘患者中，肺癌的發生率異常增加[9]。一項對非小細胞肺癌合并哮喘患者進行的研究發現，肺癌的發生、發展與哮喘的嚴重程度存在相關性：肺癌較嚴重者的哮喘相關癥狀較重；治療效果較好的肺癌患者，其哮喘癥狀明顯改善[10]。由此表明，肺癌與哮喘之間存在明顯的相關性。Eot-1在肺癌合并哮喘患者氣道上皮細胞中的表達情況如何；治療和護理干預后，該類患者哮喘等臨床癥狀是否得到明顯的改善，這些均是臨床研究中亟待解決的問題。

為了抵御外來病菌等的侵襲，在機體與環境接觸的過程中存在多道防線，其中，氣道上皮細胞屬于第一道防線，能夠在一定程度上預防微生物、氣體等[11]。氣道上皮細胞通過某種作用活化后，能夠分泌多種趨化因子，如趨化因子CC 型家族等，其中，嗜酸性粒細胞趨化因子屬于CC 家族中的一員[12]。哮喘患者的主要病理特征是嗜酸性粒細胞的浸潤及其嚴重程度與嗜酸性粒細胞的數量存在一定的關系[13]。本研究中以氣管黏膜刷片的方式收集肺癌合并哮喘患者的氣道上皮細胞，結果發現，Eot-1在肺癌合并哮喘患者中呈高表達，其中，在重度哮喘患者中的相對表達量明顯高于輕中度哮喘患者（P﹤0.01），提示，Eot-1 的表達情況一定程度上與肺癌合并哮喘患者的疾病嚴重程度有關。本研究認為，在哮喘發病的過程中，機體吸入的過敏原能夠對機體中肺部的肥大細胞以及相關的淋巴細胞產生活化作用，從而產生相關的炎性因子，如白細胞介素（interleukin，IL）-4、IL-13 等。以上炎性因子進一步對機體肺上皮細胞產生刺激作用，從而分泌大量的Eot-1；Eot-1 再通過選擇性作用與相關受體結合，進一步誘導炎性因子的產生，從而增加支氣管黏膜的浸潤程度，進一步增加組織的損傷程度，最終加深相關疾病的嚴重程度[14-15]。

本研究對對照組患者給予常規護理，對觀察組患者在給予常規護理的基礎上還注重關注患者的疼痛情況、有無負性情緒，從而施行有針對性的護理措施。本研究發現，觀察組患者在常規護理的基礎上予以疼痛關注和心理疏導護理等措施后，患者第6 天的排痰情況、呼吸困難以及肺部感染情況均得到明顯改善。提示在常規護理的基礎上予以心理護理措施能夠更好地輔助患者緩解臨床不適，對于改善肺癌合并哮喘患者呼吸困難等癥狀的效果優于對照組。分析原因是肺癌合并哮喘患者在進行胸部手術后，大部分患者的呼吸功能均受到一定程度的影響，尤其是肺葉切除手術患者。這類患者或因手術后疼痛，或對手術及治療存在不了解而對預后存有懷疑、擔心、恐懼等心理，因此，可能伴有焦慮、抑郁等負性情緒。另外，肺癌合并哮喘好發于老年患者，而大部分老年患者的心肺功能降低，肺容量下降，并且大部分患者可能伴有其他基礎疾病，因此，肺葉切除手術后易出現肺部相關并發癥。因此，此類患者的心理狀態不穩定。可見，對患者予以合理的護理是預后的關鍵。常規護理方式具有一定的護理效果，但缺乏針對性，其內容主要是對癥處理措施，如緩解呼吸道困難、排痰等。而本研究中，在常規護理基礎上，根據觀察組患者的病情及心理狀況予以相關的疼痛關注和心理護理等針對性的護理措施，提高了患者的心理健康水平，使其能更好地恢復身體和配合醫護完成診治內容，因此其效果更理想。

綜上所述，Eot-1 在肺癌合并哮喘患者的氣道上皮細胞中呈高表達，進行針對性的呼吸道護理措施可明顯緩解患者呼吸困難的癥狀，降低肺部感染的發生率，值得推廣。